1、月季组织培养技术 一、培养意义 月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。多伦县就是一个月季之乡，但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用，多伦县农业技术推广中心于 2000 年 11 月引进组织培养全套设备，成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用。 二、培养程序 （一）无菌培养的建立 （1）选条 从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进 6 个月季优良品种，
2、分别是“红双喜” 、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“ 皇冠”、“ 金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第 5 天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至 15 天才萌发。 （2）培养基的配制 整个培养过程都可用 MS 培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要 BA 一种即可，每升用 0.31.Omg ，6 个品种均适用，只是萌发迟早有些差别。 （3）清洗外植体 采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成 23 厘米一段，每段至少一个侧芽，
3、装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌 30 分钟。 （4）消毒与接种 在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌 2530 分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌喜欢作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到 1 厘米左右需要 23 周。 （5）培养 培养温度 21最好，最高不超过 25，有昼夜温差，光照 1012小时/天，光强 8001200LX。 （二）继代增殖 （1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到 MS BA1-2 1AA0.1-0.3 或 MS BA1-2 NAA0.01-0.1 的培养基上，促使嫩茎长出更多
4、的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖 30 克。 （2）5 周后，“红双喜 ”增殖了 3.5 倍，“白雪山 ”4.1 倍，“和平”、“ 彩云”5 6 倍，“皇冠” 、“金丝鸟”达 15 倍。 （3）每 56 周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌喜欢作条件下，将月季嫩茎切成 12 节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。 （4）壮苗培养 对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS BA0.3-0.5 NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖
5、速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。培养条件。光照 1012 小时/天，光强 8001800LX，温度 2023，最高 2426 。 （5）生根与移栽 月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以 23 厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。 （a）以 MS 培养基为基础，配方为 MS NAA0.5，此外加入 300mg/L 活性炭，30g/L 蔗糖。插植 2 厘米以上无根嫩茎，经 2 周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。 （b）移栽。幼苗出瓶后
6、，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙 园田土（1： 3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度 2 3 厘米4 6 厘米/株，移栽完毕浇透水，并用 0.1的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。 （c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度 85以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。46 周后，须做好第二次移植，通常植入 5 厘米9 厘米的塑料杯中，每杯种 1 苗，再经 46 周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花，此时即可出售，或上盆种植，利于观赏。 （d）移栽后植保工作。首次移栽 1 周后，可少量的追肥，
7、视苗大小，浓度逐渐由 0.1提高到 0.3左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS 培养液等，通常每 710 天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。 三、影响月季增殖的因素 1.BA 用量及侧芽在茎段上的位置对侧芽发育的影响。用“ 和平”品种月季的枝条，均等分为 6 段，取每段的一个侧芽培养在无激素的 MS 基本培养基上，23 天后可见接近枝条最顶端和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育比较快。 在不同浓度 BA 的 MS 培
8、养基上，BA 含量为 0.030.3 毫克/ 升的培养基，促进“皇冠”“彩云”侧芽的发育，如果 BA 超过 O.3mg/L，则延迟芽的发育，但对于茎段中部的芽影响较小。 2.摘心对茎增殖的影响。在继代培养的接种喜欢作时，切去嫩芽的顶芽后，再转接到新的培养基上，对嫩芽增殖有很大的促进作用。 3.赤霉素的影响。试用了赤霉素，其浓度为 0.1、0.3、1 、3、10、30 和 100 毫克/升，试验发现所有浓度都抑制茎增殖，随着其浓度增高，茎增殖数下降，赤霉素浓度增加，还出现细长的嫩茎和发育不全的叶子，畸型植株等。 4.嫩芽长度对形成多芽苗的影响。茎尖在 110 毫米长短时，对形成多芽苗最有效，不但
9、百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多，切割过短或过长都对茎的增殖不利，芽苗形成较少。切割过长会表现出叶子衰老等不利的现象，最适宜的茎尖长度为 610 毫米。 5.每次继代培养所需时间对嫩茎增殖的影响。在 MS BA3 IAA0.3的培养基上，“红双喜”月季的培养时间为 28 天，继代一次较好，超过 28 天，茎的数目已不再增加。 6.MS 配方和无机盐浓度。试验证明，全量的 MS 无机盐对茎增殖效果最好。 四、影响月季生根和移栽成活率的因素 1.不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。以“ 彩云”为材料，用 NAA、IAA 两种不同浓度的生长素做生根试验，发现用NAA 诱导生根和提
10、高移栽成活率效果最好，浓度为 100ppm 为宜，发现以 IAA 诱导生根和提高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在 1mg/L 以下，超过时对生根的促进作用已不显著，反而大幅度降低移栽成活率。 2.无机盐浓度和含糖量对月季生根的影响。采用较低浓度的无机盐对月季生根效果较好。但糖浓度不可降低。否则削弱苗的生长势。试验证明 1/2MS 30 克/升蔗糖利于生根。 3.琼脂用量及对生根的影响。琼脂粉用量在 45 克/升的范围内对生根效果影响没有显著差别，以 4 克/升稍优，用最小不利于凝固，用量大培养过硬不利于扎根。 五、结论 用组织培养的方法生产月季试管苗不仅生产周期短，而且繁殖倍数高，周年均可生产，年可生产月季试管苗 50 万株，经济效益，社会效益都很可观，建议业界同仁能够关注此项事业。
