1、 哈尔滨恒泰克生物技术有限公司Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd.地址：哈尔滨市南岗区汉广街 41号金华大厦 321室 电话/传真：0451-51818368E-mail：hljhtk 邮编：150000地塞米松（DEX）ELISA 检测试剂盒说明书（编号：HITEK E.DEX001）一、 概述地塞米松 (DEX)是应用广泛的抗菌素， 对家禽疾病控制和治疗起到重要作用。但长期使用会导致许多细菌对地塞米松药物产生耐药性，且有潜在的致癌性。地塞米松酶联免疫试剂盒具有方便，快速，灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。 本试剂盒是应用 ELISA 技术研发而
2、成的检测产品，操作时间仅需 80 分钟，试剂盒灵敏度为 0.05ppb，线性范围为 0.05ppb4.05ppb。二、 原理本试剂盒采用间接竞争法。酶标板上包被的抗原与加入的校准品（或样本）中的抗原竞争结合加入的抗体。洗去多余的抗体，加入酶结合物与抗体结合，洗去多余酶结合物，用 TMB底物显色，样本吸光值与其残留物地塞米松负相关，与校准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中地塞米松的含量。三、 适用范围可定性定量检测鸡肉样等样本中地塞米松的残留量。 四、 试剂盒技术指标试剂盒灵敏度： 0.05ppb检测线性区间： 0.05ppb4.05ppb样本最低检测限：鸡肉 0.1ppb回收率：
3、鸡肉80%120%五、 试剂盒组成1. 酶标反应板：96 孔微孔板（12 条8 孔规格） 2. 地塞米松校准品： 1mL/瓶7 瓶 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05、50ppb3. 抗体工作液： 7mL/瓶1 瓶 蓝色盖 4. 酶结合物： 11mL/瓶1 瓶 红色盖 5. 底物 A 液： 7mL/瓶1 瓶 .红色盖 6. 底物 B 液： 7mL/瓶1 瓶 黑色盖 7. 终止液： 7mL/瓶1 瓶 黄色盖 8浓缩洗液（20）50mL/瓶1 瓶 透明盖9. 浓缩复溶液（2）50mL/瓶1 瓶 透明盖10. 其他： 说明书说明书1 份；封板膜2 张；
4、自封袋2 个 六、 实验需要但试剂盒未提供的试剂和仪器1. 仪器微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量 0.01g） 、涡旋仪、刻度移液管2. 微量移液器：单道20L200L、100L 1000L 、多道 250L3. 试剂：氯仿、正己烷、去离子水。七、样本前处理步骤(一) 样本处理前须知1. 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。2. 实验前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结果。（二） 样本前处理需配制如下溶液样品复溶液：把浓缩复溶液（2）按 1份浓缩液+1份去离子水稀释。哈尔滨恒泰克生物技术
5、有限公司Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd.地址：哈尔滨市南岗区汉广街 41号金华大厦 321室 电话/传真：0451-51818368E-mail：hljhtk 邮编：150000（三） 样本前处理方法组织（鸡肉） （处理方法与喹喏酮类、磺胺通用）1、 称 10.05g 均质过的组织样本于 50ml离心管中；加入 8ml氯仿，振荡 2min，4000r/min 以上，25离心 10min； 2、 取 4ml 清澈有机相至玻璃试管中，50-60氮气或空气吹干； 3、 用 1ml 样本复溶液溶解干燥的残留物，加入正己烷 2ml。混合 30s，2000r/
6、min 25离心7min； 4、 取下层 100l液体用于分析。 样本稀释倍数: 2 倍 （四） 样品的保存1. 未处理的样品冷冻保存。2. 处理好的样本在 28避光保存 24 小时。八、酶标免疫分析程序1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（2025）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2. 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔条放入自封袋，保存于 28。3. 配洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（20）按 1：19 体积比进行稀释。即 1 份浓缩洗涤液（20 ） 19 份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在 4环境下可保存一个月。4. 加校准品/样本 100L/孔
7、到各自的微孔中，然后加入抗体工作液 50L/孔，用封板膜封板，轻轻振荡混匀，25环境反应 30min。5. 取出微孔板，甩出孔内液体，用去离子水按250L/孔洗板 4次，每次浸泡 30秒，在吸水纸上拍干。6. 加酶结合物 100L/孔，用封板膜封板，轻轻振荡混匀，25环境反应 30min。7. 取出微孔板，甩出孔内液体，用去离子水按250L/孔洗板 4次，每次浸泡 30秒，在吸水纸上拍干。8. 显色：每孔加入底物 A液 50L，再加底物 B液 50L，轻轻振荡混匀，25环境下避光显色 15min。9. 测定：每孔加入终止液 50L，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm处（建议用双波长 450
8、/630检测，在 5min内读完数据） ，测定吸光度值(OD值)。九、结果判定结果判定有两种方法，粗略判定可用第 1 种方法，定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光值与其所含的地塞米松含量呈负相关。1. 粗略判定用样品的平均吸光度值与校准值比较，可得出样本所含地塞米松浓度范围（ppb） 。假设样品 1 的吸光度值为 0.339，样品 2 的吸光度值为 1.153，校准品吸光度值分别是：0ppb 为 1.839； 0.05ppb 为1.345；0.15ppb 为 0.926；0.45ppb 为 0.452； 1.35ppb为 0.156。则样品 1 的浓度范围是0.45ppb1.35ppb；样品
9、 2 的浓度范围是0.05ppb0.15ppb，再乘以其对应的稀释倍数即为样本中地塞米松的实际浓度。2. 定量分析所获得的每个浓度校准溶液和样本吸光度值的平均值（B ）除以第一个校准品（0 校准品）的吸光度平均值（B 0）再乘以 100%，即百分吸光度值。B百分吸光度值（% ） B0 100%B校准品溶液或样本溶液的平均吸光度值B00ppb 校准品溶液的平均吸光度值以校准品百分吸光率为纵坐标，以地塞米松校准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中地塞米松实际浓度。若利用试剂盒专业分析软件
10、进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。哈尔滨恒泰克生物技术有限公司Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd.地址：哈尔滨市南岗区汉广街 41号金华大厦 321室 电话/传真：0451-51818368E-mail：hljhtk 邮编：150000十、注意事项1. 用前将所有试剂温度回升至室温 2025。2. 用之后立即将所有试剂放回 28冰箱。3. ELISA 分析中的重现性很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板程序操作是 ELISA 测定程序中的要点。4. 所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用封板膜封住微孔板。5. 室温低于 25或试剂及标本
11、没有回到室温（2025）会导致测定的 OD 值偏低。6. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不呈线性、重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。7. 试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。8. 反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。9. 不要使用过了有效期的试剂盒，稀释或掺杂使用不同批号的盒中试剂。10. 不用的微孔板放进自封袋重新密封，校准品和底物对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。11. 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 校准品的吸光度值小于 0.5 时，表示试剂可能变质。12. 该试剂盒最佳反应温度为 25，温度过高或过低将导致吸光度值和灵敏度发生变化。十一、 储藏条件和保质期储藏条件：试剂盒于 28保存，不要冷冻。保 质 期：该产品有效期为 12 个月，生产日期见包装盒。
