无菌实验室的管理要求.doc

1、无菌实验室的管理要求食品微生物实验室的无菌间应制定质量管理标准，并设专人负责无菌间的定期环境监测工作。对无菌室的管理可遵循以下的原则：1. 无 菌 室 应 设 有 无 菌 操 作 间 和 缓 冲 间 ， 无 菌 操 作 间 洁 净 度 应 达 到10000级 ， 室 内 温 度 保持 在 20-24 ， 湿 度 保 持 在 45-60%。 超 净 台 洁 净 度 应 达 到 100级 。2. 工 作 人 员 进 入 无 菌 室 前 ， 必 须 用 肥 皂 或 消 毒 液 洗 手 消 毒 ， 然 后 在 缓 冲 间 更 换 专 用 工作 服 ， 鞋 ， 帽 子 ， 口 罩 和 手 套 (或 用

2、70%的 乙 醇 再 次 擦 拭 双 手 )， 方 可 进 入 无 菌 室 进 行操 作 。3. 无 菌 室 使 用 前 必 须 打 开 无 菌 室 的 紫 外 灯 辐 照 灭 菌30分 钟 以 上 ， 并 且 同 时 打 开 超 净 台进 行 吹 风 。 操 作 人 员 进 入 无 菌 室 应 关 掉 紫 外 灯 ；4. 人 员 进 入 无 菌 室 要 穿 无 菌 衣 、 帽 、 口 罩 和 专 用 鞋 ， 非 工 作 人 员 不 得 随 意 进 入 ；5. 无 菌 室 应 备 有 工 作 浓 度 的 消 毒 液 ， 如 5 的 甲 酚 溶 液 ， 70 的 酒 精 ， 0.1 的 新 洁

3、尔 灭溶 液 等 。6. 无 菌 室 内 配 备 紫 外 灯 进 行 空 气 消 毒 ， 应 定 期 用 适 宜 的 消 毒 液 （70%酒 精 或 0.2%新 洁 尔灭 ） 灭 菌 清 洁 ， 以 保 证 无 菌 室 的 洁 净 度 符 合 要 求 。7. 无 菌 室 应 保 持 清 洁 ， 严 禁 堆 放 杂 物 ， 以 防 污 染 。 每 日 进 行 湿 式 小 扫 除 ， 每 周 进 行大 扫 除 ， 每 月 进 行 空 气 和 实 验 台 表 面 的 细 菌 学 检 测 ， 各 项 指 标 控 制 在 最 低 标 准 ，符 合 无 菌 室 的 技 术 要 求 。8. 严 防 一 切

4、灭 菌 器 材 和 培 养 基 污 染 ， 已 污 染 者 应 停 止 使 用 。9. 需 要 带 入 无 菌 室 使 用 的 仪 器 、 器 械 、 平 皿 等 一 切 物 品 ， 均 应 包 扎 严 密 ， 并 应 用 适宜 的 方 法 灭 菌 。10.供 试 品 在 检 查 前 ， 应 保 持 外 包 装 完 整 ， 不 得 开 启 ， 以 防 污 染 。 检 查 前 ， 用70 的 酒 精棉 消 毒 外 表 面 。11.无 菌 间 内 应 保 持 清 洁 。 操 作 完 毕 ， 应 及 时 清 理 无 菌 室 ， 用 2%-3%煤 酚 皂 溶 液 消 毒 ， 擦拭 工 作 台 面 ，

5、不 得 存 放 与 实 验 无 关 的 物 品 。再 用 紫 外 灯 辐 照 灭 菌 。 需 30W 紫 外 灯 ， 距离 在 1.0m 处 ， 照 射 时 间 不 少 于 30min， 使 用 紫 外 灯 ， 应 注 意 不 得 直 接 在 紫 外 线 下 操作 ，以 免 引 起 损 伤 ， 灯 管 每 隔 两 周 需 用 酒 精 棉 球 轻 轻 擦 拭 ， 除 去 上 面 灰 尘 和 油 垢 ，以 减 少紫 外 线 穿 透 的 影 响 。12.处 理 和 接 种 食 品 标 本 时 ， 进 入 无 菌 间 操 作 ， 不 得 随 意 出 入 ， 如 需 要 传 递 物 品 ， 可通 过 小

6、 窗 传 递 。13.无 菌 室 应 每 月 检 查 菌 落 数 。 在 超 净 工 作 台 开 启 的 状 态 下 ， 取 内 径 90mm 的 无 菌 培 养 皿 若干 ， 无 菌 操 作 分 别 注 入 融 化 并 冷 却 至 约 45 的 营 养 琼 脂 培 养 基 约 15ml， 放 至 凝 固 后 ，倒 置 于 30 36 培 养 箱 培 养 48小 时 ， 证 明 无 菌 后 ， 取 平 板 3 5个 ， 分 别 放 置 工 作 位 置的 左 中 右 等 处 ， 开 盖 暴 露 30分 钟 后 ， 倒 置 于 30 36 培 养 箱 培 养 48小 时 ， 取 出 检 查 。10

7、0级 洁 净 区 平 板 杂 菌 数 平 均 不 得 超 过 1个 菌 落 ， 10000级 洁 净 室 平 均 不 得 超 过 3个 菌 落 。如 超 过 限 度 ， 应 对 无 菌 室 进 行 彻 底 消 毒 ， 直 至 重 复 检 查 合 乎 要 求 为 止 。无菌操作基本技术及要求1. 实 验 进 行 前 ， 无 菌 室 及 无 菌 操 作 台 (laminarflow)以 紫 外 灯 照 射 30-60分 钟 灭 菌 ， 以 70%的 酒 精 擦 拭 无 菌 操 作 抬 面 ， 并 开 启 无 菌 操 作 台 风 扇 运 转10分 钟 后 ， 才 开 始 实 验 操 作 。2. 每

8、次 操 作 只 处 理 一 株 细 胞 株 ， 且 即 使 培 养 基 相 同 亦 不 共 享 培 养 基 ， 以 避 免 失 误 混淆 或 细 胞 间 污 染 。 实 验 完 毕 后 ， 将 实 验 物 品 带 出 工 作 台 ， 以70%的 酒 精 擦 拭 无 菌 操 作抬 面 。 操 作 间 隔 应 让 无 菌 操 作 台 运 转 10分 钟 以 上 后 ， 再 进 行 下 一 个 细 胞 株 之 操 作 。3. .无 菌 操 作 工 作 区 域 应 保 持 清 洁 及 宽 敞 ， 必 要 物 品 ， 例 如 试 管 架 、 吸 管 吸 取 器 或 吸管 盒 等 可 以 暂 时 放 置

9、， 其 它 实 验 用 品 用 完 即 应 移 出 ， 以 利 于 气 流 之 流 通 。 实 验 用 品 以70%的 酒 精 擦 拭 后 才 带 入 无 菌 操 作 台 内 。 实 验 操 作 应 在 抬 面 之 中 央 无 菌 区 域 ， 勿 在边 缘 的 非 无 菌 区 域 操 作 。4. 小 心 取 用 无 菌 之 实 验 物 品 ， 避 免 造 成 污 染 。 勿 碰 触 吸 管 尖 头 部 或 是 容 器 瓶 口 ， 亦不 要 在 打 开 之 容 器 正 上 方 操 作 实 验 。 容 器 打 开 后 ， 以 手 夹 住 瓶 盖 并 握 住 瓶 身 ， 倾 斜 约45角 取 用 ，

10、 尽 量 勿 将 瓶 盖 盖 口 朝 上 放 置 桌 面 。5. 工 作 人 员 应 注 意 自 身 之 安 全 ， 须 穿 戴 实 验 衣 及 手 套 后 才 进 行 实 验 。 对 于 来 自 人 类或 是 病 毒 感 染 之 细 胞 株 应 特 别 小 心 操 作 ， 并 选 择 适 当 等 级 之 无 菌 操 作 台(至 少 ClassII)。操 作 过 程 中 ， 应 避 免 引 起 气 溶 胶 类 物 质 的 产 生 ， 小 心 毒 性 药 品 ， 例 如DMSO 及 TPA 等 ，并 避 免 尖 锐 针 头 之 伤 害 等 。6. 使 用 无 菌 瓶 内 的 溶 液 时 ， 不

11、可 将 无 菌 敷 料 堵 塞 瓶 口 倾 倒 无 菌 溶 液 ， 或 直 接 伸 入 溶液 瓶 内 蘸 取 ， 以 免 污 染 剩 余 的 溶 液 。7. 无 菌 包 内 物 品 不 慎 污 染 或 无 菌 包 浸 湿 ， 外 界 微 生 物 可 渗 入 包 内 ， 造 成 污 染 ， 需 重新 消 毒 。8. 戴 手 套 时 应 注 意 未 戴 手 套 的 手 不 可 触 及 手 套 外 面 ， 而 戴 手 套 的 手 则 不 可 触 及 未 戴手 套 的 手 或 另 一 手 套 的 里 面 。 戴 手 套 后 如 发 现 破 裂 ， 应 立 即 更 换 。 脱 手 套 时 ， 须将 手

12、套 口 翻 转 胶 下 ， 不 可 用 力 强 拉 手 套 边 缘 或 手 指 部 分 ， 以 免 损 坏 。9. 每 次 操 作 过 程 中 ， 均 应 做 阴 性 对 照 ， 以 检 查 无 菌 操 作 的 可 靠 性 。10.吸 取 菌 液 时 ， 必 须 用 吸 耳 球 吸 取 ， 切 勿 直 接 用 口 接 触 吸 管 。11.接 种 针 每 次 使 用 前 后 ， 必 须 通 过 火 焰 灼 烧 灭 菌 ， 待 冷 却 后 ， 方 可 接 种 培 养 物 。 12.带 有 菌 液 的 吸 管 ， 试 管 ， 培 养 皿 等 器 皿 应 浸 泡 在 盛 有5%来 苏 尔 溶 液 的 消 毒 桶 内 消 毒 ，24小 时 后 取 出 冲 洗 。13.如 有 菌 液 洒 在 桌 上 或 地 上 ， 应 立 即 用 5%石 碳 酸 溶 液 或 3 的 来 苏 尔 倾 覆 在 被 污 染 处 至 少30分 钟 ， 再 做 处 理 。 工 作 衣 帽 等 受 到 菌 液 污 染 时 ， 应 立 即 脱 去 ， 高 压 蒸 汽 灭 菌 后洗 涤 。14.凡 带 有 活 菌 的 物 品 ， 必 须 经 消 毒 后 ， 才 能 在 水 龙 头 下 冲 洗 ， 严 禁 污 染 下 水 道 。