1、本次实验的内容,实验五 细菌的简单染色法 实验六 细菌的革兰氏染色法 实验七 细菌的芽胞染色法 实验八 细菌的荚膜染色法,微生物染色的基本知识,一 微生物染色的意义 1 进行微生物研究的基本技术; 2 微生物形态特征观察的基本方法; 3 不同形态微生物鉴别的基本技能。 二 微生物染色的染料, 碱性染料（basic dye）电离后为带正电荷的阳离子，可与细胞中带负电的组分结合。如Crystal violet, Safranin, Methylene blue，malachite green等。 酸性染料（Acid dye）电离后为带负电荷的阴离子，可与细胞中带正电的组分结合。如Eosin, Co
2、ngo red , Acid fuchsin 等。 脂溶性染料如Sudan black。,细菌染色的方法,实验五 细菌的简单染色法,一 目的与要求1 掌握细菌的简单染色法2 初步认识细菌的形态3 巩固油镜的使用方法 二 基本原理碱性染料电离后带正电能与带负电荷的细菌结合合,使其着色。 三 主要器材1 枯草芽胞杆菌( 1218h培养物)2 吕氏碱性美兰染色液 3 仪器与用具(略) 染色方法 见下图,涂片,干燥,固定,染色2min,水洗、吸干,镜检,实验五 细菌简单染色的操作步骤,沾取菌样,五 染色结果,六 注意事项 1 菌龄合适。 2 注意涂片均匀，不宜过厚。,枯草芽胞杆菌示意图,实验六 细菌的
3、革兰氏染色法,一 目的与要求1 掌握细菌的革兰氏染色法2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 二 基本原理革兰氏染色法基本步骤：涂片固定 结晶紫初染色 碘液媒染乙醇脱色 番红复染革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性(G-)表现出不同染色反应的根本原因在于它们的细胞壁结构存在差异。,革兰氏阳性菌：紫色,革兰氏阴性菌：红色,Structure of a Gram-Positive Cell Wall Structure of a Gram-Negative Cell Wall,革兰氏阳性、阴性菌细胞壁结构的差异,实验六 细菌的革兰氏染色法,三 主要器材1 金黄色葡萄球、大肠杆菌(约24
4、培养物)2 结晶紫、番红染色液 染色方法,结晶紫初染2min,碘液媒染1min,乙醇脱色30sec,番红复染2min,涂片固定,涂片制作,水洗,水洗,水洗,五 染色结果,革兰氏阳性菌紫色 革兰氏阴性菌红色,六 注意事项 1 菌龄合适。 2 注意涂片均匀，不宜过厚。 3 注意控制好脱色程度。,实验七 细菌的芽胞染色法,一 目的与要求1 掌握细菌芽孢染色的方法及原理2 初步了解芽孢杆菌的形态特征 二 基本原理芽胞的简介；芽孢染色的原理； 三 主要器材1 枯草芽胞杆菌(约2d的培养物)2 5%孔雀绿、0.5%番红染色液 四 实验操作步骤（改良的Schaeffer-Fulton染色法)1 菌液制备：取
5、2滴生理盐水或蒸馏水于EP管中，沾取菌苔2环在水中混匀。2 染色：EP管中加入5%孔雀绿3滴混匀，将在沸水浴中加热1520min。3 涂片固定：过火焰固定。4 脱色：水洗至无绿色。5 复染：0.5%番红染色3min。6 镜检：油镜观察，绘出显微镜下观察到的结果。,五 染色结果,六 注意事项 1 注意掌握供试验菌种的培养时间。 2 制备菌液时，取菌量适宜。,兰绿色部分为芽胞；红色部分为菌体和孢囊,实验八 细菌的荚膜染色法,一 目的与要求掌握细菌荚膜染色的方法及原理 二 基本原理荚膜不易着色，且易被水洗，采用衬托染色使菌体和前景着色，荚膜在菌体周围形成一透明圈。 三 主要器材1 胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus，俗称“钾细菌”）无氮培养基约2d的培养物。2 绘图墨水（用滤纸过滤后的绘图墨水稀释1倍使用）。 四 实验操作步骤（湿墨水法)1 制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。2 加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。3 镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。,五 染色结果,六 注意事项 1 注意掌握供试验菌种的培养时间。 2 控制好墨水的稀释倍数。,透明部分为荚膜,
