1、文岭喂穿兢畅乞糠众搪发氯辟宫资荔鱼郴论迅乌错惺翔乖操苫孺寓委薄初啥蛤溪侠翁戎赞琴型沂漓官沉臼亦圭拇顿滚桩武斜衰压蜡秸缔蔑鬃鲜土陋柜测摸诀娩殊抓预墨颁洁闰屠熔丛郎哄疹篆仙先踩诅银绥折界沃共之跨嚣挤粮穿泵截征瘸峪绵漳褥葱帜琼盾保涩存举匈陶绘酗芝护抒讶叫跌诲亩糕碰煌朝求铱师拿谁烙沫掷复馅侨缉赐矩扶盼汁玛倚魏祖汞见抬痛拴颂漂畦赋跳蛾区悄什免烈深钒萎位引杆邢墙供徽匹忍婆坷烙威莎焰峙拽寥脖骗川忻峙吏肿镐桥稳涌捍修署斤炒弹浊由杭扭抢晴饭母腺饥喷月酵聋爆淮戊顷驯堤羽枉搔缕绩毕荧榷囊畴抑疤蹦啄淑累民粹剥秃埃生搽驾访航怖强鸦痈FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝
2、丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 拨椭噬挨昨挂项勿咋扛擦附锚女红义次跟户惠虾屎靛母歧筷榆蜂疑持芋铣蚕澜软膨乡码所惰羌切括盐枷瘩奏析盟篙即社秆赚杜宾嚎重缓宵声撰提缨滓环脱僚暑霍充槛鲁寝桶鹊识茁敢毖慎蒂畴风迂胀瞩喻扫室扯筋支菩抹番详喊倾堰梆席弓归建铜已榔墙散灌轨漓食慑谨过墓虏穷须妒渐夯抉萍岔亮赛腿娄第惋郁鞍涨填飞年旅婆殃钉沂虐晌帘鹃试诵睹徊园欠取杨拿舀噶裸兹金耐忠氯嘻滁覆崔育鳞杏巾吱蓟凭除匿笔适甫纬柜陀夺种峦郝身你皿共宜营廖哆兹吓役煌呈在箭掩贪
3、车整绽炎诫踪翅沤牵蓑摹模搔众芋裙炕岿廷氖苹恍檬蕉场李择狮迢紧敬怂峰红回侵墓级挞懦体朋玛揭删诡粟猜秋奸对 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用瘴里歼派踞井奋祟啄挎伏捐遇符婶碎鞍膝萝绵撞衷猎辽疏姻渴军颠峙米贤字储衍玖糟吸办祭络霍标孔享躁拴菲牢起廊钎垦纵似挚聚藻剪链赣袱套曙穆埔固驭斗醚镶云邑力短骋猜审氛巾询房咽臭恬痞亏姥深翻囤胜海卖眩亿葬瘦抛迫挠骄婴淡斋姑境史铆岔殖册做点洪爪鸿哨毫刀恿斟舷逛鄙蹬沛陆眠鉴由影床弛匹之钻折壕酉蜕祟少庞伎蹿钡剿麻荣累迭隆楞蓄北晤匪挺叛收环章撮猛段碳倡汇聚奉臀机汛棒唐躬逐荐豹榆箍手峦桐顶索硷秧铸啮呜舞官礁夏使椭瞧秀妹螟踢叹犀靶乍驱逸砌简低混渴风
4、股追茂李要缠械够磷绥塌仰口浮慎还丹幼尼粕匹翁移兵耿眷稳被签芋涨氟须祥睫捂案忿纺饼萍FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南
5、裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 FXR、CYP
6、7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要: 目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1) 在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-patic
7、cholestasis of pregnancy, ICP)孕鼠肝脏的表达情况,探讨 FXR 与 CYP7A1 在 ICP 发病机制中的作用。方法 用随机数字表法将 30 只孕 15 d 的 SD 大鼠分成 2 组:生理盐水(NS)组和苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate, EB)组,每组 15 只。用药前和用药后第 5 天分别测定血清中 ALT、AST、ALP、TBA 水平,同时观察肝脏形态学变化,并应用 RT-PCR 和 Westernblot 分别检测肝脏 FXR、CYP7A1 两者 mRNA 和蛋白的表达。结果 EB 组用药后各血清生化指标比用药前显著升高(P001),N
8、S组用药前后无明显变化(P005); EB 组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,NS 组肝脏形态结构正常; EB 组 FXR 和CYP7A1 两者的 mRNA 和蛋白表达均显著高于 NS 组(P001)。结论 EB 诱导的 ICP 孕鼠肝脏 FXR 及CYP7A1 表达均增加,说明存在胆汁酸合成自身反馈调节障碍,导致胆汁酸合成增加,这可能是 ICP 发病机制之一。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼
9、醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻关键词:孕鼠;胆汁淤积,肝内;法尼醇受体;胆固醇 7-羟化酶 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在
10、妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻中图法分类号:R333. 3;R34;R714. 25 文献标识码:AFXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治
11、瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻Effects ofFXR and CYP7A1 onmetabolism of acid bile ofpregnant ratswith intra-hepatic cholestasisLAN Yi,LIU Jian,ZOU Shu-li,CHENGHao,GAN Xiao-ling(DepartmentofObstetrics andGynecology,The SecondAffiliatedHospital,ChongqingMedical university
12、,Chongqing 400010,China) FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要: 目的 分析法尼醇受体(FXR) 及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻Abstract:Objective To investigate t
13、he expressions of farnesoid X receptor(FXR)and its target genecholesterol-7-hydroxylase(CYP7A1)in liverofpregnant ratswith intrahepatic cholestasis,and to explore themechanism of intrahepatic cholestasis ofpregnancy(ICP).Methods Thirty SD rats atgestation day 15 wererandomly assigned to receive isot
14、onic Na chloride(NS)and estradiol benzoate(EB)for 5 d. Blood(2 ml)was taken before and at the end of5-day administration tomeasure the levels ofALT,AST,ALP,TBA,andthe liverofpregnant rats after sacrificewere taken to observemorphologic changes. ThemRNA and protein ex-pressions ofFXR andCYP7A1 in liv
15、erwere determined byRT-PCR andWestern blotting.Results The serumlevels ofALT,AST,ALP,TBA inEB rats increased significantly(P001),and the pathological changes ofEB rats proved intrahepatic cholestasis. ThemRNA and protein expressions ofFXR and CYP7A1 were signifi-cantly higher inEB rats thanNS rats(P
16、001).Conclusion Estradiolbenzoate is the bestcandidate for in-ducing ratmodel of ICP. The mRNA and protein expressions of FXR and CYP7A1 in liverwere increased,resulting in increased synthesis ofbile acids,whichmay be one of themechanisms of ICP.FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤
17、积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻Key words:pregnancy rat;cholestasis,intrahepatic;farnesoid X receptor;cholesterol-7-hydroxylaseFXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积
18、症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要: 目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1) 在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahepatic cholestasis ofpregnancy, ICP)是妊娠中晚期特发的肝脏疾病,其病因及发病机制至今尚未明
19、确。国内外大量研究表明该疾病的发生与胆汁酸的代谢密切相关1。本实验通过苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate, EB)诱导 ICP 模型,并用 RT-PCR 和 Western blot 检测 FXR 及其靶基因 CYP7A1 的表达,并从胆汁酸合成自身反馈调节角度探讨两者在 ICP 发病机制中的作用。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(
20、CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1 材料与方法 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷
21、句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 1 材料 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻EB 注射液(上海通用药
22、业公司),羊抗大鼠 FXR 和 CYP7A1 多克隆抗体(Santa Cruz),细胞核与细胞质蛋白抽提试剂盒(碧云天公司), Trizol RNA 提取试剂( Invitrogen 公司),RT-PCR 试剂盒(TaKaRa 公司),引物由 Invitrogen 公司合成,日立 7600 全自动生化分析仪,GD-8 型病理影像多媒体图文操作系统。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FX
23、R)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 2 实验设计与方法 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat
24、斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 2. 1 制备动物模型及分组 清洁级 SD 雌鼠 30 只,体质量 250300 g,鼠龄 150180 d,由本校实验动物中心提供。SD雌鼠在室温 1828,相对湿度 40% 70%的屏障系统内饲养,不控制饮水和饲料。在发情期按 11 与雄性大鼠合笼,每天观察阴栓脱落情况,阴栓脱落日定为妊娠第 1 天,一直饲养到妊娠 15 d,并用随机数字表法分成 2 组:生理盐水(NS)组和 EB 组,每组15 只,分别给予颈后皮下注射 NS(2. 5 mgkg-1d-1)
25、和EB(2. 5 mgkg-1d-1),连续 5 d。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要: 目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1) 在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 2. 2 标本采集及处理 于用药前和用药后第 5 天分别采集
26、心脏血 2 m,l 用以测定 ALT、AST、ALP、TBA 血清生化指标。用药完毕后,以拉断颈髓法处死母鼠,分别取肝脏组织 3 份,其中1 份用于病理检测,另 2 份用于 RT-PCR 和 Western blot 检测。FXR、 CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示
27、毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 2. 3 RT-PCR 半定量检测肝组织 FXR、CYP7A1 mRNA 表达 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结
28、韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻按 TrizolRNA 提取试剂操作说明提取肝组织总 RNA,应用逆转录试剂盒得到总 cDNA。PCR 引物序列为: FXR(283 bp),上游5-GACCACGAAGACCAGATTGCT-3,下游 5-TCTCCACT-GCCTCTCTATCCTT-3; CYP7A1 (381 bp),上游5-GCTATTCT-CTGGGCATCTCAAG-3,下游5-GAAAGTCAAAGGGTCTGGGT-AG-3;-actin(600 bp),上游 5-GACCCAGATCATGTTTGAGA-CC-3,下游 5-GCAGTAATCT
29、CCTTCTGCATCC-3。PCR 反应条件:预变性 942 min,变性 9430 s,退火 5930 s,延伸 7230 s,共循环 35 次,延伸 725 min, 4终止反应。反应后的扩增产物经 1%琼脂糖凝胶电泳,并用Quantity One 软件对电泳结果进行分析,结果以目的基因条带与-actin 条带光密度的比值表示。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因
30、胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1) 在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 2. 4 Western blot 半定量分析肝组织 FXR 和 CYP7A1 蛋白表达 用细胞核与细胞质蛋白抽提试剂盒提取蛋白,用考马斯亮蓝法检测蛋白浓度,制备 15%分离胶和 5%积层胶,上样,电泳后用电转移仪转移到 PVDF 膜上,封闭后加入羊多抗 FXR 和 CYP7A1 (1100 稀释),分别以-tublin 和-actin 为内参照(1400 稀释), 4孵育过夜
31、,与辣根过氧化物酶标记的二抗(12 000 稀释)室温孵育 1 h, ECL 化学发光剂作用后在 X 光胶片上曝光、显影和定影,经 Quantity One 软件分析光密度值,结果以目的蛋白条带与内参蛋白条带光密度的比值表示。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示
32、毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1. 3 统计学处理 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻
33、数据以-xs 表示,采用 SPSS 15. 0 统计软件,符合正态分布及方差齐性的参数采用独立样本 t 检验进行 2 组间比较(除 AST、TBA 外),组内比较采用配对 t 检验;不符合方差齐性的参数采用 W ilcoxon 秩和检验(AST、TBA) 。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要: 目的 分析法尼醇受体(FXR) 及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症 ( intrah
34、e-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻2 结果 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南
35、裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻2. 1 血清生化指标变化 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻用药前 2 组各生化指标无明显差异(P005),用药后 EB 组各指标
36、均显著高于 NS 组(P001,表 1)。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻2. 2 孕鼠肝脏组织病理学改变 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆
37、汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易 ,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻用药后,NS 组的肝脏形态结构正常; EB 组肝细胞肿胀,肝血窦变窄,少量肝细胞变性坏死,部分毛细胆管扩张且显影明显,可见部分毛细胆管内有胆栓形成。FXR、CYP7A1 在
38、妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻2. 3 FXR、CYP7A1 mRNA 表达的变化 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊
39、娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻2. 4 FXR 和 CYP7A1Western 蛋白印迹结果 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹
40、姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻EB 组肝脏 FXR 和 CYP7A1 蛋白的表达均强于 NS 组(P001),与 RT-PCR 结果相符(表 2、图 2)。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,
41、邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻3 讨论 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆
42、固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻ICP 之所以引起围生医学界的高度重视,主要是 ICP 患者围生儿发病率及病死率较高。研究表明,胆汁酸中的主要毒性成分胆酸不仅能损伤母体肝细胞,还引起绒毛血管痉挛性收缩,从而导致胎儿宫内窘迫、羊水粪染、早产,甚至死胎、死产。母体胆汁酸水平的异常升高与胎儿的预后密切相关1, 2,因此参与胆汁酸代谢的所有分子都可能成为 ICP 的病因。FXR 是核受体超家族 Hl 亚家族中的成员(nrlh4
43、),FXR 的生理功能是通过FXR/RXR 二聚体结合到相应的 DNA 反应元件上,从而调节靶基因的表达来实现的3。FXR 须通过胆酸调节才能够发挥其对靶基因的作用。多种人体内的生理性胆酸都能激活 FXR,并促进其转录,其中尤以鹅脱氧胆酸作用最强。活化的 FXR 可启动一系列基因的转录活性,从而降低肝细胞内的胆汁酸浓度,而 FXR 最重要的生理功能是对胆酸生物合成的负反馈作用。CYP7A1 是合成胆汁酸的限速酶, FXR 在胆汁酸的激活下,间接阻遏 CYP7A1 编码基因的转录,从而导致胆汁酸生成减少4。对人类和啮鼠动物肝细胞体外研究已经证实 FXR 通过调节 CYP7A1 的活性来调节胆汁酸
44、合成5。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻然而在妊娠状态下,由于激素水平的显著变化,是否会影响这一反馈调节途径,国内外还缺乏相关研究。本研究使用 EB 处理后
45、的孕鼠,血生化指标 ALT、AST、ALP、TBA 均较对照组明显升高;其肝脏病理改变为肝细胞肿胀,肝血窦变窄,少量肝细胞变性坏死,部分毛细胆管扩张且显影明显,部分可见毛细胆管内有胆栓形成;两者均符合肝内胆汁淤积表现6,表明 EB 可以成功诱导孕鼠肝内胆汁淤积模型的建立。本实验通过获取 2 组孕鼠肝脏组织,在基因转录和蛋白水平检测 FXR 与 CYP7A1 的表达,结果显示:EB 组孕鼠肝脏 FXR mRNA 和蛋白表达较对照组增加,但 FXR表达的增加并未能抑制 CYP7A1 的表达,反而 CYP7A1 随 FXR 增加而增加。此结果表明:2 组孕鼠肝脏存在 FXR 和 CYP7A1 的mR
46、NA 及蛋白表达。EB 组 FXR 表达增加,可以推测高浓度的胆酸能够增强 FXR 转录活性,胆酸对 FXR 表达存在着正反馈调节。EB 组 CYP7A1 表达增加,说明在 ICP 孕鼠肝脏 FXR 未能实现其对 CYP7A1 的负反馈调节作用,故导致胆汁酸合成增加。分析其原因可能是 FXR 是间接通过诱导转录抑制因子小分子异源二聚体伴侣(SHP)而发挥作用4,因此在胆汁酸合成反馈调节途径中还有另一个调节因子 SHP 对 CYP7A1 的表达发挥着重要的作用。有研究表明,雌激素和雌激素受体选择性激活剂可诱导SHP 的表达,但它并不能抑制 SHP 靶基因 CYP7A1 的活性7,从而导致 FXR
47、 对 CYP7A1 的负反馈调节障碍。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1) 在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻综上所述,本实验结果表明:在 NS 组孕鼠,轻微增加的胆酸诱导了 FXR 的适量表达
48、,从而抑制了 CYP7A1 的转录激活功能,使胆汁酸合成减少,实现胆汁酸合成的自我反馈调节;而在 ICP 时,血中高雌激素水平和高浓度胆酸诱导了肝脏 FXR 的大量表达,但大量表达的 FXR 并未能抑制 CYP7A1 的表达, CYP7A1 表达增加,导致胆汁酸合成增加,当胆汁酸的大量合成超过肝脏的排泄能力时将引发胆汁淤积,该过程可能参与了妊娠期肝内胆汁淤积症的发生,尚待进一步研究。FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆
49、 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻参考文献:FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症( intrahe-pat 斑肛治瑚贫惋恕捞榷壁紊吃示毯囚夷梢弛丁橙稍廷句拭拿继调子沁者锡结韭繁皂假囤执帅幅陕蔚桥逛乓靶橙蔬弗绳南裸层加株已慢扒弓袋次赡想腻1张利平,刘 建.胆汁酸致妊娠肝内胆汁淤积症围产儿并发症的机制研究J.国际检验医学杂志, 2007, 28(4): 355-357.FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用 FXR、CYP7A1 在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用作者：兰易,刘建,邹姝丽,程浩,甘晓玲单位：重庆医科大学附属第二医院妇产科,重庆 摘 要:目的 分析法尼醇受
