1、0石河子大学小学期制实验结课论文阿司匹林的质量标准、姓名：王义西班级：药学（3）班学号：2010515073指导老师：李乐日期：2013 年 9 月 3 日1乙酰水杨酸抗炎药物的分析王义西石河子大学药学院小学期药学第三组第三实验组摘要 阿司匹林，化学名为 2-( 乙酰氧基) 苯甲酸，作为主要的解热镇痛抗炎药收载于中国药典 (2010 年版)二部，临床上主要用于治疗感冒发烧, 牙痛、肌肉痛及神经痛等慢性疼痛，急、慢性风湿病及类风湿病等, 是风湿、类风湿关节炎治疗的常用药物。本品主要的副作用是引起幽门痉挛及刺激胃黏膜的胃肠道反应, 长期服用导致胃肠出血。随着现代药学技术的发展，目前已有片剂、肠溶片
2、、肠溶胶囊、泡腾片和栓剂等多种剂型，以阿司匹林为主药的复方制剂也层出不穷，形成了阿司匹林含量测定方法的各异性。随着科学技术的进步，各种仪器设备、新方法也应用到了阿司匹林的鉴别、杂质检查、含量测定中，本文对其作一综述。关键词: 阿司匹林 鉴别 杂质检查 含量测定 HPLC 紫外分光光度法 TLC阿司匹林临床上主要用于治疗感冒发烧, 牙痛、肌肉痛及神经痛等慢性疼痛，急、慢性风湿病及类风湿病等, 是风湿、类风湿关节炎治疗的常用药物。本文主要对阿司匹林做一综合论述，通过对阿司匹林的性状、鉴别、杂质检查、含量测定四个方面对乙酰水杨酸进行药物分析。1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器：紫外分光光度计（Cin
3、tra404,GBC） 、电子天平（AB135-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司METTLER TOLEDO） 、微孔滤膜（尺寸25mm ，孔径0.8，上海半岛实业有限公司净入器材厂）高效液相色谱仪、紫外检测器、自动进样器、色谱数据处理机、U V 一26 0 分光光度计、HPLC 色谱柱、 超纯水器、展开槽、水浴锅、研钵、移液管（1、2、5、10ml） 、吸耳球、容量瓶（25、50、100ml） 、烧杯（10、100、500ml） 、胶头吸管、直尺试剂：复方乙酰水杨酸片（25mg/片）：阿司匹林贮备液溶液（1 .5368mg/ml） 、无水乙醇、氯仿、丙酮、冰醋酸、甲醇、95%乙醇、酚酞
4、指示液、碳酸钠试液，稀盐酸、稀硫酸、2三氯化铁试液、乙醚、硫酸铁铵试液（新制） 、蒸馏水1.2 性状阿司匹林为白色结晶或结晶性粉末；遇湿气即缓缓水解。在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或无水乙醚中微溶，在氢氧化钠或碳酸钠中溶解，但同时分解。酸性：阿司匹林分子结构中具有邻为取代苯甲酸结构，故具有酸性。水解性：本类药物分子结构中具有酯键，可发生水解。吸收光谱特性：本类药物中有苯环和特征取代基，均具有紫外和红外特征光谱。1.3 鉴别试验1.3.1 与三氯化铁反应取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林 0.1g） ，加水 10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液 1 滴，即显紫堇色。1.3.2 薄层色
5、谱鉴别样品溶液的制备复方乙酰水杨酸片 取复方乙酰水杨酸片1片，研细，加氯仿15mI，振摇溶解，滤过，滤液作为样品溶液。空白溶液的制备复方乙酰水杨酸片 取片剂辅料(按生产厂家提供的一片处方量称取)加氯仿15mI，振摇后滤过，滤液作为空白溶液。乙酰水杨酸对照品溶液的制备复方乙酰水杨酸片 称取水杨酸对照品适量，加氯仿制成每1ml中含水杨酸10mg的单一对照品溶液。制法：复方乙酰水杨酸片 照薄层色谱法 精密量取乙酰水杨酸标准品溶液、乙酰水杨酸对照品溶液各5 ul，点于同一硅胶薄层板上，以氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(27：18：1：2)为展开剂，展距为10cm，展开后，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。
6、样品溶液所显的1个斑点的位置与颜色分别与相应的对照品溶液所显的斑点一致，均显暗黄色。乙酰水杨酸Rf一085。1.4 杂质检查比色法 乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查取本品 0.1g，加乙醇 1ml 溶解后，加冷水适量使成 50ml 立即溶液 1ml（取 1mol/L 盐酸液 1ml 加稀硫酸铁铵 2ml 后，再加适量使成 100ml 摇匀， 30 秒钟内）。如颜色与对照液（精密称取水杨酸 0.1g，加水溶解后，加冰醋酸 1ml，摇匀，再加水使成 1000ml，摇匀）精密量取 1ml，加乙醇 1ml，水 48ml 与上述新制的硫酸铁铵溶液 1ml，摇匀比较。不得更3深（0.1%）。1.5 含量测定1
7、.5.1 水解后滴定法乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为 0.2090.231g。精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸 0.4g），置分液漏斗中，加水 15ml，摇匀，用氯仿振摇提取 4 次（20,10,10,10ml），提取氯仿液用同一份水 10ml 洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml 溶解后，加酚酞指示液 3 滴，用 0.1mol/L 氢氧化钠液滴定，即得（每 1ml 0.1mol/L 氢氧化钠液相当于 18.02mg的 C9H8O4）。按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数g/片=（T Vf/W 称样量）平均片重1.5.2 高
8、效液相法测定阿司匹林含量色谱条件：ODS 为填充剂， 流动相：甲醇-冰醋酸-水（8:4:1）检测波长：276nm理论塔板数不低于 3000流速:0.8ml/min柱温: 室温测定方法：精密称取 2.1864g 药品，置 50ml 容量瓶中，加 1%冰醋酸的甲醇溶液适量，在40-50 摄氏度的水浴中充分振摇使阿司匹林溶解，放冷，用 1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品贮备液，再量取贮备液 5ml，置 100ml 容量瓶中，用 1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔过滤膜过滤，进样，记录色谱图。取阿司匹林对照品，精密称取 10mg。置于 100ml 容量瓶中，用 1
9、%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，同法测定。标示量=（Cr*Ax/Ar*D*W ）/(W*标示量）*100%1.5.3 紫外分光光度法平 行 称 量 样 品 101.0mg、 101.8mg、 106.0mg， 分 别 用 无水乙醇溶 解 ， 定 容 至 50ml容 量 瓶 中 即 得 。 设 定 好 参 数 后 ， 转 换 进 入 计 算 模 式 。 先 进 行 空 白 调 零 ， 分 别 对 3 个不 同 浓 度 的 样 品 溶 液 进 行 3 次 平 行 检 测 。标 示 量 =A*D*W*1000/E*100*W*B*100%2 结果与讨论2.1 鉴别2.1.1 阿司匹林与三氯化铁试液在加
10、热条件下反应生成紫堇色。42.1.2 阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，产生醋酸的臭气。2.1.3 薄层色谱 阿司匹林标准品：Rf=5.1/7.30.699阿司匹林供试品：Rf=5.0/7.30.685两者的 Rf 值基本接近，由此可得供试品中含有阿司匹林。2.2 杂质检查2.2.1 比色法 如图所示:左: 标准品 右: 供试品2.3 含量测定 2.3.1 两步滴定法 g/片=（T Vf/W 称样量 ）平均片重=(18.02mg/ml 22.1ml1/0.9162g)0.5039g=0.219g/片2.3.2HPLC 法含量测定（图见附件 1）5标示量=（C
11、rAx/ArDW）/(W 标示量）100%=1015652470.5039/100413165330.2=(782623.5 /826330.66)100%95.0%2.3.3 紫外分光光度法计 算 得 平 均 标 示 量 B%=3.09%。 药 典 规 定 制 剂 规 格 范 围 为 95%-105%， 所 以 该 药 品不 合 格 。本品不合格可能的原因：在制备样品时，样品未完全溶解；样品制备后没有立即测量，可能有样品分解。3 结论3.1 鉴别实验3.1.1 与三氯化铁反应 本方案设计加热使阿司匹林水解成水杨酸，水杨酸在中性或弱酸性条件下加热与三氯化铁试液反应，酚羟基与三价铁结合生成紫堇色
12、铁配合物。实验结果出现了如上陈述的紫堇色。说明供试品中含有阿司匹林。3.1.2 水解反应 本方案利用的是阿司匹林的水解反应，但在实验操作后只出现了气泡和醋酸的臭气，并未析出白色沉淀。分析实验失败的原因有以下四点：实验室准备的稀硫酸经 PH 试纸测试为深红色，表明并不是符合实验使用的稀硫酸，浓度较高；所取用的药片中阿司匹林含量较少，加热水解后产生的水杨酸就会相应的更少；水解不充分致使生成的水杨酸很少，无法产生明显可见的白色沉淀。3.1.3 薄层色谱法 TLC 法为鉴别阿司匹林方法中最优先选择的鉴别方法，本实验结果标准品与供试品试液的 Rf 值极其相近，说明供试品中含有阿司匹林。3.2 杂质检查3
13、.2.1 比色法 阿司匹林的杂质检查采用了较常用和主观的比色法，由上图所示，左（标编号 浓度（mg/ml） A（平均值） 标示量 B1 2.016 0.6526 2.94%2 2.026 0.6832 3.07%3 2.114 0.725 3.26%6准品）颜色比右（供试品）颜色深，供试品颜色不得比标准品颜色更深，说明供试品中的杂质限量符合药典规定，为合格品。3.3 含量测定3.3.1 水解后剩余量滴定法 水解后剩余量滴定法利用阿司匹林酯键在碱性环境下易水解的特性，加入估量的氢氧化钠滴定液，加热水解酯键后，再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液。实验结果计算所得阿司匹林的平均片重为0.219
14、g，而使用的药片的规格为0.2g，说明所测定的阿司匹林的含量合格。3.3.2 HPLC法 HPLC法测定阿司匹林含量的色谱图见附件一，将原来高浓度的试液稀释了10倍和100倍再进针后，色谱图较之前更理想，面积%的值高达100% ，说明所测供试品中杂质含量减少，相应阿司匹林的含量较高。数据处理的结果百分标示量约为95%，则表明供试品的阿司匹林含量合格。由于制剂的含量限度较宽，因而对于制剂的含量测定方法应以专一性为主，可更好地测定制剂的成分，以便更好的控制质量，而HPLC法可以满足所有的要求。故我组采用了专一性与精确度都较好的HPLC法测定阿司匹林的含量。3.3.3 紫外分光光度法 利用紫外分光光
15、度法进行阿司匹林的含量测定，计 算 得 平 均 标示 量 B%=3.09%。 药 典 规 定 制 剂 规 格 范 围 为 95%-105%， 所 以 该 药 品 不 合 格 ，说明实验失败，分析失败的原因有：在制备样品时，未完全溶解；样品制备后没有立即测量，可能有样品分解；过滤不充分，仍有杂质残存，影响测定仪器操作不当。实验心得：通过本次试验，使我更加深刻的了解了药物分析的全部过程，对一个药物质量的评定，首先通过鉴别，再通过杂质检查，最后含量测定，每一步都特别关键。我们组实验的完成靠的是我们大家的一起动手，一起思考，团结在一起。实验过程中也遇到了很多的问题，这时候就需要我们冷静的思考，哪里出现
16、了问题，是药品不对还是方法不对，如果一个方法分析三次而且做了三次，还是有很大的问题，我们会选择另一个方案，并且努力去分析上次实验的错误点。在紫外分光光度法含量测定实验中，我们小组就遇到了很大的麻烦，连着做了四次，吸光度一直都在 1 以上，出现相同的错误。最大原因就是前面没有认真思考，只是盲目的在做。后来询问了老师，也分析出了原因。7在做高效液相色谱分析法前，因为我们小组了解到前面小组做很多次都是失败，于是在做此 HPLC 法之前我们就去了解别的小组失败的原因，他们的溶剂试剂，流动性成分及比例。等全部了解完之后，再开始动手，结果一次性成功了，我们出的峰（见附件一）很理想，第一个样品的峰可能由于杂
17、质太多，出的峰也比较多。后来我们给样品稀释，分别稀释 10 倍和 100 倍。使杂质浓度减少，出的峰更是理想。实验中需要我们严谨的态度，发现问题要耐心分析。感受实验的过程，让自己通过一次实验真正有所收获。参考文献1 朱景申.药物分析/国家执业药师资格考试应试指南M.西安:中国医药科技出版社,2000.163-167.2 何英梅,贺军权.小剂量阿司匹林肠溶片含量测定商榷J.中国药事,2005,19(2):110-111.3 国家药典委员会.中国药典S.二部.北京:化学工业出版社,2005.283-2848附件一阿司匹林 HPLC 色谱图标准品 HPLC:0. 0.5 1.0 1.5 2.0 2.
18、5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5. 6.0 6.5 min0100200mV器器 A:276nm 1/41316533峰# 保留时间 面积 面积% 分离度 拖尾因子 理论塔板#1 2.618 41316533 100 0 0.695 800.0639样品 HLPC：1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10. 1.0 12.0 13.0 14.0min0255075mV器器 A:276nm 2/30943/15652474/364255/218066/137817/245768/11850 9/103398峰# 保留时间 面积 面积% 分离度 拖
19、尾因子 理论塔板#1 0.356 9392 0.5248 0 1.726 17.8022 1.425 3094 0.1729 2.158 0 76.3073 2.62 1565247 87.465 2.55 0.753 1350.5164 3.535 36425 2.0354 0.861 0 59.0565 3.959 21806 1.2185 0.186 0 33.9576 4.399 13781 0.7701 0 0 07 4.85 24576 1.3733 0 0 10.6738 5.506 11850 0.6622 0.159 0 89.6759 7.587 103398 0.5778
20、 1.455 1.026 3204.758100. 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5. min025507510125mV88291010909稀释 10 倍后样品 HPLC0. 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 min025507510125mV9318 130989106稀释 100 倍后样品 HPLC峰# 保留时间 面积 面积% 分离度 拖尾因子 理论塔板#1 2.083 8829 0.8658 0 0 1258.8322 2.657 1010909 99.1342 2.24 0.975 1470.222峰# 保留时间 面积 面积% 分离度 拖尾因子 理论塔板#1 2.218 9318 1.0333 0 0 1458.9012 2.525 1309 0.1451 0.687 0 234.3723 2.793 891066 98.8215 0.571 0.978 1617.386
