1、革兰氏阳性菌总 DNA 提取方法1.菌株用 20mL LB 培养基 30振荡培养至对数生长期（36h ） 。2.取 4*1mL 菌液，10000r/min 离心 4min，去上清液，用预冷的 TE溶液 4*1mL 洗涤一次,0.5mLTE 重新悬浮菌体。3.在菌悬液中加入 0.2mg 的溶菌酶, 轻轻颠倒 10 次，置于 37恒温放置 30min ,而后加入 10uL 的 Rnase，0.06mL10% SDS，轻轻颠倒 10次，置于室温恒温放置 10min。4.等体积 Tris-饱和酚抽提，轻轻颠倒 2 分钟，10000r/min 离心 3min,取上清，置于以新 EP 管内。5.等体积酚/
2、 氯仿/异戊醇抽提 3 次( 至水相与有机相中间无蛋白糖类层，即中间澄清)。取离心后的上层水相，置于一新 Ep 管中。6.加入 0.1 倍体积（15uL）NaAc （溶液） ，两倍体积 (300uL)的预冷无水乙醇，-20下沉淀 10min,10000r/min 离心 3min 收集絮状沉淀。7.70的乙醇洗涤离心（10000r/min，3min）两次，弃上清。8.37挥发去除残留乙醇，50L TE 溶液溶解，4保存备用。黑曲霉总 DNA 提取方法 (对你来说没有用)将从培养皿上刮取的菌体或抽滤收获的菌体放入研钵中,加液氮后研磨成粉末。向该粉末中以一定比例(2 mL/0.1 g 粉末)加入一定
3、量的DNA 抽提液0.2mol L-1Tris-HCl(pH 值 7.5),NaCl 0.5 molL-1,EDTA 0.01 molL-1,SDS 1%和与抽提液等体积的酚-氯仿- 异戊醇混合液(体积比为 25241),于涡旋器上剧烈涡旋 36 min,然后 8000 rmin-1、4离心 5 min。将上清液转移到一新离心管,向该离心管中加入 2.5 BV 的无水乙醇,-20放置 30 min。取出离心管,10 000 rmin-1、4 离心 10 min,弃上清液, 在空气中放置 10 min 使乙醇挥发完全。加入适量的 TE 溶液 10 mmolL-1Tris-HCl(pH 值 7.4),1 mmolL-1EDTA(pH值 8.0)溶解沉淀即得到基因组 DNA。
