1、2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,实验二 (续） 植物不同种群叶绿素含量的测定及其统计分析,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,一、实验目的,1. 了解叶绿素测定方法（分光光度计） 2. 正确运用统计方法 （1）统计植物叶绿素含量 （2）分析和比较不同生境或不同种群植物叶绿素的差异,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,已知叶绿素a和叶绿素b的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm. 已知在波长663nm下，叶绿素a和b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27; 在波长645nm下,叶绿素a和b在该溶液中的吸光系数分别为16.75和45.60;
2、,叶绿素含量测定,二、实验原理,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,可根据加和性原则列出以下关系式： D663=82.04Ca+9.27Cb D645=16.75Ca+45.60Cb 其中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长D663和D645nm时的吸光度； Ca和Cb为叶绿素a、b的浓度，以mg/L为单位。,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,根据公式可得： Ca=12.7D663-2.69D645 Cb=22.9D645-4.68D663 叶绿素总量 Ct=Ca+Cb,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,三、实验用具 四、实验步骤 1、确定所测定植物； 2、选取叶片取
3、3个不同生境（或不同地段）的同种植物叶片各10片（来自10株个体）。叶片的年龄基本一致（不能取幼嫩叶片），地段之间相距较远（大于100m)。,3、测定叶绿素含 量,2013-3-17,韩山师范学院 王桔红,4、计算叶绿素含量,种群A OD645 为 （1）_（2）_（3)_ OD663为 （1）_（2）_（3)_ 种群B 种群C同上 求平均值 ：OD645 _ ，OD663 _ 求得Ca= Cb= CT= 叶绿素a的含量（mg/g鲜重）=叶绿素b含量（mg/g鲜重）= 叶绿素c含量（mg/g鲜重）=,2013-3-17,韩山师范学院 王桔红,5、722型分光光度计的使用,（1）预热仪器 将选择
4、开关置于“T”（透射率），打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长. （3）调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”（此时试样室打开）(4)调节T=100% 将盛参比液的的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。,2013-3-17,韩山师范学院 王桔红,（5）吸光度的测定 将选择开关置于“A”（吸光度），盖上试样室盖子，将参比液置于光路中，调节
5、吸光度调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。重复上述测定操作12次，读取相应的吸光度值，取平均值。 （6）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。,2013-3-17,韩山师范学院 王桔红,注意事项： （1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。 （2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。 （3）比色皿不能用碱溶液
6、或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。,2013-3-17,韩山师范学院 王桔红,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,6、以统计软件统计每个生境植物叶绿素含量的平均值、标准差、方差、中值、最大值、最小值，并做三线表； 7、作出3 个生境植物种群叶绿素含量图（折线图或柱形图）； 8、试用SPSS统计软件分析其差异性是否显著（F值？，P值？）。 注：实验报告中写出所测植物、地点及数据、三线表、折线图或柱形图、SPSS分析结果,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,2013-4-10,韩山师范学院 王桔红,不同生境同种植物叶绿素含量是否有差异？原因是什么？,五、结果与分析,
