1、DNA 的粗提取和鉴定 实验要点解释李五顺 湖南省宁远县第一中学（425600 ）DNA 的粗提取和鉴定实验(内容见高中生物必修第二册 P.6，人教版)难度大，操作要求高，实验结果成功率低，成了生物实验中的难点。不仅如此，本实验的操作还蕴含了许多的知识，现简要解释如下：1实验材料选择鸡血的理由本实验的目的是粗提取和鉴定 DNA。DNA 是细胞的重要化学成分，它主要存在于细胞核内的染色质（体）上，要提取 DNA，合乎要求的细胞必须有细胞核。动物细胞比植物细胞要好，是因为动物细胞没有细胞壁，在低渗溶液中易破裂。鸡的全血包括血浆和血细胞（红细胞、白细胞、血小板等），其红细胞含有完整的、成型的细胞核，
2、而且比较大。全血除去血浆后即是浓缩的血细胞液，红细胞的数量相对来说多了，因而提取 DNA 时容易些。而哺乳动物如猪、牛、马、狗的血液中红细胞没有细胞核，白细胞和淋巴细胞有细胞核但数量少，实验时很难提取到 DNA。除鸡等鸟类的血液可作材料外，动物的肝脏细胞中含有细胞核，可作本实验的材料，而且材料易得，但在使用前必须要切成小块或用多功能搅拌机磨碎。2加柠檬酸钠的作用获得新鲜的鸡血后要加入柠檬酸钠，它的作用是防止血液凝固。因为柠檬酸钠能与血浆中的 Ca2+发生反应生成柠檬酸钙络合物，而 Ca2+是血液凝固所必需的，由于血浆中游离的 Ca2+大大减少，此时血液便不会凝固。3关于氯化钠溶液的浓度氯化钠溶
3、液的作用是溶解 DNA 和蛋白质。DNA 和蛋白质在氯化钠溶液中的溶解度是随着浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 0.14mol/L时（步骤 3）， DNA 的溶解度最低，高于或低于这个浓度，DNA 的溶解度都会逐渐增大，蛋白质没有这种特点。当氯化钠的浓度为 2mol/L 时（步骤 2），蛋白质的溶解度最大，DNA 也能溶解。当加水降低氯化钠溶液的浓度至接近0.14mol/L 时（步骤 3），DNA 可以从中析出，蛋白质溶解在水中而不会析出，经过几次分离，DNA 的纯度会越来越高。鉴定 DNA 时，使用的氯化钠溶液的浓度为 0.015mol/L（步骤 8），此时 DNA 的溶解度最大
4、，它能充分溶解在溶液中。4三次过滤的目的不同第一次过滤（步骤 1）是为了滤出膜碎片等杂质，获得含核物质的滤液。第二次过滤（步骤 4）是为了分离 DNA 和蛋白质，留 DNA 在纱布上。第三次过滤（步骤 6）是为了进一步除去溶解度较小的蛋白质，获得含 DNA 的滤液。他们共同的目的是为了获得 DNA。5实验结果的获得鉴定 DNA 时，一支试管为对照管，另一支试管为实验管。两支试管，实验管加 DNA，对照管不加，其它条件都相同。结果可以看到加 DNA 的试管溶液呈蓝色，对照管无色。如果实验管蓝色较浅，说明提取出的 DNA 的量太少，因蓝色的深浅与 DNA 的量成正比。鉴定剂只能用二苯胺外，甲基绿虽能与DNA 结合形成蓝绿色的络合物，但其颜色为蓝绿色。本实验成功的关键是保证提取到足量且较纯净的 DNA，因此除上述操作要领外还要注意：DNA 在细胞中含量少，提取鸡血细胞的核物质时，鸡血的使用量不应少于 200ml，同时要加足量的蒸馏水使细胞膜和核膜破裂，并充分搅拌。DNA 易吸附在玻璃器皿上，实验时尽量使用塑料制品，减少 DNA 的损失。
