1、内蒙古农业大学职业技术学院 专业综合技能实训生产设计方案 题目：不同浓度 6-BA 对蝴蝶兰原球茎增殖的影响学 生：*专 业：农艺教育班 级：2008 级指导教师：*职 称：讲师园艺园林技术系2010 年 7 月蝴蝶兰原球茎增殖技术*(内蒙古农业大学职业技术学院 2008 农艺教育甲班)摘要：蝴蝶兰被称为“洋兰皇后” ，因此很有必要在我国进行大量的引进栽植，而进行组织培养又是最有效最快的繁殖方式，所以本次实验就是进行蝴蝶兰的组织培养从而得到最有效增殖速度最快的培养基。我们根据蝴蝶兰对激素 6-BA 浓度的不同要求进行制作不同浓度的培养基以选择出最适合蝴蝶兰增殖的培养基，并进行大量的生产。在此次
2、实验中我们制定了 5 种不同浓度的培养基，既 6-BA 的五种不同浓度，然后将蝴蝶兰的组培无菌苗转接到这五种不同浓度的培养基中，经过一个月的培养，在观察和记录的数据中比较出最适合蝴蝶兰生长增殖的培养基，并经过几次反复的实验在得到证实后，进行大量的生产。关键词: 蝴蝶兰、 6-BA、 增殖引言：兰花是风靡世界的珍贵观赏花卉，属单子叶植物中的兰科。兰科大约有 500 多个属，2 万多个种，为多年生草本植物。除沙漠、极地外，它遍布于世界各地，但大多数种类集中在东南亚、澳大利亚及南美洲、非洲和马达加斯加。兰花以它奇特的外形，绚丽多变的花色，素雅的芳香，优美的叶形，深受各国人民的喜爱 1。蝴蝶兰是兰花的
3、品种之一，它的原生种有 70 多种，原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地。蝴蝶兰属热带气生兰，容易栽培，花形似蝴蝶，形态美妙，色彩丰富，花期长，是近年来最受欢迎的兰花之一 2，因此我们要将蝴蝶兰引进我国，以供人们的欣赏。但是蝴蝶兰依靠种子繁殖其速度较慢，所以人们经过近几年的研究得出蝴蝶兰利用组织培养能加快其繁殖速度，但是在培养过程中使用哪一种培养基的繁殖速度最快还是个未知数，为此我们进行此次试验来配制出一种加快蝴蝶兰繁殖的培养基，以加快蝴蝶兰组培生产在我区的发展。1 技术方案设计1.1 母液的配置按 MS 培养基配方量取各药品的量，溶解后用蒸溜水定容至所需体积。配置好的母液贴
4、好标签放于冰箱。母液编号 种类成分规定量/g扩大倍数 称取量/g 母液体积/mL取母液量/mL1 大量元素 硝酸钾硝酸铵硫酸镁磷酸二氢钾190016503701702020202038337.43.41000 502 氯化钙 332 20 6.64 500 253 微量元素硫酸锰硫酸锌硼酸碘化钾钼酸钠硫酸铜氯化钴22.38.66.20.830.250.0250.0251001001001001001001002.230.860.620.0830.0250.00250.00251000 104 铁盐EDTA 二钠硫酸亚铁37.327.820200.7460.556500 255 维生素甘氨酸盐酸
5、硫胺素盐酸吡多醇烟酸2.00.10.50.5202020204021010500 256 肌醇 肌醇 100 20 2 500 257 6-BA 6-苄氨基嘌呤0.04 500 0.2mg/5ml8 NAA 萘乙酸 0.02 500 0.1mg/5ml1.2 培养基的配制与灭菌量取母液（其中母液一，二在量取过程中要减半）然后用蒸馏水定容至 1L,加入蔗糖 35g/L,琼脂 12g/L,然后用电炉加热至沸腾,调整 PH 值 5.45.5,然后分别加入培养瓶中封口（每瓶液体高度在 1 厘米左右），然后放入高压灭菌锅中,121 摄氏度下1520 分钟,灭菌完毕后冷却凝固即可进行接种。1.3 接种在超
6、净工作台上、无菌条件下接种,接种前接种室消毒灭菌,工作人员消毒,材料消毒,待消毒完毕后将母瓶苗剪取茎叶进行接种,接种后封口。放入培养室进行培养。并做标记，进行观察。1.4 培养1.4.1 初代培养将处理好的花梗放在不同浓度 6-BA 的培养基上培养进行培养 1.4.2 继代培养 致密的愈伤组织接种在 MS+IBA 0.2 mg/L+蔗糖 25g/L+6BA1.0 mg/L， pH 值 5.8的增殖培养基上进行继代培养,进行增殖。愈伤组织首先表现出瘤状突起,然后顶端形成再生芽,形成愈伤组织与芽同时存在的现象。1.4.3 分化与生根培养 将约 2.5 cm 高的芽苗从愈伤组织团块切下,接种到 12
7、MS+6BA 1 mg/L+2,4D0.2 mg/L+蔗糖 25g/L 壮苗培养基中进行培养,团块切成 1 cm3块继续接到继代培养基上增殖培养,4 周后将壮苗转到 1/2MS+IBA 0.2 mg/L+蔗糖 25 g/L+琼脂 6 克/L 中进行生根培养,3 周后长出 3 条4 条根,即可出瓶移.1.5 炼苗先将瓶苗由培养室移至通风明亮的温室,是之适应环境 23 天,然后打开瓶盖向瓶中加入 1 厘米自来水，继续适应环境,逐渐降低湿度,增强光照,3 d 后可移栽。1.6 移栽当瓶苗长出 3 条4 条根,即可出瓶移栽。移栽时轻轻挟出小苗,注意不要挟伤叶片及折断根系.洗净根部培养基,将苗浸泡在 0
8、.5mg/L 的 NAA 药液中 10 小时左右，进行生根培养。再移栽于营养钵内，浇水使根系与基质充分接触。必须注意防止“淹苗”或“浮苗”的现象发生。(“淹苗”即种得太深,使小苗顶心埋于土中而导致烂苗; “浮苗”即种得太浅,根系多数在土表上面导致失水干枯而死)。后即用喷壶浇定植水。移栽基质分别为松针土+桎石(3:2),移栽成活率均可达 90 %以上,红掌苗喜欢高温、高湿环境,适宜生长温度为 2530,相对湿度 90 %以上,移栽透光度保持在 30 %40 %,光照强度 3 000 lx 左右,在移栽棚上方搭遮阳网或用小拱棚搭塑料膜，可达这样的条件。定期浇灌,可有效防止盆土再碱化。隔日用多菌灵进
9、行杀菌消毒。1.7 调查成活率移栽后进行移栽后管理，包括浇水，施肥，病虫害防治等。要定期进行。并进行观察记录。2 日常管理2.1 试管苗移栽管理1.蝴蝶兰喜温暖的气候，耐寒力弱，在 5以下会死亡，冬季在 10以上生长最为适宜，因此冬季应注意防寒，并尽量提高温度湿度。在夏季也要注意降温防暑，如果酷热天气（在 35以上），加之通风不良，也会导致发育不良。 2.蝴蝶兰喜潮湿，忌闷热。湿度应保持在 50%-70%，否则根系发育不良。 3.光照不宜过强，特别在夏秋季节，应遮光 50%-70%，若长时间受阳光直射，叶片会被晒焦枯死。 4.施肥宜使用化学水肥，浓度不宜过高，在生长期应 15-20 天施一次为
10、宜。肥过多、过浓，都会伤害根部。 试管苗出瓶管理 基质准备蝴蝶兰采用水草做基质，水草应蓬松、柔软。将水草浸泡 3 小时，用手拧干后使用。含水量应以手握紧水草，没有水流出为好。 出瓶只要将培养基清理干净就可以了，不用水洗也不用消毒，不要弄伤根部，以免有伤口，病菌容易侵入。若时间长的瓶苗，培养基沾住根，则要清洗、消毒，用杀菌剂泡过一次即可。 定植将小苗用水草包住根，栽入 72 孔托盘，水草的填充量占穴盘体积的 80%即可，采用对角线方向种植。 定植后的管理 新出瓶的小苗 3-5 天内给类似瓶苗的光照，晴天湿度低时需要往叶片喷一些水，但不要给根部浇水太多，否则，一是病菌易侵入，二是水分过多影响根的呼
11、吸作用，新根发育缓慢。若控制好温度和湿度，7-10 天可长出新根，两周后给正常的水分和肥料。 浇水时间依栽培地点的气候而定。 1.太阳下山后不要让叶面有水分。 2.如果没有充足的供暖系统，只靠自然环境，夏天是下午浇水，冬天尽可能上午浇水，水温尽可能接近温室温度，水温和室温相差不能超过 5。 3.夏天接近中午，温度很高可以大量浇水，但不能用喷淋，避免枝叶积水感染生病。 施肥 1.有机肥必须经过发酵，可将磨成粉末的有机肥溶于水，除去沉淀部分，用澄清溶液稀释后浇灌。2.无机肥的氮尽量用氨态氮，磷肥尽量用磷酸根离子，钾肥用磷酸二氢钾，应尽量避免使用含卤族元素的肥料。 开花处理 温度诱导花芽分化的日夜温
12、度均应保持在 25以下，夜温在 20以下效果会更好。日温不低于 20，夜温在 15-18时对蝴蝶兰花芽分化最理想。低温处理后第一个月长出花梗，第二至第三个月开始形成花苞，第四个月开始开花。 春节开花处理若使蝴蝶兰春节开花，必须在 8 月 25 日作低温处理。蝴蝶兰在作低温处理前一个月作高温处理，让兰苗得到一段高温适应，再低温，让它敏感度增强，比较容易抽出花梗。 病虫害防治 软腐病症状为叶基部腐烂，球茎烂，有细菌味。防治方法：于发病初期喷洒农用硫酸链霉素 4000-5000 倍液，每隔 7 天喷 1 次，共喷 2-3 次。 灰霉病症状为花梗和叶背有透明的粘液。防治方法：可用 5%百菌清粉剂 10
13、00-1500 倍液喷雾防治。 菌核病症状先从叶基部产生，病斑淡褐色，水渍状，腐烂，可扩展到全叶；后期在表皮下产生黑色圆形、近圆形的小菌核。防治方法：用 50%多菌灵可湿性粉剂 1500 倍液处理病株。 蛞蝓症状为其偏嗜含水量多、幼嫩的部位，使植物形成不规则的缺刻和孔洞，爬过的地方有白色的粘液带。防治方法：选用 6%蜗牛敌颗粒剂 500 克，混合干沙 15kg，均匀撒施于床面。 红蜘蛛症状为被害叶片初呈黄白色小斑点，后逐渐扩展到全叶，造成叶片卷曲、枯黄、脱落。防治方法：用 25%倍乐霸可湿性粉剂 1000-2000 倍液喷雾；在害虫发生期，用20%灭扫利乳油 2000-3000 倍液均匀喷雾。
14、 2.2 水分管理一、浇水原则与一般盆花的浇水原则相同，蝴蝶兰的浇水应掌握“不干不浇，浇就浇透”的原则，注意掌握干湿交替，一定要等栽培基质干了再浇水，切勿让蝴蝶兰的根系长期处在高湿度、缺少空气的栽培基质中，否则会导致烂根。1、注意浇水时期在实际操作中，可通过“看”和“摸”的方法来了解水草的干湿状态，以决定是否浇水。“看”就是观察栽培基质的颜色。水草或其他基质在水分较干的情况下，颜色会变得较浅，反之较深。“摸”就是用手指直接去触摸水草，了解水草的湿度，只要水草仍有潮气就不一定要浇水。2、注意浇水量给蝴蝶兰浇水时还应注意根据蝴蝶兰苗的大小、生长情况、不同基质、生长季节、天气情况、兰苗的摆放位置(光
15、线及通风情况)、花盆的质地和大小等因素来决定浇水量。一般来说，蝴蝶兰苗由小到大需水量逐渐增大，但耐旱性也随之增强；健壮的苗由于生长旺盛，需水量也大于弱苗；干燥季节需水量相应增加，通风好的摆放位置需水量自然较高。总之，浇水时应当根据影响浇水量的因素来确定浇水量和浇水次数，避免因浇水不当而造成“撑死”或“渴死”两个极端。3、注意水的温度浇水时应注意掌握水的温度，一般以 2023的水温为佳。不要使用过高或过低水温的水来浇蝴蝶兰，尤其是在炎热的夏季或寒冷的冬季，原则就是水温和植株根系的温度、叶面的温度不要相差太大。因此，夏季浇水的时间以 6：007：00 为宜，冬季则在 9：0010：00 浇水最适合
16、。4、避免“隔夜水”浇水时还应避免“隔夜水”。这里所讲的“隔夜水”是指浇水后，叶面上不能及时蒸发的水分。“隔夜水”在夏季容易诱发病菌的侵染，冬季则会造成冻害。因此，如果浇水太迟或由于其他原因而可能产生“隔夜水”时，应当用电风扇吹干或采用其他措施加以解决。蝴蝶兰在不同的季节，水分的管理措施有所不同；栽培基质不同，水分管理方法也有所不同。由于蝴蝶兰的叶片较厚，贮藏有较多的水分，耐旱能力较强。春季空气湿度大，可隔 37 天浇水1 次；在夏秋季，环境温度高，水分蒸发大，通常每 12 天淋水 1 次。而在冬季，气温低，空气湿度小，可一周浇水 1 次，在保证环境一定的湿度条件下，还需避免叶片积水，叶片积水
17、易导致叶片冻伤。若有条件，在浇水后最好能强制通风，使叶面上的积水尽可能散失，以减少病害的发生。蝴蝶兰的浇水方法应当在浇水原则的基础上灵活掌握和运用。当空气湿度太低或气温太高需要降低温度时，可采用喷雾的方式，使用喷雾器或电动加湿器喷雾，使叶面上有细小的水珠，且处于“欲滴而不滴”的状态，达到增加空气湿度或降低温度的效果。小苗初出瓶定植时或刚刚换盆时，栽培管理也可采用这种浇水方法。更多的时候是采用喷壶直接往基质上浇水。当基质过分干燥时，浇水一定要慢慢浇且浇透，使基质充分吸水并有水从盆底流出。使用水草栽培时，若较长时间没浇水，过干的水草一开始恢复浇水时并不容易吸水，基本上是浇了多少水，就流掉多少水。这
18、种情况下浇水应采用少量多次的办法，让水草慢慢吸水，直至完全吸水为止。采用泥炭土栽培时，同样会出现这种情况，浇水时要特别注意。成批种植蝴蝶兰时，总会有部分苗干得较快，因此应当给这部分苗补水，使之同其他苗的水分达到相对一2.3 病虫害的防治病害：蝴蝶兰原生于热带雨林的树木上，不只生长旺盛，而且很少有病害的侵扰，而最重要的病害，便是疫病了，它是由一种真菌侵入植株叶片的组织，而在组织内分裂繁殖，破坏组织的细胞，而这种真菌的分裂繁殖速度极惊人，在短短的二十四小时内，便足以毁灭一株健壮的植株。能侵害蝴蝶兰植株的真菌有Phytophthora PalmivoraPhytophthora Parasitica
19、o，这两种真菌在夏季高温多湿的季节最为猖獗，所有蝴蝶兰的植株也在此季受害最大，所以，前面一直强调栽培环境的重要，一般受真菌感染的病株，刚开始用肉眼可观察得到时，已是墨绿色向光透明的小斑污点，此污体快速很快，若发现蝴蝶兰有这种情况时，需要立即用刀剪去除患部，而去除的面积，需要较污渍点周边各宽 10mm 左右，以防有少部分真菌已侵入良好的组织内，但仍用肉眼无法辨别，所以去除部分必须连带周围的一些好的组织，其去除用的刀剪，刃部在使用前后，皆需用75的酒精消毒，伤口亦用酒精擦拭涂抹，因酒精能烧灼伤口表面的细胞，亦能消灭任何附着于伤口的细菌，经涂抹酒精后的伤口，于第二、三天便可看到一层烧灼干瘪后的白色形
20、成层，这表示受破坏的伤口已无碍了，不再受外来的细菌侵入和伤害。经真菌感染后的株体，其患部用手轻触后表皮即破裂出水，并带有腥味，若真菌感染到叶心部位，这一棵蝴蝶兰需用立即将受感染的部位割除，以求保命，若没有发觉或不在意，那么这一棵蝴蝶兰可能回天乏术，对于普通品种来说，可能不必惋惜，若对于名种，那真的是得不偿失，虽然被割除生长部位的植株，其侧芽也不一定能完全成活，但只要切除后的伤口立即用 75酒精涂抹，一般长出侧芽的机会有七成以上，但在切除患部后，其给水量要减少到最低程度，并将患株置放于光线较弱的地方，以利其侧芽长出。患处经切除后，需妥善处理，以防真菌扩散，最好用火烧掉，或浸于消毒水中，当然，火烧
21、是最经济又省事。虽然经试验，根部无法直径受真菌感染，但却能由叶片或株茎感染至根部。在适当的环境下，整盆的聚合苗，只要有一棵小苗受到感染，而不将其处理，在两三天内整盆的小苗都会受到真菌侵袭，而全部死亡。所以建议用大聚合盆的兰友，需要注意这个缺点。 二、 虫害（含动物及机械性伤害）：最常见的蝴蝶兰虫害有下列数种，但是温室窗户若能外加防虫网，事先预防一些虫害，相信很有效益，预防胜于治疗，如一些纺织娘、蝗虫、蜗牛等体形较大的害虫便不能侵入。1、 介壳虫：介壳虫的种类很多，形状不一，大部分的介壳虫皆会伤害蝴蝶兰，而且都是利用刺吸刺入叶片组织内吸食其营养，所以，被介壳虫伤害的植株，其株体衰弱，叶片黄萎，若
22、不加以防治，到最后植株会因而衰灭。 任何介壳虫，皆可用 50大灭松乳剂 1000 倍液，50马拉松乳剂 800 倍稀释液，并于每公升中加入 1.2高级夏油防治之。介壳虫皆能分泌甜蜜汁，所以有介壳虫的地方，便有蚂蚁，而且蚂蚁以会运输其卵至良好的植株上，使其定居并分泌甜蜜供蚂蚁吸食，若见到植株上有蚂蚁在辛勤耕耘时，便需注意是否有介壳虫的侵入，而且蚂蚁亦能传播细菌疫病，所以要立即用免敌克洒扑杀2、 蚜虫：有大麦蚜 Sitiobion granarium(Kirby)、高粱蚜 Longiumguis sacchari(Zehntner)、豆蚜 Aphis Laburni(Kaltenbach)、玉米蚜
23、 Rhopalosphum maidis（Fitch）等，其防治方法和介壳虫一样，在此不再赘述。3、 蝗虫：有台湾大蝗 Chondracris rosea(De Geer)、背条土蝗 Patanga Succincta(L.)、小蝗 Oxya intricata（Stal）等，能咬食叶片，伤害蝴蝶兰之株体，但其危害程度不大，因为依目前的温室设备，以足够防治蝗虫的侵入，若有此虫害时，可施用免敌克 1000 倍液，或用人工捉除。4、 蛾类幼虫：本虫害发生于春初，任何蛾类皆可能产卵在蝴蝶兰的叶片上，而孵化出小虫来啃噬叶片，所以于春初便要施用除虫菊精来防治，若见到蝴蝶兰的叶片被某种不明虫类啃噬时，需立
24、即做适当的处置，用人工将虫找出捏毙，或喷洒杀虫药剂防治，一般杀虫剂可选除虫菊精或合成除虫菊精使用，以减少杀虫剂对人体的伤害机会。 5、 软体动物：软体动物种类很多，但就蜗牛就让栽培者头疼，凡有见到大小蜗牛或软体动物的踪迹，必须立即施用乙醛诱杀之，以免危害到植株，尤其非洲大蜗牛的食量很大，一个夜晚便可啃噬数棵小苗，损害不浅，所以栽培者需时时注意温室内的动静，谋求对策防治任何虫害。每于雨季的时期内，每隔一个月便施用乙醛于园内各处。3 试验进度计划2011 年 4 月2011 年 5 月 准备阶段：查阅资料，实验设备的准备 2011 年 5 月：配母液，配置培养基，组培接种，培养，记录2011 年
25、6 月2011 年 7 月：继代培养，扩繁，观察记录，整理生产方案2011 年 8 月11 月：炼苗，移栽，移栽后的管理 ，观察记录，完成论文4 经费计算数量 单价 合计椰子 10 个 26 元 260 元苹果 4-5 斤 5 元/斤 20-25 元香蕉 10-20 斤 5 元/斤 25-50 元水费电费5 参考文献1 蔡维藩. 红掌组织培养与快速繁殖J.亚热带植物科学.2002.03.2 张红梅,樊志和,何晓棣等.火鹤的组织培养和快速繁殖J.河北农业科学.1999.02.3 吕复兵 ,王碧青,廖飞雄,朱根发,李卫华;红掌叶片离体培养与植株再生研究 J;广东农业科学;2002 年 06 期4
26、江如蓝 ,张施君,郑迎冬,杨承勇,周厚高;红掌的组织培养和快速繁殖 J;仲恺农业技术学院学报;2002 年 04 期5 黄群声; TDZ 和 CPPU 对红掌快速繁殖的影响 J;亚热带植物科学;2004 年 03 期6 兰芹英 ,李启任,何惠英 ,张艳军,解星云;红掌愈伤组织诱导和芽的分化J;园艺学报;2003 年 01 期7 夏时云 ,麦瑜玲,许继勇,郑添群,林书瀚,黄伟雄;提高红掌叶片愈伤组织诱导和植株分化及壮苗率的技术研究J;中国农学通报;2005 年 02 期8 刘海燕;贵州重要野生观赏植物的引种繁殖和应用栽培技术研究D;贵州师范大学;2007 年9 李枝林,郑丽;红掌研究综述J;云南农业大学学报 ;1997 年 02 期10 费昭雪. 红掌组织培养快速繁殖技术的研究 D西北农林科技大学 , 2006 .11 郑卓辉, 柯宣东;红掌无性繁殖系的组织培养技术J;广东农业科学;1999 年 04 期教 师 评 语指导教师（签名）：年 月 日
