1、GMP 认证资料：内控质量标准郑州金大众动物药业有限公司土霉素内控质量标准标准依据：中国兽药典2010 年版一部内容：本品为 6-甲基-4-（二甲氨基）-3,5,6,10,12,12a-六羟基-1,11-二氧代-1,4,4a，5,5a,6,11,12a-八氢-2-并四苯甲酰胺二水物；按无水物计算，含土霉素（C 22H24N2O9）不得少于 95.0%。【性状】 本品为淡黄色至暗黄色的结晶性粉末或无定形粉末；无臭；在日光下颜色变暗；在碱溶液中易破坏失效；本品在乙醇中微溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠试液和稀盐酸中溶解。比旋度 取本品，精密称定，加 0.1mol/L 盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1m
2、l 中含 10mg 的溶液，避光放置 1 小时后，在 25依法测定，比旋度为-203 。至-216 。 。【鉴别】（1）取本品约 0.5mg，加硫酸 2ml，即显深朱红色；再加水1ml，溶液变为黄色。 （2）取本品与土霉素对照品，分别加甲醇溶解并稀释制成每 1ml 中含 1mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液；另取土霉素与盐酸四环素对照品，加甲醇溶解并稀释制成每 1ml 中各含 1mg 的混合溶液，照薄层色谱法，吸取上述三种溶液各 1ul，分别点于同一薄层板（取硅藻土适量，以用浓氨溶液调节 pH值至 7.0 的 4%乙二胺四醋酸二钠-甘油（95：5）为黏合剂，将干燥硅藻土-黏合剂（1g：3m
3、l）混合调成糊状后，涂布成厚度约为 0.4mm 的薄层板，在室温下文件类别 SMP文件名称 土霉素内控质量标准 文件编码 SMP-QMP00902起 草： 年 月 日审 核： 年 月 日批 准： 年 月 日执行日期： 年 月 日变更原因及目的：修订日期： 年 月 日修 订 号： 审 核： 年 月 日批 准： 年 月 日执行日期： 年 月 日GMP 认证资料：内控质量标准郑州金大众动物药业有限公司放置干燥，在 105干燥 1 小时，备用）上，以乙酸乙酯-三氯甲烷一丙酮（2:1:1）溶液 200ml 加 4%乙二胺四醋酸二钠溶液（pH7.0）5ml 作为展开剂，展开，晾干，用氨蒸汽熏后，置紫外光灯
4、（365nm）下检视，混合溶液应显两个完全分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的位置和荧光应与对照品溶液主斑点的位置和荧光相同。（3） 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。以上（2） 、 （3）两项可选做一项。【检查】 酸度 取本品适量，加水制成每 1ml 中含 10mg 的混悬液，依法测定，pH 值应为 4.57.0 。 有关物质 取本品约 25mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，加 0.1mol/L 盐酸溶液 5ml 使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取 2ml，置 100ml 量瓶中，用 0.01mol/L 盐酸溶液稀释
5、至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液 10ul 注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的 20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各 10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4 倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，2-乙酰-2-去乙酰土霉素的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1.75 倍（3.5%） ，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（2.0%） 。 杂质吸光度 取本品，加 0.1mol/L 盐酸甲醇溶液（1100）溶解并定量稀释制成每 1ml 中含 2.0mg 的溶液，照紫外-可见分光光度法，与 1 小时内
6、，在430nm 的波长处测定，吸光度不得过 0.25；另取本品加上述盐酸甲醇溶液溶解并定量稀释制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，在 490nm 的波长处测定，吸光度不得过 0.20。水分 取本品，照费休氏法测定，含水分应为 6.0%9.0%。 异常毒性 取本品，按每 25mg 加 0.1mol/L 盐酸溶液 1ml 使溶解，再加氯化钠注射液制成每 1ml 中含 2mg 的溶液，依法测定，按静脉注射法给药，应符合规定。 重金属 取本品 1.0g，照重金属检查法项下第二法检测，含重金属不得过GMP 认证资料：内控质量标准郑州金大众动物药业有限公司百万分之二十)。 细菌内毒素 取本品，用 0.
7、1molL 无内毒素盐酸溶液使溶解，依法检查，每 1mg 土霉素中含内毒素的量应小于 0.40EU。【含量测定】 照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；醋酸铵溶液0.25mol/L 醋酸铵溶液-0.05mol/L 乙二胺四醋酸二钠溶液-三乙胺（100:10:1） ，用醋酸调节 pH 值至 7.5-乙腈（88:12）为流动相；检测波长为280nm。取 4-差向四环素对照品适量，用 0.01mol/L 盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml 中约含 0.5mg 的溶液；取土霉素对照品（约含 2-乙酰-2-去酰胺-土霉素3%）适量，用少量 0.1mol/L 盐酸使溶
8、解，用水稀释制成每 1ml 中约含土霉素0.5mg 的溶液，取上述两种溶液（1:24）混合制成每 1ml 中约含 4-差向四环素20ug 和土霉素 480ug（约含 2-乙酰-2-去酰胺-土霉素 14.5ug）的混合溶液作为分离度试验用溶液，取 10ul 注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为：4-差向四环素峰（与土霉素峰相对保留时间约为 0.9） 、土霉素峰、2-乙酰-2-去酰胺土霉素峰、 （与土霉素峰相对保留时间约为 1.1） 。土霉素峰的保留时间约为 12分钟。4-差向四环素峰与土霉素峰分离度应大于 2.0，土霉素峰与 2-乙酰-2-去酰胺土霉素峰分离度应大于 2.5。测定法 取本品约 25mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，加 0.1mol/L 盐酸溶液 5ml 使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml，置 25ml 量瓶中，加0.01mol/L 盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取土霉素对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C22H24N2O9的含量，即得。【类别】 四环素类抗生素。【贮藏】 遮光，密封，在干燥处保存。【制剂】 土霉素片。
