1、第十章 皮质激素类药物实验实验六十五 药物对大白鼠足趾浮肿的作用目的 观察地塞米松对大白鼠足趾急性炎症反应的抗炎作用。实验材料器材一一 1mL 注射器、大白鼠足跖体积测量装置（见图 65-1） 、天平。图 65-1 大白鼠足跖体积测量装置药品一一 10%新鲜鸡蛋清溶液、 0.25%地塞米松磷酸钠溶液、生理盐水、饱和苦味酸溶液。动物一一大白鼠。实验方法取体重 120150g 大白鼠 4 只，称重、标记，随机分为 2 组，在各鼠左后足踝骨突起处用圆珠笔画一圆作为标志，测量正常足跖的体积和周长。用软皮尺测量正常足跖体积，连测两次取平均值作为给药前周长值。然后，实验组大白鼠腹腔注射 0.25%地塞米松
2、磷酸钠溶液 0.4mL/100g，对照组大白鼠腹腔注射等容量生理盐水。 1h 后，分别于大白鼠右后爪足跖皮下注射 10%新鲜鸡蛋清溶液致炎。致炎后 0.5h、1h、 1.5h、2h 分别测量足跖周长和体积，计算肿胀率，比较各组的差别。实验记录周长（cm ） 致炎后体积（mL）组别 动物数致炎前 致炎后致炎前体积（ mL） 0.5h 1h 1.5h 2h地塞米松生理盐水 %10%致 炎 前 足 趾 体 积 ）致 炎 前 足 趾 体 积 （ 周 长）致 炎 后 足 趾 体 积 （ 周 长）肿 胀 率 （注意事项1装置足趾体积测量器时，务必使玻璃管刻度与吸管的刻度“0”相平。2测量时，先将注射器推进
3、，打开活塞 1 和 2，用水灌注到玻璃管的刻度（即吸管的0 点）处，关闭活塞 1，将大白鼠足爪放入玻璃管内，把注射器回抽使玻璃管内液面降至原液面刻度。关闭活塞 2，打开活塞 1，将注射器推进。此时，吸管内液面所示刻度即为足跖体积，每次测定后大白鼠肢体带走部分水分，下一次测定前必须补充水分到原刻度。3操作必须严格，否则误差较大。讨论题 地塞米松抗炎作用的机理如何。实验六十六 氢化可的松对小白鼠耳廓毛血管通透性的影响目的 利用“毛细血管通透性法”来观察糖皮质激素的抗炎作用。实验材料器材一一天平、0.50.lmL 注射器、4 号针头。药品0.5%氢化可的松、0.6%伊文思蓝生理盐水溶液、二甲苯。动物
4、一一小白鼠。实验方法取小白鼠两只，称重，编号。甲鼠背部皮下注射 0.5%氢化可的松 0.1mL/10g，30 分钟后，由两尾静脉注射 0.5%伊文思蓝生理盐水溶液 0.1mL/10g，并于两鼠右耳廓边缘均滴上二甲苯，使之及耳廓内外。15 分钟后观察两鼠右耳廓变蓝程度有什么不同。实验记录鼠号 药物 滴上二甲苯后出现蓝色的时间及程度甲 可的松 +伊文思蓝乙 伊文思蓝注意事项 二甲苯能增加毛细血管通透性，从而使皮肤显现出蓝色。讨论题 氢化可的松的抗炎作用如何，试从实验结果分析。实验六十七 可的松的抗炎作用观察目的 观察可的松的抗炎作用。实验材料器材一一滴管、酒精棉球、5mL 注射器、7 号针头、台称
5、、兔固定箱。药品2.5%的醋酸可的松混悬液、松节油。动物一一白兔。实验方法取无眼科疾病的白兔两只，称重，编号为甲、乙。甲兔于实验前 5 小时以上肌肉注射2.5%醋酸可的松混悬液 2mL/kg。仔细观察甲、乙两兔眼结膜、眼睑的正常情况，然后各在左眼滴入松节油一滴（滴后让药液自然流走） 。于用药后 10 分钟和 30 分钟分别观察甲、乙两兔眼睛炎症情况。实验记录眼炎症情况反应兔号 滴松节油前 滴药后 10 滴药后 30甲兔（im 可的松）乙兔（对照）讨论题 从实验结果，试分析可的松作用。实验六十八 氢化可的松对红细胞的保护作用目的 通过本实验的观察来确证氢化可的松对细胞有保护作用。实验材料器材一一
6、离心机、离心管、试管、试管架、吸管、滴管、量杯、注射器、脱脂棉。药品一一 0.5%氢化可的松溶液、 0.9%生理盐水、皂素溶液（或桔梗煎剂，或远志煎剂）、2%红细胞混悬液。动物一一兔。实验方法取试管 3 支，各加入 2%红细胞混悬液 3mL。于甲管加生理盐水 1mL；乙管加生理盐水 0.5mL；丙管加 0.5%氢化可的松溶液 0.5mL。摇匀，放置 10 分钟后，乙、丙管各加入选好浓度的皂素溶液 0.5mL，混匀。放置 1015 分钟，观察各管有无溶血发生。实验记录试管号 2%红细胞液（mL） 生理盐水 （mL） 0.5%氢化可的松（mL） 皂素溶液 （mL） 溶血现象甲 3.0 1.0 乙
7、3.0 0.5 0.5丙 3.0 0.5 0.5注意事项 皂素溶液最低溶血浓度约为 0.0625%，桔梗煎剂约为 4%，但要在实验前预试确定。讨论题肾上腺皮质激素对红细胞膜的保护作用有何理论意义和实际意义？附 1. 2%红细胞混悬液配制：从兔（猫、狗）心脏采血，置盛有玻璃珠的三角烧瓶中振摇（或用棉签搅拌） ，使成脱纤维血液。加适量生理盐水（是血液的 34 倍体积）摇匀，离心，倾去上层血液。再用生理盐水冲洗、离心（3000 转/ 分，约 10 分钟） ，直至离心后上清液不见红色，根据红血球容量，用生理盐水稀释成 2%混悬液。 （例，取 1mL 血球加生理盐水稀释至 50mL 即可。 ）2. 测定
8、皂素浓度，求出最低皂素溶血浓度取试管 810 支，各加入生理盐水 lmL（或 2mL） 。于第一管加入 1%皂素液 1mL（或2mL） 。盐水和皂素液要等量。混匀后吸出 lmL（或 2mL）放入第二管，摇匀。又从第二管吸出 lmL（或 2mL）放入第 3 管。以后各管按此法逐一稀释，可配得为原浓度1/2、1/4、1/8、1/16（即 0.5%、0.25% 、0.125%、0.0625%、0.03125%）的皂素稀释液。另取试管 810 支，编号，各加入 2%红细胞混悬液 3mL，生理盐水 0.5mL，然后分别吸取上述各管皂素稀释液 0.5mL，依次对号加入试管中（即 I 号加入第 1 号试管皂
9、素稀释液0.5mL，II 号管加入第 2 号管皂素稀释液 0.5mL） ，混匀。观察 1015 分钟，根据各管溶血情况，即可找出最低的皂素溶液浓度。3. 求桔梗，远志煎剂的最低溶血浓度。方法同 2。实验六十九 地塞米松对大鼠肉芽肿的影响目的 观察糖皮质激素的抗增生作用。实验材料器材一一注射器、天平、量筒、烤箱。药品一一 0.5地塞米松、1%巴豆油（用中性油类配制即可） 。动物一一大鼠。实验方法1取体重 120150g 雄性大鼠 4 只，随机分成实验组与对照组。2两组动物均乙醚浅麻醉并局部消毒后，于背部肩胛区皮下注射 20mL 空气（用氮气更好）形成气囊，随即向囊内注入 1巴豆油 1mL，将鼠背
10、朝下，徐徐转动，使巴豆油均匀地与囊壁组织接触，24 小时后，抽去囊内空气。3实验组致炎当日开始给药，0.5地塞米松（1 mL/kg）肌肉注射，每日一次，连续10 天；对照组注射生理盐水适量。4末次给药 24 小时，乙醚麻醉致死，抽出囊内渗液并定量，剥离囊壁肉芽组织，用生理盐水漂洗干净，80烤箱定时烤干，称重。 比较各组渗出液体积与囊壁重量，计算实验组抑制率。 注意事项1致炎应无菌操作。 2避免气体在皮下广泛扩散。 3防止在短时间内漏气。 4肉芽的形成比较缓慢，过早处理可能导致囊壁形成不佳。 讨论题动物体重与肉芽肿重有何关系？肉芽肿应如何正确表示？实验七十 糖皮质激素对单核巨噬细胞吞噬功能的影响
11、目的 观察糖皮质激素对单核巨噬细胞吞噬功能的影响。实验材料器材一一离心管(5mL)、刻度吸管(2mL) 、吸球，注射器（1mL） 、采血吸管(20L)、剪刀、镊子( 小号)、分光光度计、小白鼠固定器。药品一一 2.5醋酸可的松、碳末溶液，1:3 稀释的墨汁或 1.6胶体碳溶液、0.1碳酸钠、苦味酸、肝素。动物一一小鼠。实验方法1取体重 2630g 小鼠 6 只，编号并随机分为两组。甲组腹腔注射 2.5醋酸可的松50mgkg。乙组注射等容积生理盐水，记录给药时间。230 分钟后小鼠立即尾静脉注射碳末溶液 10mg/kg，并记时间。 3注射碳末溶液后 l 和 9 分钟分别采血 20L（用小镊子或针
12、头行眼球后静脉丛穿刺，待血液流出后，用事先经肝素溶液湿润的采血管吸取） 。立即将血置于含有 2mL 的 0.1碳酸钠的离心管中并摇匀。离心（1000r/min，10 分钟)，并将上清液用滴管吸至比色杯中，在分光光度计 650nm 波长处记录光密度值。4采血后即可拉颈处死小鼠，取肝、脾，用滤纸吸干后称重，以便计算吞噬指数。附 1. 碳粒吞噬指数的计算：在一定范围内，碳粒的清除速率与其剂量呈指数函数关系，即将吞噬速率与血浆碳粒浓度的对数成正比，而与已吞噬的碳量成反比，即： 122lgltODK式中 K 表示吞噬速率，也可称未经校正的吞噬指数， OD1、OD 2 为两次血样的光密度值，t 1 和 t
13、2 为两次采血时间。K 值的大小除与吞噬细胞的吞噬活性有关外，还与小鼠肝、脾重量有关。因此,一般以校正的吞噬指数 表示。 LSWK式中 W 为小鼠体重，W LS 为肝、脾重量。 值表示每单位组织重量的吞噬活性。2. 差异的显著性测验：根据 值假设计表格，将全班结果进行统计学处理，比较给药组和对照组差异的显著性。注意事项1注入碳粒的量应适宜。若剂量过大，肝实质细胞亦可摄取若干碳粒；若剂量过小，实际测得的肝血流量而不是吞噬功能、各鼠脾重量差异不宜过大；否则，可明显影响 K 值。2在尾静脉注药前，可先将小鼠尾巴用 4550温水浸泡或用灯泡照数分钟,使局部血管扩张、便于注射。注射器抽取碳末溶液后应将气泡排尽。3采血速度要快，以防凝血；若发生凝血，应重新采血并记时间，按实际时间间隔进行汁算。操作要温和，使小鼠在采血完毕后仍保持良好状态。讨论题1为什么每只动物至少要采取两次血？2计算吞噬指数时为什么要考虑肝、脾重量与体重？
