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种子DNA 提取方法.doc

上传人:11xg27ws 文档编号:7385916 上传时间:2019-05-16 格式:DOC 页数:2 大小:28.50KB
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1、种子DNA 提取方法种子DNA 的制备和叶片相比,大多数种子更适用于碱裂解法,然而对于富含多糖和多酚的种子,仍需要使用CTAB来抽提。这些方法对小麦和大豆种子非常有效。种子的碱性裂解1. 在摇床上用2漂白液清洗种子10分钟后,再用水清洗3次,每次5分钟。2. 用灭菌的刀片将种子剖成两半,并放入2毫 升管中。3. 根据种子大小(大豆种子400 l,小麦种子100 l)加入适量的裂解溶液(100 mM Tris- HCl, pH 9.5, 1 M KCl, 10 mM EDTA)。4. 95 C孵浴10分钟。5. 吸取上清,并取适量用于扩增反应。种子的CTAB抽提法1. 在摇床上用2漂白液清洗种子

2、10分钟后,再用水清洗3次,每次5分钟。2. 在液氮中用无菌研杵研磨种子。用500- 800l的CTAB抽提缓冲液(2% CTAB, 100 mM Tris-HCl,1.4 M NaCl, 20 mM EDTA)转移至40ml 锥底管中。轻轻混匀后 55 C孵浴20 分钟。3. 1500g 离心 5分钟。4. 转移上清至一个干净管中,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1 ),轻轻混合2分钟。5. 15 000 g离心20秒。6. 将上层液相转移至已预先加入1/10体积7.5M的乙酸铵和2倍体积的冰冷乙醇的管中。7. 轻轻混匀后-20 C放置1 小时。8. 15 000 g离心1 分钟,弃上清。9. 用 70的乙醇清洗沉淀两次,每次清洗混匀后15 000 g离心30 秒。10. 晾干沉淀后重悬于50 l的1x TE缓冲液中11. 吸取适量用于扩增反应。试剂盒FastDNA-96 Plant/Seed DNA Kit天根DP320 新型植物基因组DNA 提取试剂盒(可用于提取植物组织的DNA)

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