1、 连环素和 连环素在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义【摘要】 目的 探讨 连环素( cat) 和 连环素( cat)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与 NSCLC 的发生、发展及临床预后的关系。方法 应用免疫组化法，观察 43 例 NSCLC 患者及 7例正常肺组织中的 cat和 cat的表达。结果 在 43 例 NSCLC 中， cat和 cat的异常表达率分 别为 72.1%和 65.1%； cat、 cat异常表达与不同病理分级间和淋巴结有无转移均有显著性差异(P0.05)； cat和 cat异常表达者的生存 时间明显少于正常表达者， cat 异常表达具有独立的预后意义(P0.0
2、5，相对危险度RR=0.330)。结论 cat和 cat表达与 NSCLC 的发生、发展及预后关系密切，可作为评估 NSCLC 进展及预 后的指标。 【关键词】 肺肿瘤； 连环素； 连环素；免疫组织化学ABSTRACT: Objective To investigate the expressions of catenin ( cat) and catenin ( cat) and their relation with development and prognosis of non small cell lung cancer (NSCLC). Methods Expressions of
3、 cat and cat were immunohistochemically studied in 43 specimens of NSCLC and 7 cases of normal lung tissues. Results Of the 43 NSCLC cases, the abnormal rate of cat and cat expression was 72.1% and 65.1%, respectively. Differentiation and lymph node involvement had a significantly positive correlati
4、on with abnormal expression of cat or cat (P0.05). The survival time was significantly shorter in patients with cat or cat abnormal expression than in those with normal cat or cat expression. cat could serve as an independent prognosis factor (P0.05). Conclusion The expressions of cat and cat are cl
5、osely correlated with the occurrence, development and prognosis of NSCLC. cat and cat may be used as indicators for development and prognosis of NSCLC.KEY WORDS: lung neoplasm; catenin; catenin; immunohistochemistry上皮细胞钙依赖黏附分子 E 钙黏素(E cadherin) 主要介导上皮细胞之间的连接和黏附，E cadherin 主要位于细胞膜上，与细胞膜内侧的连环素 、结合成复合体
6、，E cadherin catenin(E cad cat) 复合体中任何组分结构和功能的异常均会影响细胞的黏附性1。近年来发现 E cad cat复合体功能异常与 恶性肿瘤的侵袭转移、预后密切相关2 。为此，我们应用免疫组化方法观察了 cat、 cat在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达，并探讨其表达与 NSCLC 发生、发展及预后的关系。1 资料与方法1.1 材料 选取西安交通大学医学院第一附属医院 19941999 年经根治性肺癌切除、术后病理证实的 NSCLC 石蜡包埋组织标本 43例，其中男性 35 例，女性 8 例，男女之比 为 4.381；年龄 3277 岁，平均 58.7 岁；
7、生存期最长的为 72 个月，且继续存活，最短于术后 3 个月死亡，死亡原因均系肺癌及相关疾病或并发症。所有病例术前均未行放疗和化疗，无其他疾病及并发症。病理类型：腺癌 26 例，鳞癌 17例；分化程度：、级 24 例，级 19 例。 临床分期(pTNM)：期 10例，期 17 例， 期 16 例。 29 例伴有区域淋巴结转移。正常对照取7 例正常肺组织，男性 5 例，女性 2 例。1.2 试剂 及方法 cat和 cat单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司，PV6000PicTureTM 通用型试剂盒为美国 Zymed 公司产品。本实验采用免疫组化 PicTureTM 通用型二歩法，石蜡标本常
8、规切片，脱蜡至水，30mL/L 甲醇双氧水阻断内源性过氧化物酶活性，微波炉修复抗原，每张切片滴加 170 鼠抗人 cat或 cat第一抗体80L，置湿盒中室温下孵育 120min，PBS 液洗涤后滴加即用型PV6000 PicTureTM 通用型试剂，室温下孵育 30min，DAB 液中显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明后封片。阳性对照采用已知的表达 cat、 cat的正常支气管黏膜切片，空白对照采用 PBS 代替一抗。1.3 结果判定标准 免疫组化阳性反应为棕黄色或黄色细颗粒状着色。 cat 和 cat正常染色均定位于细胞膜，表现为细胞膜呈均匀线性棕黄色染色，无胞质及胞核染色(图 1
9、)。异常染色表现为细胞膜染色减少和(或) 细胞质、胞核染色(图 1)。依阳性细胞百分比和染色分布综合判断分析。每例切片在 400 倍光镜下随机找 510 个视野，数100200 个细胞，共 1000 个癌细胞，记录阳性细胞的百分数和染色特征。如果90%的肿瘤细胞染色为正常染色时为正常表达；如果正常染色的肿瘤细胞数90% 为异常表达3。1.4 统计学处理 所有统计学分析采用 SPSS 10.0 统计软件包完成。 cat 和 cat的表达采用卡方检验和 Fisher 精确概率法；组间相关性用 Kendall s tau b秩相关检验；各因素对生存的影响采用Log Rank检验，生存期按 Kapla
10、n Meier方法制作累计生存曲线；影响预后的多因素分析采用 Cox 比例风险模型。结果均以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结 果2.1 cat和 cat在正常肺组织及 NSCLC 中的表达 cat及 cat在正常肺组织中无异常表达。43 例 NSCLC 中 cat及 cat异常表达率分别为 72.1%(31/43)和 65.1%(28/43)。两种蛋白异常表达率在正常肺组织和 NSCLC 间经统计有统计学意义(P0.05，Fisher 精确概率法)。2.2 cat和 cat在 NSCLC 中的表达与临床参数的关系 在病理分级、级分组中 cat和 cat的异常表达率分别为 58.3%和5
11、0.0%，级分组中 cat和 cat的异常表达率分别为 89.5%和84.2%，不同的病理分级分组间两种蛋白的异常表达率均有 显著性差异。 cat 和 cat在伴有区域淋巴结转移组的异常表达率明显高于无淋巴结转移组(表 1)。表 1 cat和 cat在 NSCLC 中的表达与临床参数的关系2.3 cat和 cat的表达与 NSCLC 预后的关系 cat正常表达者和异常表达者的中位生存时间分别为 35 个月和 19 个月，结合Kaplan meier生存曲线可以看出 cat异常表达患者生存期明显缩短(Log Rank 检验 P=0.0189，图 2)； cat正常表达者和异常表达者的中位生存时间
12、分别为 35 个月和 16 个月， cat 异常表达患者生存期明显缩短(P=0.0265， 图 3)。进一步行 Cox 比例风险模型分析，表明 cat的表达水平具有独立的预后意义(P=0.004，相对危险度RR=0.330)。2.4 cat和 cat在 NSCLC 中表达的相关性 43 例 NSCLC中，有 11 例同时正常表达 cat和 cat， cat和 cat表达具有明显的正相关性(r=0.741, P0.01)。3 讨 论E cad cat 复合体是 细胞间黏附和上皮组织整合的主要递质。 cat一端与 cat或 cat结合，另一端与肌动蛋白细胞骨架结合，将由 E cad传递进来的信号传
13、导到细胞骨架上而 发挥作用，它是E cad cat复合体的锚 定成分，对复合体的稳定和功能是必需的，在E cad介导的细胞黏附中起关键作用4 。因此，即使 E cad、 cat的表达正常，如果 cat异常表达，仍不能介导细胞间的正常连接。没有 cat表达的肿瘤 细胞不能紧密聚集5，并具侵袭表型6。国外一些学者研究发现 E cad、 cat表达状况与恶性肿瘤分化程度、临床分期、转移发生及其预后有密切关系，表达失常或缺失的恶性肿瘤多分化差、分期高、转移及预后差7。KIMURA 等8认为 cat表达减少的 NSCLC 更容易发生淋巴结转移且预后较差。TANAKA 等9在对 159 例口腔鳞状细胞癌的
14、研究中发现 cat的减少同淋巴结转移关系密切。本结果表明，正常肺组织与 NSCLC 相比 cat异常表达率有显著性差异， cat 表达与 NSCLC 病理分级和淋巴结转移关系密切，本结果与国外学者在恶性肿瘤中报道的结果一致。可以推测,在 NSCLC 早期可能已发生 cat表达下调 ，并随着 肿瘤的演进而加重，癌细胞可因 cat表达缺失或下调获得一定的“ 自由”，为其进一步的浸润和转移提供了必要的分子基础。 cat 不但连接 E cad形成 E cad cat功能复合体，成为E cad黏附系统中的重要环节，而且还通过 与 APC 蛋白连接，构成第二种非 cad 依赖的独立的 cat复合体,共同影
15、响细胞间的黏附、运动。同时， cat也是 Wnt 途径信号传导过程中的关键环节10 。 cat结构和功能异常一方面使肿瘤细胞间 黏附作用减弱，瘤 细胞迁移能力增加，另一方面刺激瘤细胞的增殖，这均有利于肿瘤浸润转移。YOSHIDA 等11进行的 171 例原发性浸润型乳腺癌的研究认为， cat的表达减低与肿瘤的远处及淋巴结转 移有关。 PIRINEN 等12对 261 例手术切除的非小细胞肺癌研究，发现 cat的表达与肿瘤的组织类型及分化程度密切相关。RODRIGUEZ SASTRE 等13在肺支气管神经内分泌癌的发展进程研究中，发现 cat复合物会出现下调或在肿瘤细胞中的分布发生改变。Kren
16、 等 14分析了 100 例NSCLC 中 cat的表达，结果显示 cat的胞膜表达异常与肿瘤的大小、临床分期和患者的预后显著相关。本组结果显示正常肺组织与NSCLC 相比 cat异常表达率有 显著性差异， cat表达与 NSCLC病理分级和淋巴结转移关系密切。表明 cat功能异常与非小细胞肺癌发生、发展和转移有密切关系,是肺癌转移的重要机制。本研究显示， cat 和 cat的异常表达率与 TNM 分期无关，这一差异可能与标本数量有关，进一步大样本的研究有助于解决这一问题。有研究显示前列腺癌的转移和患者的存活时间与 cat异位表达率有关15。本研究应用 Kaplan Meier绘制生存曲线，L
17、og rank 检验显示 cat和 cat异常表达与正常表达的生存曲线有显著性差异。 cat 和 cat的表达与 NCSLS 患者预后关系密切，异常表达者生存时间明显少于正常表达者。KREN 等14研究认为 cat的表达下降是 NSCLC 患者生存时间缩短的独立的预测指标。本研究经 Cox比例风险模型分析亦显示 cat可作为 NSCLC 患者的独立预后因素。本研究发现 cat和 cat表达具有明显的相关性，两种蛋白在NSCLC 的发生发展中可能具有协同作用， 联 合检测两种蛋白可能提高检测结果的灵敏性及特异性。 cat 和 cat可能在肺癌的发生、发展、侵袭和转移机制中发挥重要作用,有可能成为
18、肺癌诊断指标和预后判断的预警信号，成为肺癌治疗的新靶点。【参考文献】1 潘频华 ，吴鄂生，陈清兰，等. 连环素 、在哮喘豚鼠模型中的表达变化 J. 中华结核和呼吸杂志, 2000, 20(8):508.2SHIMAZUI T, SCHALKEN JA, GIROLDI LA, et al. Prognostic value of cadherin associated molecule in bladder tumors J. Cancer Res, 1996, 56(18):4154 4158.3JAWHARI A, JORDAN S, POOLE S, et al. Abnormal im
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