1、微生物检验基本操作知识 ZY121,编写区域：沈阳区域 主编人员：孙淼,目 录,微生物基本知识介绍,第一章,环境微生物检测,第二章,工器具微生物检测,第三章,第二节：检验流程,第三节：结果观察,第一节：基本知识,杀灭物体上所有的微生物（包括病原微生物和非 病原微生物，细菌的繁殖体及芽孢）的方法。 如，培养基、盐水、吸管、平板等的灭菌。,用物理、化学或生物学等方法杀死病原微生物， 但不一定杀死全部微生物的方法。用以消毒的药 品称为消毒剂。一般消毒剂在常用的浓度下，只 对细菌的繁殖体有效，对于细菌的芽孢则需要提 高消毒剂的浓度和延长消毒时间。,灭菌,消毒,第一章：微生物基本知识介绍,第一节:基本知
2、识,1.1 名词解释,第一章：微生物基本知识介绍,第一节:基本知识,1.1 名词解释,第一章：微生物基本知识介绍,第一节:基本知识,湿热灭菌法,1.2 灭菌方法简介,第一章：微生物基本知识介绍,通过对微生物(细菌、病毒、芽孢等病原体) 的辐射损伤和破坏核酸的功能使微生物致死，从而达到消毒的目的。,应保持紫外线灯表面的清洁，一般每两周用酒精棉球擦拭一次，发现灯管表面有灰尘、油污时，应随时擦拭。,紫外线波长200300nm具有杀菌作用，其中265266nm最强。,紫外线的穿透力不强。,距30W紫外线灯1m处照射12min，可使皮肤产生红斑；对眼睛直射30s可产生刺激症状，紫外线可在空气中形成臭氧，
3、过多可引起中毒症状如胸闷、心跳加快、疲倦、头痛等。,第一节:基本知识,紫外线灭菌法,1.2 灭菌方法简介,第一章：微生物基本知识介绍,概念解析,检测目的,意义,菌落总数的含义并不标识实际中的所有细菌菌落总数，而是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH、需氧性质等） ，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数。,菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。,用来判定食品被细菌污染程度及其卫生质量，它反映食品在加工过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品进行卫生学评价。菌落总数
4、的多少标志着食品卫生质量的优劣。,A.概念释义,第二节:检验流程,2.1 菌落总数检测,采样要有代表性,双层覆盖,适宜稀释度,在连续稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀。应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。,每个样品应作23个适宜稀释度，每稀释度倾注两个平皿。倾注培养基一般以15mL较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。培养基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。,如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml）凝固后翻转平板培养。,第一章：微生物基本知识介绍
5、,B.注意事项,第二节:检验流程,2.1 菌落总数检测,第一章：微生物基本知识介绍,C.检验流程,第二节:检验流程,2.1 菌落总数检测,第一章：微生物基本知识介绍,概念解析,检测目的,大肠菌群是大肠菌群名称并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏染色阴性无芽孢杆菌。,大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染，是评价食品卫生质量的重要指标之一。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染
6、的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。,A.概念释义,第二节:检验流程,2.2 大肠菌群检测,第一章：微生物基本知识介绍,第二节:检验流程,2.2 大肠菌群检测-3种检测方式,第一章：微生物基本知识介绍,第二节:检验流程,A.乳糖发酵法,2.2 大肠菌群检测,第一章：微生物基本知识介绍,第二节:检验流程,B.LST发酵法,2.2 大肠菌群检测,第一章：微生物基本知识介绍,第二节:检验流程,C.平板计数法,2.2 大肠菌群检测,单双料选择,产气量与检出率,产气与倒管,将样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度
7、接种3管。,对初发酵产酸，倒管内虽无气体，但在液面有泡沫或沿管壁有缓缓上浮的小气泡，有时产酸未产气，但有疑问时，也可用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，都要作下一步证实。有些沉渣物太多，倒管内看不到产气，也要轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，都要作下一步证实。,呈正相关，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。但随样品种类而有不同，小于小米粒的气泡亦可有阳性检出（约为3050%）,第一章：微生物基本知识介绍,注意事项,第二节:检验流程,2.2 大肠菌群检测,结晶紫染色液： 取结晶紫1g溶解于95%20mL乙醇溶液中，加入 1%草酸铵水溶液80mL混匀。 革兰氏碘液：
8、取碘1g、碘化钾2g加入300mL蒸馏水，充分 振摇，完全溶解。 沙黄复染液： 取沙黄0.25g溶解于95%10mL乙醇中，然后 用90mL蒸馏水稀释。 染色法： 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液， 染1min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min， 水洗。滴加95%的乙醇脱色，约30s；或将乙醇 滴加整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个 涂片，脱色10s。水洗，滴加沙黄复染液1min， 水洗，待干，镜检。革兰氏阳性菌呈紫色； 革兰氏阳性菌呈红色。,第一章：微生物基本知识介绍,验证-革兰氏染色法,第二节:检验流程,2.2 大肠菌群检测,菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，以防遗
9、漏。菌落计数以菌落形成单位（cfu）表示。选取菌落数在30cfu300cfu,第一章：微生物基本知识介绍,第三节:结果观察,伊红美蓝平板划线培养后效果,乳糖胆盐发酵法现象,第一章：微生物基本知识介绍,左边为已经发酵产酸产气管 右边为培养发酵前的乳糖胆盐发酵管,第三节:结果观察,第二章：环境微生物检测,了解制造车间生产过程中环境卫生清洁状况，降低食品危害之可行性，保证产品的卫生品质符合标准要求。,目的,第二章：环境微生物检测,采样与检测,取样平皿的制作： 在无菌环境下将灭好菌的平皿中倾入平板计数琼脂，待其凝固后待用.,空气落菌的采样 ： a.取样点选择：根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气
10、落菌检测的采样点。采样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。,第二章：环境微生物检测,采样与检测,不同采样区域检测点的选择,车间等区域,风浴处,第二章：环境微生物检测,采样与检测,空气落菌的采样培养 ： b.取样：将平板置于采样点处，打开皿盖，于空气中暴露5min后，盖上皿盖，翻转平板，置于361恒温培养箱中培养48小时。,空气落菌的结果报告 ： C.报告：计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数。以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。 D 判定标准：,第二章：环境微生物检测,采样与检测,第二章：环境微生物检测,采样与检测,清洁与准清洁区域的划分 ：,B 微生物检测
11、,C 报告,用灭菌棉球涂抹待检处约55cm，来回涂抹10次,将其放入盛有10ml灭菌生理盐水的采样管内送检。,每支采样管取1ml样液，放入平皿内，倾注平板计数琼脂培养基，置于361培养48小时,Y（A10）/ SY-设备表面细菌菌落总数，cfu/cm2；A-平板上细菌菌落数。 S-采样面积，cm2。,D 判定标准,设备表面细菌菌落总数 20 cfu/cm2,A 采集,第三章：工器具微生物检测,菌落总数采样与检测,B 证实,C 报告,将菌落检测剩余样液倒入10ml双料乳糖胆盐发酵培养液中，培养。观察若有变黄和气体产生，该管推测性检验阳性。,检验阳性管中转种伊红美蓝琼脂平板上，置于36118-24小时，并做革兰氏染色和证实性试验。,凡乳糖发酵管最终产产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群，阳性；反之报告大肠菌群阴性。,D 判定标准,大肠菌群阴性为合格； 大肠菌群阳性为不合格。,A 接种,第三章：工器具微生物检测,大肠菌群采样与检测,内容回顾,微生物的相关定义及灭菌知识 菌落总数和大肠菌群的检测方法、注意事项 检测结果的观察报告 环境微生物和工器具的检测方法介绍,Thanks!,
