1、HPLC 常见故障分析及日常保养知识,Waters,能引起HPLC发生问题的潜在因素:工作环境电源及地线流动相泵进样器保护柱在线过滤器连接管路色谱柱检测器数据处理装置操作,逻辑判断及处理,问题 化学品环境 仪器*色谱柱/保护柱*电源 *泵*流动相*地线 *进样器*样品*温度 *检测器*湿度 *数据处理单元*清洁程度从最简单,容易之处入手:如 1.停止流速; 2.去掉柱子;,系统冲洗 - 去掉柱子和保护柱，用二通代替1. 检查反压 - 应该为零或者很小;2. 进空白 - 基线应无问题;3. 检查基线状况;,基线问题分析,基线噪声,流动相内含有空气 - 脱气处理检测池内有气泡 冲洗检测池或增强检测
2、出口背压（一般只适用UV检测器)色谱柱内有未洗脱尽的组份 - 洗脱色谱柱系统有漏液之处 - 检漏并处理电噪声 - 去除噪声源, 信号线屏蔽, 检查系统接地状况检测器光源灯能量低 - 更换光源灯检测池污染 - 冲洗检测池,基线周期性噪声,绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良 - 加装混合器电噪声 - 去除噪声源,非周期性噪声,气泡 - 流动相脱气检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压系统有漏液之处 - 检漏并处理溶剂混合不良 - 加装混合器电噪声 - 去除噪声源,
3、基线漂移,梯度系统 - 溶剂A于溶剂B的ABS值相差大 - 试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶避光,密封(但要 注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处 - 检漏并处理环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检测池温度控制环境湿度影 对光检测器有较大影响反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品,基线周期性波动,温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调的影响溶剂混合不良 - 加装混合器流动相脱气不良 - 流动相脱气供电电源的影响 泵不良 检
4、修泵,基线有无规律的尖峰,气泡 - 溶剂脱气电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化光源灯不良- 检查处理电噪声 - 去除噪声源,脱气方法,在线脱气机脱气 氦气脱气真空过滤脱气注意: 溶剂应每天脱气,无样品峰,进样器未进样，样品瓶放置不正确或者未达到所需要样品量泵未工作，没有流速或者流速变小系统漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查 - 泵是否工作, 系统是否漏液, 进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应,负峰,组份的ABS值小于溶剂的ABS值气泡通过了检测池对RI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负
5、峰 软件设置或者是检测器输出与数 据单元连线极性接反,峰形不好 - 如峰拖尾, 峰分叉, 出肩膀,在线过滤器(IN LINE FILTER)污染 (通常会伴随有系统压力升高之现象) 色谱柱污染系统有不正常的死体积- 检查管路连接是否正确- 内径, 接头保护柱(GUARD COLUMN)污染溶剂不好或使用不对样品不好色谱柱坏了- * PH 8 会破坏柱子内的填料 * 流速变化率太大- 操作上应注意,在线过滤器装置,保护色谱柱的其他技术在进样器与色谱柱之间的在线过滤器样品的过滤（不能防护密封圈的脱落物）通过固相提取（SPE）净化样品,干净的过滤芯,脏的过滤芯，反压高,保护柱污染,大多数的色谱柱变差
6、的原因都是污染使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其10,000次进样保护柱应当被认为是延长分析色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲保护柱的填料应该与分析色谱柱一致实际上，设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率,色谱柱问题,双峰 前沿峰,所有的峰都有变化色谱柱连接更换筛板再生或者更换色谱柱色谱柱被破坏pH8, 硅胶基质溶解,色谱峰延展-系统死体积,.009,.020,.040,样品谱带在管路内部扩散,注意: 较长的管路制造了更多的谱带展宽,色谱峰延展-系统死体积,谱带展宽,连接适当,连接不妥,由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题,连接不妥，造成漏液,色谱柱安装及连接的机械因素,色谱
7、柱连接机械因素,不恰当样品溶剂,样品用甲醇溶解,样品用流动相溶解（0.1%TFA。4%ACN以及5% MeOH在水中）,进样体积过载,进样体积对色谱峰形的影响,样品质量过载,当上样量超过一定限度时发生 注意峰起点提前，注意：分析与制备之色谱峰的落点位于相同保留时间,系统峰面积重现性,RT 重现性好, 但峰面积重现性不好 *进样量-选用定量环进样时,进样体积应大于3倍定量管容积;*样品, 气泡;*样品在流动相各组份中不能充分溶解(通常伴随有柱压逐渐升高且经反冲后,柱压会恢复正常之现 象);*基线噪声的影响;*积分处理的影响;*自动进样器消耗品部件磨损,RT重现性差,重现性温度pH控制离子对泵运行
8、,漂移平衡固定相的稳定性色谱柱污染疏水塌陷溶剂组成,工作环境,电源 - 容量，稳定性地线 - 系统统一电源,统一接地清洁 - 不要轻视灰尘的影响湿度 - 特别是近海地区温度 - 空调的影响,一些别的因素,无线装置或于仪器同一供电线路中的高频设备及频繁启动的大功率设备可能会带来噪声干扰载液容器不清洁带来干扰质量不良的化学品或使用不当(如滤膜)带来的影响实验前/后的准备和收尾工作.实验器皿和器械的清洁正确的开机/关机操作,日常检查,泵耐压检查流量检查 - 用脱气的甲醇, 泵后要有约1000PSI的反压 进样器同样进样量的重现性检测器开机自检(CALIBRATION)SE/RE值(UV检测器)定期清
9、洗系统 - 溶剂过滤头, 泵, 进样器, 检测器 清洗方法定期清洁系统 - 除尘 清洁电路时,需注意人身安全及防止静电损坏电路板,Alliance 2695/e2695,Alliance 泵流路,泵流路,泵头活塞组件,泵头密封圈及清洗密封,注意：更换密封组件前应使用甲醇充分浸泡,Alliance比例阀及脱气系统,注意：标配脱气机不能使用在正相流动相中,Alliance 进样系统,5个盘，每个盘24位5个盘不能互换保持样品式清浩,请使用Waters标准进样瓶,进样注射器，标配250ul,疲劳后影响重现性,Alliance 进样针部件,老式进样器部件保持滑杆清洁，必要时可以添加润滑油,新式进样器部
10、件,进样针擦洗部件,污染后进样残留，更换,正常情况: 每年更换一次易损件经常使用高浓度的缓冲液: 建议每6-9月更换一次易损件 易损件包括: 柱塞密封圈，清洗密封圈，柱塞杆，在线过滤芯，单向阀，进样器密封，进样针，注射器,保养与维护,Bubble found on compression压缩比超过1.5倍以上出现错误Wet Primer 系统流动相脱气，打开在线脱气机检查溶剂过滤头，清洗或者更换检查单向阀，清洗或者过滤,Alliance 常见故障,Lost prime系统压力长时间低于25PSI出现错误 Wet Prime 系统 清洗单向阀 更换单向阀,Alliance 常见故障,Plunge
11、r homing over pressure柱塞复位时超压在线过滤堵，清洗过滤芯更换在线过滤芯泵出口管路堵塞，更换管路,Alliance 常见故障,Needle Malfunction针故障，进样针未到达指定位置清洗进样针部件滑杆，去除灰尘添加润滑油机械故障，打Waters 800电话,Alliance 常见故障,2487/9 UV检测器,检测器光路装置,Peak not found: 656 nm Deuterium设备传感器无法确定 656纳米峰冲洗流通池，重新校正重新开机能量低尝试更换灯其它光路问题，需要维修,UV检测器常见故障,Lamp data not foundSystem not calibratedMethod not found电池耗尽，更换电池操作时注意断电，防止静电损坏仪器,UV检测器常见故障,开机过程中反复重启电源线老化，断电情况 下反复插拔几下5V电压偏低，调整电压 R43到 5V左右，不能超 过5.2V,检测器自动重启,提问,谢谢大家,
