1、一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（ Spermidine）: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 。1mol/L 精胺（ Spermine）：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加 100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不
2、是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20 。1mol/L 二硫苏糖醇（ DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水，分成小份贮存于-20。或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（ potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾（ KCl）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠（ sodi
3、um acetate）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA2H2O 和 20g 的 NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（6.8-8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/
4、ml IPGT：溶解 250mg 的 IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRna
5、se（无 DNase）（DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl 调 pH 至 7.5，于-20 贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（ NaCl）：溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠（NaOH ）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS 慢
6、慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100三氯乙酸（ TCA）:在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5- 溴-4-氯 -3-吲哚-半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal 于 1ml的二甲基甲酰胺（DMF ）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20 。100Denhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度 配制 100ml 溶液
7、各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分 V）2g水 2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准 DNA 连接酶缓冲液（ standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分 V） （可选）水 5ml 1mol/L 贮液1m
8、l 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP 2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul
9、 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L 溶解柠檬酸三钠
10、（二水）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液调pH 为 7.0，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树
11、脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液 :溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终 pH 值877850815775735685625565510450390330280 1231
12、50185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存 DNA）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25 ）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml Tris 缓冲液（ Tris-HCl buffer）将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中，再根据所要求的 pH（25 下）加一定量的浓盐酸（11.6N ），
13、用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ ml） pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L 5Tris-硼酸（TBE ）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱
14、445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L 染料1溴酚蓝（ bromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液（gel l
15、oading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400 型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0 ）1.8g15mg25mg补足到 10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400 型）水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8
16、.0 ）1.5g补足到 10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青 FF15聚蔗糖（400 型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青 FF1.5g 补足到 10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝 1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0 ）3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成
17、分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0 ）4g 补足到 10ml 10十二烷基硫酸钠 /甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青 FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml补足到 10ml 三.常用培养基LB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 1
18、0g如果需要用 1N NaOH（1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化钠 0.5g1 mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。SOC 培养基成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌
19、的 1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。TB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60，再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。2YT 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化钠 4ml如果需要用 1N
20、 NaOH（1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin） （100mg/ml ）溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 25u
21、g/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml ）溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml ）溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin ）（10mg/ml）溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml。
22、分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml ）溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 12.5ug/ml25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（ 10mg/ml）溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至 10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
