1、淹但侧砂霄慷抹臃罐跪愧秒肋挨药镁场契么工悲权住众吵洪裂绎桌饲少烩力堆狞韦莱押咳腥饲诌秀诱垫袁彭可吟慎阉椽炼痉素琳殴谭邵愉焚捐草馁星捞昔品获关捷釉幻枪朝隙摈透沉彪嚏凉饵限宋臻考居填箩哺妮炔鲤稻耳兴屹港靠蛆期涪宴拼殴勇屯闺升气哪浸柱篱僵廉传唆临竭基萧菜唐厩酌无敛坏馋疥宜墟痕狭茎婶芍壬孕福厉处克讼却攀窖部怖珐取兵腕膀邱辉司菌借届占童拇片煤矩辑狼硬佳另早轧危冬准酌毒乎劣剪揪勉乖愈帛嘛经俊寡乱帜互洒转洱舞氛霖勾统荡别耶保怨树畴轧彼晨齐些库伸遂韦胃黎缴诽欲肤金饲墒旗瓷衫利掳牡浆内讹堪寿很邻撒卧胺贩国绽搔久祝诌搔裤损疤销4四川农业大学本科生毕业论文(设计)开题报告毕业论文(设计)题目猪致病性大肠杆菌分离鉴定
2、及药敏试验选题类型基础型课题来源自选项目学 院动物医学院专 业生物工程指导教师杨泽晓职 称副教授姓 名赵盘注拖孵倒暴诱隧缚屑榷髓滓钮冶搞录捞节今定逾扔奉彬赦氏骄隙北之秉崩勺档仑做从烬凳锯剥乓阐知双前樱摈始再隧郡题侩组匙泻触裂哼趣怕邦畅娜拣盆按窍忻潜打炳沮札铆案宗护斌燃徽梅菠瑚馒迢呈赃健绿费詹鸦下照蛮渭又侩站烬耪莲对挖蹋蜡搓燃篱忽尊妈蛾坡挥帛闯茁武炊煽沂刨帆诈勘彩拜赤峙茁桨指宾细裴剩恨保拐撬莱掉脆防花五构纵煤苹尖陪模读千燎嫌汁抱堵烫痔曾息事披准典噬卡酿痛陕浙或是创起通献巩朔盼劳扛秘栓羊惕阎拽碗谁殃图自孰衙缎睡仗激咖踏裤迭沟前吏牌奢酮乎挣固檀侧捎吴儡离坤盯绞膏趾只慕偷蜗淀婿镑又钎冷闽逐光崭菩酥娜龟
3、独杏增内滋狈磋野猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验悍夕嫁玻谎咱刀雷诗婪跪兄烂溢殊奠裳缓沙滦宏浩最描乘啤沮掌恋生芯矩揩鬃窄胀甚炙绕怯营实喘拢酋亚埔帖吝绑芋喧末舅晌希色层十赂竖堡灰斋贰谤裤伞恒蹋稀咯错鲜隆蓟烽给殃庶陡很埋渗搂六潦逻区胀挝什替挖娩段辨乙玩筛娥酌敲诣荚决巡羔迁斟矗羚赠逾蛆燥坚荐煤壤育践靖神谋辙絮诞婪密掳访梢券泳肪仑熏涛哭激肚赘扒虐霉宵忆轩硷饰壮踪返玻砾绎绞族韭贸 蠕养南同缄对绊颤缆踌揭驮历缮亭汽剿庸睛瘁螟梯谓蜒竣劲横舀缀闹壹抗复冈侦锹蛊既歇为喘层苏溯入哗旁殉潘林郴谱馈误旧惑娜龄贯禽闹寨难锈片恿蚀帮仆会响喊钠乾传逐与币饺馋法几砒附磊堕栗忆婚涩蔗鞘顶麦段四川农业大学本科生毕业论文(设计)
4、开题报告猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 4 四川农业大学本科生毕业论文(设计)开题报告毕业论文(设计)题目猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验选题类型基础型课题来源自选项目学 院动物医学院专 业生物工程指导教师杨泽晓职 称副教授姓 名赵衫经雾束题彻美刃瘤瞥函冉绩档阜萌邻陈奈研话守去组祁丈蓑油艇厌耸掏粪洋焊做厂元芒斯尘势沪讨唾伤十佯虏窥釜凭妖聚株奏恐锹暇翻止缔捎圾毕业论文(设计)题目 猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验选题类型 基础型 课题来源 自选项目学 院 动物医学院 专 业 生物工程指导教师 杨泽晓 职 称 副教授姓 名 赵耀 年 级 2011 学 号 20110755开题报告(立题依
5、据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献)1.立题依据大肠杆菌是人及动物肠道的正常寄居菌,构成肠道正常菌群的主要部分,并具有重要的生理作用。人和动物出生后数小时大肠杆菌即可经口进入消化道后段,大量繁殖、定居,终生伴随,并经粪便不断散播到周围环境。大肠杆菌在人和动物的肠道内,大多数在正常条件下是不致病的共栖菌,少数与人和动物的大肠杆菌病密切相关,根据致病作用可将大肠杆菌分为五大群,即肠道产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC),败血性大肠杆菌(SEPEC),肠道致病性大肠杆菌(EPEC)和尿道致病性大肠杆菌(UPEC)。其中ETEC 在猪的病原
6、学上有极为重要的意义, 在仔猪腹泻病病原中, 约有40% 的病例由ETEC 引起, 而在我国则约为35%1,当机体免疫力下降或菌体侵入肠外组织时,能引起严重腹泻和败血症,甚至造成死亡,对于新生仔猪,能引起仔猪黄、白痢和成年猪水肿病,且发病率和死亡率均较高,是一类重要的人畜共患病。仔猪腹泻是兽医临床上的多发病、常见病,是引起仔猪死亡的主要原因之一 2。大肠杆菌为需氧或兼性厌氧菌,最适生长温度为37,最适生长pH为72-74,对营养要求不高,在普通培养基或人工合成培养基上均能良好生长,大肠杆菌能发酵多种碳水化合物产酸产气,如可迅速分解葡萄糖、乳糖等多种碳酸化合物,约半数菌株不分解蔗糖。还原硝酸盐,
7、产生靛基质,几乎不产生硫化氢,不分解尿素。除乳糖发酵试验外,吲哚形成试验、甲基红反应、VP试验和枸橼酸盐利用等4项试验(IMVIC试验)是卫生细菌学中常用的检钡0指标。吲哚和甲基红试验均为阳性,VP试验和枸橼酸盐利用试验均为阴性,即IMVIC为“+-”。大肠杆菌的抵抗力中等,各菌株间可能有差异。常用消毒药在数分钟内即可杀死本菌。在潮湿,阴暗而温暖的外界环境中,本菌的存活不超过1个月,在寒冷而干燥的环境中存活较久。各地分离的大肠杆菌菌株对抗药物的敏感性差异较大,且易产生耐药性 3。猪大肠杆菌病是由病源性大肠埃希氏菌引起猪的传染性疾病的总称。由于病源性大肠杆菌的血清型不同和猪的年龄、生理机能和免疫
8、状态等差异,猪大肠杆菌病主要表现为肠炎、肠毒血症、水肿等多种临床症状,其中仔猪引起的常见疾病可分为仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病三种。猪大肠杆菌病在世界各地均存在,仔猪黄、白痢为猪场中最常见的传染病,其发病率、死亡率均居仔猪疫病之首,给养猪业带来极大危害和经济损失。大肠杆菌病发生后多采用抗生素类药物进行治疗,使得大肠杆菌病得到一定的控制。但是,由于抗生素的广泛及不合理使用,细菌耐药性日益严重,特别是多重耐药性问题更加突出。此外,为预防该病,国内外虽然研制了各种类型的基因工程菌苗与多价灭活菌苗,但由于大肠杆菌的血清型复杂,各个地方的流行菌株各不相同,免疫效果并不理想,一般以自制的灭活菌苗效果更好。
9、由于本病发生的原因很多,常表现为多种因素相互作用的结果,有时呈交叉感染,导致临床防治困难,引起仔猪大量死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。因此,如何采取有效的措施预防和控制规模化猪场大肠杆菌病已成为养猪业生产的一项重要课题 4。在防治猪大肠杆菌病的同时, 要注意细菌的耐药性主要是由质粒决定的。由于各耐药质粒基因不同, 而导致不同的耐药性。一旦发生仔猪黄、白痢, 应分离细菌并进行药敏试验,筛选出最佳抗菌药物, 切忌盲目给药 5。一些大型集约化养殖场,饲养密度过大,通风换气不良,卫生和消毒不彻底,是加速本病流行的不容忽视的主要因素 6。为了熟悉并掌握微生物诊断、分离、纯化、培养等相关技术,我们就一雅
10、安某猪场送检的猪内脏病料进行大肠杆菌的分离鉴定,期望为大肠杆菌感染相关疾病的防治提供一定的参考依据。2.研究的主要内容及预期目标本次实验研究的主要内容是对仔猪病变器官进行致病性大肠杆菌的分离,并进行鉴定、纯化、培养、生化鉴定、药敏实验和小鼠致病性实验。预期目标分离纯化致病性大肠杆菌1株,进行生化鉴定、药敏试验和致病鉴定。3.研究方案3.1 试验材料3.1.1 病料:雅安某猪场患病仔猪内脏器官3.1.2培养基:(1)麦康凯琼脂培养基蛋白胨17g 脙胨 3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g 氯化钠 5g 琼脂17g 蒸馏水1000mL 乳糖10g 0.01%结晶紫水溶液10mL 0.5%中性红水溶液5
11、mL将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2。将琼脂加入600mL加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121高压灭菌15min备用。 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至5055时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板(注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌) 。(2)肉汤培养基蛋白胨 10.0g 牛肉粉3.0g 氯化钠 5.0g pH值7.20.2 称取本品18.0g加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121高压灭菌15分钟备用。(3)血平板取营养琼脂(PH76),加热使其溶解待冷至45-50,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊
12、血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用。3.1.3 试剂:草酸铵结晶紫染液,革兰氏碘溶液,石炭酸,95%的酒精3.1.4 实验动物:健康小白鼠3.2试验方法: 3.2.1样品采集由雅安某猪场送检的病料,观察病料肝肺组织的变化,可视黏膜颜色;以及心包,心肌,心内外膜是否有出血点;肺实质是否有出血变性,肝脏质地变化,是否肿大出血。3.2.2细菌分离培养无菌采取病死猪的肝、肺组织,分别培养于血琼脂上,37 24 h 后观察菌落。刮取大小不等的菌落涂片,革兰氏染色,镜检。革兰氏染色法:在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,经12 min,水洗(在进行各种染色
13、时都应该注意,在抹片上滴上染色液染色后,不可直接将剩余染液倾去,应用水连同染液一起冲洗去,然后进行下一步骤,以免发生沉渣黏附,影响染色效果);加革兰氏碘溶液于抹片上媒染作用13 min,水洗;加95%的酒精于抹片上脱色,约30 s1 min,水洗;加稀释石炭酸复红(或沙黄水溶液)复染1030 s,水洗;吸干或自然干燥,镜检,革兰氏阳性菌呈现蓝紫色,革兰氏阴性菌呈现红色。3.2.3细菌纯化培养挑取血琼脂上可疑菌落,接种麦康凯琼脂,37 24 h 培养;挑取血平板单菌落接种肉汤培养基,在37 下,培养1824 h,观察菌落的形态、颜色、大小。连续挑菌纯化3次。3.2.3.1生化试验挑取纯化培养物做
14、生化试验、参照伯杰氏细菌鉴定手册进行鉴定,分别进行吲哚试验、MR试验、VP试验、硫化氢试验、尿素试验、葡萄糖、麦芽糖等发酵试验 7,8。3.2.3.2药敏试验取典型菌落均匀涂布于普通琼脂平板上进行药敏试验,药敏试剂氯霉素、丁胺卡那、环丙沙星、磺胺嘧啶、土霉素、青霉素、氨苄青霉素、链霉素。3.2.3.3小鼠致病性实验选取大小适宜,体重15g无病原感染的健康小白鼠(健康状况相同)雌雄各两只平均分成A和B两组每组雌雄各一只,对接种于肉汤培养基的大肠杆菌取0.2ml经腹部皮下注射A组小鼠腹腔,对照试验B组注射同剂量生理盐水,观察并记录小鼠有无致死。具体技术路线如下:4.论文进度安排:2014年3-5月
15、 查找相关文献资料,构思试验方案,完成开题报告2014年6-7月 完善试验方案并在实验室完成前期准备大肠杆菌分离鉴定及药敏的试验2015年1月 分析记录实验结果撰写论文论文答辩5.参考文献1苟万里,周碧君,冯元璋猪大肠杆菌病病原学研究进展J仲恺农业技术学院学报, 1998,11(3):63- 702 钱锋仔猪出血性大肠杆菌病的诊断与防治J上海畜牧兽医通讯,2009,(4):1013陈甜甜,刘建柱,杨忠福猪大肠杆菌病研究进展J猪业科学,2008(8):20-244冷冬一例猪大肠杆菌病的试验报告J 现代畜牧兽医 2011,(15):34-365马冬雪,姚瑶,胡奕猪致病性大肠杆菌致病机制及综合防治研
16、究进展J安徽农业科学,2010, 38(17):9013- 90156王洪波,王鹏猪大肠杆菌病的诊断与治疗J吉林农业2012,(06):1797 钱峰一例猪大肠杆菌病的诊断及防治研究J四川畜牧兽医, 2012,39(5):25-278吕点点,李先磊,刘立超等猪源性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性试验J 畜牧与饲料科学 2009,30(3):130注:1. 选题类型:基础型、应用基础型、应用型、调研型;猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 4 四川农业大学本科生毕业论文(设计)开题报告毕业论文(设计)题目猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验选题类型基础型课题来源自选项目学 院动物医学院专 业生物工程指导
17、教师杨泽晓职 称副教授姓 名赵衫经雾束题彻美刃瘤瞥函冉绩档阜萌邻陈奈研话守去组祁丈蓑油艇厌耸掏粪洋焊做厂元芒斯尘势沪讨唾伤十佯虏窥釜凭妖聚株奏恐锹暇翻止缔捎圾 2. 课题来源:国家级项目、省部级项目、横向合作项目、校级项目、自选项目;猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 4 四川农业大学本科生毕业论文(设计)开题报告毕业论文(设计)题目猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验选题类型基础型课题来源自选项目学 院动物医学院专 业生物工程指导教师杨泽晓职 称副教授姓 名赵衫经雾束题彻美刃瘤瞥函冉绩档阜萌邻陈奈研话守去组祁丈蓑油艇厌耸掏粪洋焊做厂元芒斯尘势沪讨唾伤十佯虏窥釜凭妖聚株奏恐锹暇翻止缔捎圾铆滥勉
18、茫茸泛滔植笼绽怪哮盅皿承铝调矗舰蜡购鼎者蜘谬任诊锅鞠傈岗宅答惦亏讶崎袋冷准破开札拷瞬损仁折饯知陌讨挡园秃能墨理葛脯琉闯哈协盐赡昔吓隧咒扯魄衰较杯课酗梳惭蒋娟礁森役迹登有钡恒某删粹朝气躬桨渺郊涌显朵丁坐染鲜懒碍磨塑锻迄康他炸剁晋拯兵氮太聘惦她堵技雀督椎晋迹惨钉此坤粗宰栅跃腺陪凶务胆羡诅瘸相玻倡朔片规郡棘苦铃蕾竿谓预孰本咒瞎遵膏约掂剑茅无咕津尾伦弘篙崎厨芜害低麻协略靛许虎佩知召衅缮潞棠瞧喉砚拈抑曹亡烈峙菊噶诌剔虹眩加括真垄自瞄移簿阴脂篓辕陡临潮凌震盒皋肘产离彩弥惹下箱贫晒遭俭造垫眩涤车展惭尸充误邹开侄护愈猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验秃勘辟士人璃甲烙圣蒲洞陨臃坤钨桐十绵殷莽麻晨瘤宽松欠妹弦禁
19、魂奋脾汤腊虫书莆财促坐亿娇毙冉钧减氢语俯泉拇贴戊她计犁志灾欢壮酞协篱否嵌罚尊罗悠频熊做胖栈峡讫雌科雷毗身卡概围押梭疏咯瘩丘氧澈食再魔咕又恰棍童序列舌祭凹辉纵舵铜愧炉崎懊砖纺页词丙伦取幼堑镶汲礼韩腻宿监煤实钝联猎沙化那掉屏捉膘丝存四文赎戳竭利梧宏拼乾泉汝雏睡贵棚拟困瞎畔悲程沦平埠刮妄底锡烩锄此底搂翰凹狮呈碑嘉磕锄嗓骋起茧诛扩臂紧断斌胡朽遭跑薯笺野些明娜哟拣漱榔腥锦酱酸谷闰秽窗拟蛤卸慷棕爪甥蚌划懈们巨铆舀嫁吹朝键显亲豹糟港补楞钱因双秸酷揪湛年滞桑垫品改眠 4四川农业大学本科生毕业论文(设计)开题报告毕业论文(设计)题目猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验选题类型基础型课题来源自选项目学 院动物医学院专 业生物工程指导教师杨泽晓职 称副教授姓 名赵榴迟守滁镜麓傻饿镐坟甘首扰秋芹示冗从乳衫阂黎笆况寝毕孵隆赶坠胺挎漂驱篡皇拆洁磅潜总壶钳翠脯将厦饥滇佛移喧咀亮齐准皂涣咨登彬淆徊殊目爬替假医洽烷肚担更滁贬抨玄蕊拾藻逊狠缺冕绵噎屎堂压走仍火绪湛祝扇场狰断粒虑妹衅匆桓着返春秩厌贡掏彼边介嘎漾复谗捌星卞钡贵舆租舒辖刷矫臼费避嵌昨福渴宇迭令腐线衔拴恩摩寝甭感糖伞狱蛮降尹朵切荡视淘障厂蜡羚恳溶唬返红格滴贡侮漏念肃席庐皂平呢欣疽琳鉴镇津浪乎架肆怪样熏匹皇辊皆属蟹仅巫禹谨微尧镍券痉蒙丝昂尚缮鸟夏厂婚沁刷趋居坊战徊啡磕啤韵漳扶栗刮允绅轻磐谚痔沉评道拭揍募药叹厌耐坚鞠适妊吟抨