1、第一章绪论 1.简述孟德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献。 答：孟德尔的对分子生物学的发展的主要贡献在于他通过豌豆实验，发现了遗传规律、分离规律及自由组合规律；摩尔根的主要贡献在于发现染色体的遗传机制，创立染色体遗传理论，成为现代实验生物学奠基人；沃森和克里克在 1953 年提出 DAN 反向双平行双螺旋模型。 2.写出 DNA 和 RNA 的英文全称。答：脱氧核糖核酸（DNA, Deoxyribonucleic acid） ，核糖核酸（ RNA, Ribonucleic acid）3.试述“有其父必有其子”的生物学本质。答：其生物学本质是基因遗传。子代的性质由遗传所得的基因决定
2、，而基因由于遗传的作用，其基因的一半来自于父方，一般来自于母方。 4.早期主要有哪些实验证实 DNA 是遗传物质？写出这些实验的主要步骤。答：一，肺炎双球菌感染实验，1，R 型菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。2，S 型菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。3，用加热的方法杀死 S 型细菌后注入到小鼠体内，小鼠不死亡； 二，噬菌体侵染细菌的实验：1，噬菌体侵染细菌的实验过程：吸附侵入复制组装释放。2，DNA 中 P 的含量多，蛋白质中 P 的含量少；蛋白质中有 S 而 DNA 中没有 S，所以用放射性同位素 35S 标记一部分噬菌体的蛋白质
3、，用放射性同位素 32P 标记另一部分噬菌体的 DNA。用 35P 标记蛋白质的噬菌体侵染后，细菌体内无放射性，即表明噬菌体的蛋白质没有进入细菌内部；而用 32P 标记 DNA 的噬菌体侵染细菌后，细菌体内有放射性，即表明噬菌体的 DNA 进入了细菌体内。三，烟草 TMV 的重建实验：1957 年，Fraenkel-Conrat 等人，将两个不同的 TMV 株系（S 株系和 HR 株系）的蛋白质和RNA 分别提取出来，然后相互对换，将 S 株系的蛋白质和 HR 株系的 RNA，或反过来将HR 株系的蛋白质和 S 株系的 RNA 放在一起，重建形成两种杂种病毒，去感染烟草叶片。5.请定义 DNA
4、 重组技术和基因工程技术。答：DNA 重组技术：目的是将不同的 DNA 片段（如某个基因或基因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。基因工程技术：是除了包含 DNA 重组技术外还包括其他可能是生物细胞基因结构得到改造的体系，基因工程是指技术重组 DNA 技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组 DNA技术） ；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。6.写出分子生物学的主要研究内容。答：1，DNA 重组技术；
5、2，基因表达调控研究；3，生物大分子的结构功能研究- 结构分子生物学；4，基因组、功能基因组与生物信息学研究。第二章染色体与 DNA 1.染色体具有哪些作为遗传物质的特征？分子结构相对稳定能够自我复制，使亲子代之间保持连续性能够指导蛋白质的合成，从而控制整个生命过程能够产生可遗传的变异2.什么是核小体？简述其形成过程。由 DNA 和组蛋白组成的染色质纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。核小体是由H2A,H2B,H3,H4 各两个分子生成的八聚体和由大约 200bp 的 DNA 组成的。八聚体在中间，DNA 分子盘绕在外，而 H1 则在核小体外面。每个核小体只有一个 H1。所以，核小体中组蛋白
6、和 DNA 的比例是每 200bpDNA 有 H2A,H2B,H3,H4 各两个，H1 一个。用核酸酶水解核小体后产生只含 146bp 核心颗粒，包括组蛋白八聚体及与其结合的 146bpDNA，该序列绕在核心外面形成 1.75 圈，每圈约 80bp。由许多核小体构成了连续的染色质 DNA 细丝。核小体的形成是染色体中 DNA 压缩的第一阶段。在核小体中 DNA 盘绕组蛋白八聚体核心，从而使分子收缩至原尺寸的 1/7。200bpDNA 完全舒展时长约 68nm,却被压缩在 10nm 的核小体中。核小体只是 DNA 压缩的第一步。核小体长链 200bp核酸酶初步处理核小体单体 200bp核酸酶继续
7、处理核心颗粒 146bp 3.简述真核生物染色体的组成及组装过程真核生物染色体除了性细胞外全是二倍体，DNA 以及大量蛋白质及核膜构成的核小体是染色体结构的最基本单位。核小体的核心是由 4 种组蛋白（H2A 、H2B 、H3 和 H4）构成的扁球状 8 聚体。 蛋白质包括组蛋白与非组蛋白。组蛋白是染色体的结构蛋白，它与 DNA 组成核小体，含有大量赖氨酸核精氨酸。非组蛋白包括酶类与细胞分裂有关的蛋白等，他们也有可能是染色体的结构成分由 DNA 和组蛋白组成的染色体纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。1.由 DNA 与组蛋白包装成核小体，在组蛋白 H1 的介导下核小体彼此连接形成直径约10nm
8、的核小体串珠结构，这是染色质包装的一级结构。 2.在有组蛋白 H1 存在的情况下，由直径 10nm 的核小体串珠结构螺旋盘绕，每圈 6 个核小体，形成外径为 30nm，内径 10nm，螺距 11nm 的螺线管，这是染色质包装的二级结构。 3.由螺线管进一步螺旋化形成直径为 0.4m 的圆筒状结构，称为超螺线管，这是染色质包装的三级结构。4.这种超螺线管进一步螺旋折叠，形成长 2-10m 的染色单体，即染色质包装的四级结构。4. 简述 DNA 的一,二,三级结构的特征DNA 一级结构：4 种核苷酸的的连接及排列顺序，表示了该 DNA 分子的化学结构DNA 二级结构：指两条多核苷酸链反向平行盘绕所
9、生成的双螺旋结构 DNA 三级结构：指 DNA 双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构依赖于 p 因子的终止子的结构特点：1. 因子是一个相对分子质量为 2.0105 的六聚体蛋白，它能水解各种核苷三磷酸，实际上是一种 NTP 酶。2. 终止过程需要消耗能量,因子具有终止转录和核苷三磷酸酶两种功能。10.真核生物的原始转录产物必须经过哪些加工才能成为成熟的 mRNA，以用作蛋白质合成的模版。 答：1，装上 5端帽子；2，装上 3端多聚 A 尾巴；3，剪接：将 mRNA 前体上的居间顺序切除，再将被隔开的蛋白质编码区连接起来。剪接过程是由细胞核小分子 RNA 参与完成的，被切除的居间顺序形成套
10、索形；4，修饰：mRNA 分子内的某些部位常存在 N6-甲基腺苷，它是由甲基化酶催化产生的，也是在转录后加工时修饰的。11.简述、类内含子的剪接特点。 答：类内含子的剪接主要是转酯反应，即剪接反应实际上是发生了两次磷酸二脂键的转移。在 I 类内含子的切除体系中，第一个转酯反应由一个游离的鸟苷或者鸟苷酸介导，鸟苷或鸟苷酸的 3OH 作为亲核基团攻击内含子 5端的磷酸二脂键，从上游切开 RNA 链。在第二个转酯反应中，上游外显子的自由 3OH 作为亲核基团攻击内含子 3位核苷酸上的磷酸二脂键，使内含子被完全切开，上下游两个外显子通过新的磷酸二脂键相连。 类内含子主要存在于真核生物的线粒体和叶绿体
11、rRNA 基因中，在类内含子切除体系中，转酯反应无需游离鸟苷或鸟苷酸，而是由内含子本身的靠近 3端的腺苷酸 2OH作为亲核基团攻击内含子 5端的磷酸二脂键，从上游切开 RNA 链后形成套索结构。再由上游外显子的自由 3OH 作为亲核基团攻击内含子 3位核苷酸上的磷酸二脂键，使得内含子被完全切开，上下游两个内含子通过新的磷酸二脂键相连。 12.什么是 RNA 编辑？其生物学意义是什么？答：RNA 编辑是指某些 RNA 特别是 mRNA 前体经过插入、删除或取代一些核苷酸残疾等操作，导致 DNA 所编码的遗传信息的改变，使得经过 RNA 编辑的 mRNA 序列发生了不同于模版的 DAN 的变化。生
12、物学意义：1，校正作用，有些基因在突变的途中丢失的遗传信息可能通过 RNA 的编辑得以恢复；2，调控翻译，通过编辑可以构建或去除其实密码子和终止密码子，是基因表达调控的一种方式；3，扩充遗传信息，能使基因产物获得心得结构核功能，有利于生物的进化。 13.核酶具有哪些结构特点？其生物学意义是什么？答：核酶的结构特点：核酶的锤头结构特点是：三个茎区形成局部的双链结构；其中含 13个保守的核苷酸，N 代表任何核苷酸；生物学意义：1，核酶是继反转录现象之后对中心法则的有一个重要的修正，说明 RNA 既是遗传物质又是酶；2，核酶的发现为生命起源的研究提供了新思路-也许曾经存在以RNA 为基础的原始生命。
13、第四章生物信息的传递（下）-从 mRNA 到蛋白质1.遗传密码有哪些特征？答：1，密码的连续性，密码之间无间断也没有重叠；2，密码的简并性，许多氨基酸都有多个密码子；3，密码的通用性和特殊性，遗传密码无论在体内还是在体外，无论是对病毒、细菌、动物还是植物而言都是通用的，但是也有少数例外；4，密码子和反密码子的相互作用。2.有几种终止密码子？它们的序列和别名分别是什么？答：3 种，UAA、UAG 和 UGA，别名是无意义密码。 3.简述摆动学说。 答：1966 年，Crick 根据立体化学原理提出摆动学说，解释了反密码子中某些稀有成分的配对。摆动学说认为，在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵
14、守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动” ，因而使某些 tRNA 可以识别 1 个以上的密码子。认为除 A-U、G-C 配对外，还有非标准配对，I-A、I-C、I-U ，并强调密码子的 5端第1、2 个碱基严格遵循标准配对，而第 3 个碱基可以非标准配对，具有一定程度的摆动灵活性。4.tRNA 在组成和结构上有哪些特点？ 答：1.tRNA 中含有稀有碱基,除 ACGU 外还含有双氢尿嘧啶、假尿嘧啶等；2.tRNA 分子形成茎环节构；3.tRNA 分子末端有氨基酸接纳茎；4.tRNA 分子序列中很有反密码子。5，比较原核与真核的核糖体组成。答：1，真核细胞中的核糖体数量多余原核；2
15、，真核细胞中核糖体 RNA 占细胞中总 RNA的量少于原核；3，原核生物的核糖体通过与 mRNA 的相互作用，被固定在核基因组上，真核生物的核糖体则直接或间接的与细胞骨架有关联或者与内质网膜结构相连；4，原核生物核糖体由约 RNA 占 2/3 及 1/3 的蛋白组成，真核生物核糖体中 RNA 占 3/5，蛋白质占2/5。 6，什么是 SD 序列？其功能是什么？ 答：SD 序列是指信使核糖核酸(mRNA) 翻译起点上游与原核 16S 核糖体 RNA 或真核 18S rRNA 3端富含嘧啶的 7 核苷酸序列互补的富含嘌呤的 37 个核苷酸序列(AGGAGG)，是核糖体小亚基与 mRNA 结合并形成
16、正确的前起始复合体的一段序列。 功能：SD 序列对 mRNA 的翻译起重要作用。 7.核糖体有哪些活性中心？ 答：核糖体包括多个活性中心，即 mRNA 结合部位、结合或接受 AA-tRNA 部位(A 位点)，结合或接受肽酰-tRNA 部位（ P 位点） ，肽基转移部位及形成肽键的部位（E 位点） ，此外还有负责肽链延伸的各种延伸因子的结合位点。 8，真核生物与原核生物在翻译起始过程中有哪些区别？ 答：原核生物的起始 tRNA 是 fMet-tRNA，真核生物是 Met-tRNAMet。原核生物中 30S 小亚基首先与 mRNA 模版相结合，再与 fMet-tRNA 结合，最后与 50S 大亚基
17、结合。而在真核生物中，40S 小亚基首先与 Met-tRNAMet 相结合，再与模版 mRNA 结合，最后与 60S大亚基结合生成 80S.mRNA.Met-tRNAMet 起始复合物。 9，链霉素为什么能够抑制蛋白质的合成？ 答：链霉素是是一种氨基葡萄糖型抗生素，分子式 C21H39N7O12，可以多种方式抑制原核生物核糖体，能干扰 fMet-tRNA 与核糖体的结合，从而阻止蛋白质合成的正确起始，也会导致 mRNA 的错读。 10，什么是信号肽？它在序列组成上有什么特点？有什么功能？ 答：绝大部分被运入内质网腔的蛋白质都带有一个信号肽，该序列常常位于蛋白质的氨基端，长度一般都在 13-16
18、 个残基，有如下三个特征： 1，一般带有 10-15 个疏水残基；2，在靠近该序列 N 端常常带有一个或者数个带正电荷的氨基酸；3，在其 C 端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨基酸。功能：完整的信号肽是保证蛋白质转运的必要条件。11，简述叶绿体蛋白质的跨膜运输机制。答：1，活性蛋白水解酶位于叶绿体基质内；2，叶绿体膜能够特异性的与叶绿体蛋白的前体结合；3，叶绿体蛋白质前体内可降解序列因植物和蛋白质种类不同而表现出明显的差异；12，蛋白质有哪些翻译后的加工修饰？ 答：1、氨基端和羧基端的修饰；2.共价修饰：磷酸化、糖基化、羟基化、二硫键的形成；3.亚基的聚合；4.水解断链，切除新生肽中非功
19、能片段。 13，什么是核定位序列？其主要功能是什么？ 答：核定位序列：蛋白质的一个结构域，通常为一短的氨基酸序列，它能与入核载体相互作用，使蛋白能被运进细胞核。在绝大多数多细胞真核生物中，每当细胞发生分裂时，核膜被破坏，等到细胞分类完成后，核膜被重新建成，分散在细胞内的核蛋白必须被重新运入核内，为了核蛋白的重复定位，这些蛋白质中的信号肽-被称为核定位序列。第五章分子生物学研究法（上）-DNA、RNA 及蛋 白质操作技术2. 如何理解 PCR 扩增的原理和过程。 答：PCR 扩增的原理及过程该技术模拟体内天然 DNA 的复制过程，其基本原理是在模板、引物、4 种 dNTP 和赖热 DNA 聚合酶
20、存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA 区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一循环的产物作为下一个循环的模板，如此循环 30 次，介于两个引物之间的新生 DNA 片段理论上达到 230 拷贝（约为 109 个分子） 。PCR 技术的特异性取决于引物与模板结合的特异性。PCR 由变性- 退火-延伸三个基本反应步骤构成：模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板 DNA 与引物的退火(复性) ：模板 DNA 经加
21、热变性成单链后，温度降至 55左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合；引物的延伸：DNA 模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链” ，而且 这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 24 分钟，23 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。在此同时认识到蛋白质是接受 RNA 的遗传信息而合成的。第六章分子生物学研究法（下）-基因功能
22、研究技术第七章基因的表达与调控（上）-原核基因表达调控模式1.简述代谢物对基因表达调控的两种方式。 答： 转录水平上的调控 (transcriptional regulation)；转录水平上的调控(post-transcriptional regulation) ，包括 mRNA 加工成熟水平上的调控 (differen, tial processing of RNA transcript)和翻译水平上的调控 (differential translation of mRNA)。3.简述乳糖操纵子的调控模型。 答：A、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含 Z、Y 、A 三个结构基因，分别编
23、码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列 O，一个启动子 P 和一个调节基因 I。B、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I 基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列 O 处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。C、CAP 的正性调节：启动子上游有 CAP 结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP 浓度升高，与 CAP 结合，使 CAP 发生变构，CAP 结合于乳糖操纵子启动序
24、列附近的 CAP 结合位点，激活 RNA 聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。D、协调调节：乳糖操纵子中的 I 基因编码的阻遏蛋白的负调控与 CAP 的正调控两种机制，互相协调、互相制约。 5.什么是弱化作用？ 答：1.当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的 tRNATrp 也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当 4 区被转录完成时，核糖体才进行到 1 区（或停留在两个相邻的 trp 密码子处） ，这时的前导区结构是 2-3 配对，不形成 3-4 配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到将 trp 操纵子中的结构基因全部转录。 2.当培养基中色氨酸浓度较高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在 4 区被转录之前就到达 2 区，使 2-3 区不能配对，3-4 区自由配对形成基一环终止子结构，转录被终止，trp 操纵子被关闭。 第八章基因的表达与调控（下）-真核基因表达调控 一般规律2.何为外显子，内含子及其结构特点和可变调控？ 答：课本 P286. 3.DNA 甲基化对基因表达的调控机制。答:课本 P292. 5.增强子的作用机制。 答：课本 P299.
