1、附录 A 人用狂犬病疫苗效价测定法（NIH 法）本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。试剂 稀释液（PBS） 量取 0.9%磷酸二氢钾溶液 75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na 2HPO412H2O）溶液 425ml、8.5%氯化钠溶液 500ml，混合后加水至5000ml，调 pH 值至 7.28.0。攻击毒株 CVS 制备 启开毒种，稀释成 10-2悬液，接种 1113g 小鼠，不少于8 只，每只脑内接种 0.03ml，连续传 23 代，选择接种 45 天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含 2%马血清或小牛血清制成 20%悬液，经每分钟
2、 1000 转离心 10 分钟，取上清液经病毒滴定（用 10 只 1820g 小鼠滴定）及无菌检查符合规定后作攻击毒用。参考疫苗的稀释 参考疫苗用 PBS 稀释成 125、1125 和 1625 等稀释度。供试品溶液的制备 供试品用 PBS 做 5 倍系列稀。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫 1214g 小鼠 16 只，每只小鼠腹腔注射 0.5ml，间隔 1周再免疫 1 次。小鼠于第一次免疫后 14 天，用经预先测定的含 5100 个 LD50的病毒量进行脑内攻击，每只 0.03ml。同时将攻击毒稀释成 100 、10 -1、10 -2 和 10-3进行毒力滴定，每个稀释度均不少于 8 只小鼠。小鼠攻击后逐日观察 14 天，并记录死亡情况，统计第 5 天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。计算供试品和参考疫苗 ED50值。计算相对效力PT/Sd T/dSD式中 P 为供试品效价，IU/ml;T 为供试品 ED50的倒数；S 为参考疫苗 ED50的倒数；dT为供试品的一次人用剂量，ml；dS为参考疫苗的一次人用剂量，ml;D 为参考疫苗的效价，IU/ml。【附注】 （1）动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。（2）各组动物均应在同样条件下饲养。（3）攻击毒原病毒液(10 0 )注射的小鼠应 80%以上死亡。
