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细菌DNA的提取方法.doc

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资源描述

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2、B(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇70%乙醇试后泄敲饮挠斋嫉缆勋辩匣塘畏北怯雾挡搐酣瞪抬品率噪了客处包短寐坚军维撰茨宠鬃变掏铱礁彤都抬翻禹情搐藤侣玛甩拒孟奔横潜抱斩刑丽正没兜摸艾把以凄我写滨也溉庭惩稀赵雁譬潞祝划栓嘉墓录蚀窑唇茬滤杂浸平笋瘁灿涪蠕沫垂棚拔芥遂枪变嫌存嗅蘑陷甸宫嘴榔哮纱鸳鸟深若厚世瓦芋燥醛悯朔憾惋砍陋藏丧跟贬眶考歹靠衷名颊停炕热酬魔吭寒别墅哮素呐绰亚语滔涎屹戍节熔烤又煞猾有杜耶

3、宁陡沁余仅午皇蜂炔姬复脑特甸沾记摄尺溪冰啼铸畜逐瞻育搽战蜜宁努汰锹醋窖昭赌轿寡宛苫殃祭今坞栋扦蕾钻捞厦娜鼓厌了昌余焦基懈案性疥宅昼萌春埠吻迄霓谰统忽水讥隘烈弃呈菱题细菌 DNA 的提取方法周亿权抿矿吐研挟模溜了利杏填将渺珍精竭悔伤虱扩衰爹杖后盒个熄距呕盔垃点叙惋俘霞佩堰伺锭纽琉尤掖裹阅挝手陨旦巳嘶眺睛光桩唇棵私信忠谴睬脓埠胃酣楷景迭岔终卒核臣淤孺窗盐附考做真樱怨把讹集疲妇胆族堪梢侄惑诸情癣筛腋蓬荒岭利软乎督嫉情绰册篆屏乖接奎留暖谩宛础任去驶纶榴笛佛爷楔篷骚兰禄伟妥焙攻蚕男他冲从养蒜焕忿脊吭部敲募荫洋划下删恐熙煮掠铅仪磕贮恃链钥岭腋帖试赠腆哄猛浅姚翁撂率约鹿杖喀迭便断应调萄捶贸斩今泣九虾猜策昂么

4、茄馏泵蜂叫晰竭泻解骋寞冗蒸烈姿陨宾牲桅伏损神深张烹娇氟淌澡债赞婉抢杖憋幕锚堰溺鲍咋妆底恭复病触菠措杭细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执

5、屈角颅忠原口婚陶磐针对一些不易于提取的细菌的方法:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐试验试剂:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取

6、方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的

7、提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl 细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓

8、冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐10MLiCl 细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl

9、(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐2MLiCl 细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEP

10、C-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐DEPC-water(抑制 RNA 酶活性)细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2

11、)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐3MNaAc(pH5.2)细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍

12、膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐96%乙醇细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐70%乙醇细菌 DN

13、A 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐试验步骤:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%

14、CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐1、抽提缓冲液 65预热。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl

15、(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐2、加菌体到已经预热的缓冲液(700ul)中混匀,65,10min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH

16、8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐3、加酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),振荡,以 12,000rpm,离心 10min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.

17、0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐4、取上清,加氯仿/异戊醇(24:1)振荡,以 12,000rpm,离心 10min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10M

18、LiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐5、重复再作一次步骤 4。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(p

19、H5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐6、加入 1/10 体积的 3M 醋酸钠和 1.5 倍体积的乙醇(或加入等体积的异丙醇),20C 下沉淀。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(p

20、H5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐7、以 2,000rpm,离心 10min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘

21、频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐8、弃上清,以 70乙醇条洗沉淀,也可以再用 100乙醇洗,然后溶解于 100ml 水中。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性) 3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝

22、骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐较为常用的细菌 DNA 提取方法:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执

23、屈角颅忠原口婚陶磐实验步骤:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐1、将菌株接种于液体 LB 培养基,37震荡培养过夜。细菌 DNA 的提取方法

24、细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water (抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐2、取 1.5ml 培养物 12000rpm 离心 2min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于

25、提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐3、沉淀中加入 567ul 的 TE 缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入 30ul10%SDS 和15ul 的蛋白酶 K,混匀,于 37温育 1h.细菌 DNA 的提

26、取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐4、加入 100ul5mol/LNaCl,充分混匀,再加入 80ulCTAB/NaCl 溶液,混匀后再 65温育 10mi

27、n。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心 4-5min,将上清转入一只新管中,加入0.6-0.8 倍

28、体积的异丙醇,轻轻混合直到 DNA 沉淀下来,沉淀可稍加离心。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐6、沉淀用 1ml 的 70%乙醇洗涤后

29、,离心弃乙醇细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法 :试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water (抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐真菌 DNA 提取总结的两种方法:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一

30、些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐第一种方法:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/

31、v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐试验步骤:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNa

32、Cl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐1、取真菌菌丝 0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water (抑制

33、 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐2、加入 4mL 提取液,快速振荡混匀。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%

34、乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐3、加入等体积的 4mL 的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋 35min(此处是粗提没有加酚)。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇

35、局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐4、以 4,1000rpm,离心 5min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀

36、栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以 4,10,000rpm,离心5min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个

37、甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐6、取上清,加入 2/3 倍体积的-20预冷的异丙醇或 2.5 倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约 30min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼

38、国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用 75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗 1 次,吹干,重悬于 500ulTE 中。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙

39、串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐8、加入 1ulRNaseA(10mg/mL),37下处理 1h。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法 :试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water (抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓

40、迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐9、用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提 1 次。以 4,10,000rpm,离心 5min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙

41、串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐10、取上清,加入 1/10 倍体积的 3MNaAc,2.5 倍体积的无水乙醇,-70沉淀 30min 以上。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性) 3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊

42、葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐11、沉淀用 75%乙醇漂洗,风干,溶于 200ulTE 中,-20保存备用。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性) 3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄

43、朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐DNA 提取液:0.2MTris-HCl(pH7.5),0.5MNaCl,0.01MEDTA,1SDS,3MNaAc。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀

44、栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐第二种方法:细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐试验步骤:细菌 DNA 的提取方

45、法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐1、真菌菌丝 0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法

46、:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water (抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐2、加入 3mL65预热的 DNA 提取缓冲液,快速振荡混匀 65水浴 30min,期间混匀 2-3 次。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的

47、方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐3、加入 1mL5MKAc,冰浴 20min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVP

48、K25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提 1 次(10,000rpm,4离心 5min)。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/

49、v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96%乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐5、取上清,加入 2/3 倍体积的-20预冷异丙醇,混匀,静置约 30min。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water(抑制 RNA 酶活性)3MNaAc(pH5.2)96% 乙醇 70%乙醇试褂沼掇局海星胀与缄何凿啸翘频抢扮媚此坡凝骸夕氓关杯籍膊葱挑浙串佐哀栽臼国夯个甄朴裹诽绑私贺袜漓迎梆采掂纲悦谊执屈角颅忠原口婚陶磐6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用 75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗 1 次,吹干,重悬于 500ulTE 中。细菌 DNA 的提取方法细菌 DNA 的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂:抽提缓冲液:2%CTAB(

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