1、实验三 细菌的芽孢染色及放线菌形态的观察,实验目的,掌握芽孢染色法及芽孢形态 掌握印片染色法及插片观察放线菌的形态,实验原理-芽孢染色,芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂而且致密,透性低,着色和脱色较营养细胞难。采用碱性染料并在微火上加热,或延长染色时间,使菌体和芽孢同时染色后,用蒸馏水冲洗,脱去菌体颜色,保留芽孢的颜色。并用另一种对比鲜明的染料使菌体着色。,实验原理-放线菌形态的观察,放线菌在光学显微镜下的形态,实验器材,1、材料苏云金芽孢杆菌;吸水链孢霉;紫色直丝链孢霉 2、试剂孔雀绿染液(5%),复红染液 3、其他接种环、木夹、刀片等,实验步骤-芽孢染色,(1)制片 (2)孔雀石绿染色 :
2、加孔雀绿染液覆盖涂片区,再用木夹夹住载玻片,在微火上加热,致蒸汽徐徐冒出,保持1min (3) 冷却 、水洗、吸干 (4) 复红复染12min (5) 水洗、吸干 (6) 镜检,实验步骤-印片染色法观察放线菌,印片微热固定石炭酸复红染色 1min水洗晾干镜检,印片:用解剖刀取放线菌培养体一块,将菌面朝上放在一载玻片上,另取一洁净载玻片置于火焰上微热后,盖在菌苔上,轻轻按压,使培养物(气丝、孢子丝或孢子)粘附(“印”)在后一块载玻片的中央,有印迹的一面朝上,通过火焰2-3次固定;,实验步骤-插片法观察放线菌,用镊子轻轻取出紫色直丝链孢霉平皿中的盖玻片。将盖玻片直接放在一块干净的载玻片上镜检。效果如果不理想,可以用印片法观察紫色直丝链孢霉,方法同吸水链孢霉的观察.,实验作业,绘出芽孢杆菌芽孢及菌体形态图;绘出吸水链孢 霉及紫色直丝链孢霉孢子及菌丝的形态。,实验思考题,1试比较两种观察放线菌方法的优缺点。 2镜检时,你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?,