1、胶体金技术简介,周军 BioDot中国,2,胶体金技术的起源,1971年,Faulk 和Taytor在做免疫金电镜实验时引入 胶体金：是一种分散相颗粒在1100nm之间的分散体系，外观透明不浑浊，在普通显微镜下看不见；颜色为红色,指示剂 胶体金复合物（conjugate）:与抗体连接,3,胶体金技术的发展,80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through) 90年代：第二代产品，免疫层析法（Lateral Flow）,女性妊娠 HCG 21世纪：快速诊断方法适应市场需要，胶体金技术进入快速发展期，成为IVD的热点（传染病、毒品、食品安全、畜牧兽医等领域）,4,两种技术的比较,5,免
2、疫层析法技术优势:简单/现场/快速,1.打开包装取出试纸条,2.直接插入待测样品中,3. 目测读出结果（3-10分钟内）,6,免疫层析法与常规诊断方法比较,7,免疫层析法应用领域,8,免疫层析法试纸条结构,测试线 （T线）,质控线（C线）,胶体金垫,吸水滤纸,样品垫,NC膜（硝酸纤维素膜）,层析方向,PVC底板,9,免疫层析法原理视频,10,免疫层析法检测原理分类介绍 （双抗体夹心法）,（以大分子HCG检测为例）,11,免疫层析法检测原理分类介绍 （竞争法）,（以小分子吗啡检测为例）,12,免疫层析法检测原理分类介绍 （间接法，标记proteinA）,（以HIV抗体检测为例）,13,免疫层析法
3、检测原理分类介绍 （双抗原夹心法，标记抗原）,同上，测抗体,14,技术流程,15,平台准备与技术分项,材料准备: 样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸试剂准备:免疫试剂如抗原抗体等生物活性原料；生化试剂如氯金酸、柠檬酸三纳、氯化纳、Tween20、BSA等仪器准备：常规仪器pH计、加热平台、冷冻离心机等；专用仪器喷膜仪、切条机等胶体金标记技术NC膜与溶液喷点胶体金垫与溶液喷点干燥方法,16,抗体 Antibody,来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 特异性:亲和层析柱 溶解液:不含盐,例如PB,抗原抗体生物原料 优质的原料是优质产品的保证,抗原 A
4、ntigen,天然抗原,重组抗原,合成抗原 偶联抗原物质: BSA, OVA等,17,胶体金标记技术,容器清洁或硅化处理胶体金颗粒制备 (负电) 颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm.蛋白质最适用量测定:盐析法,18,NC膜与溶液喷点-NC膜,NC膜的性能NC膜的选择 爬速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius),19,NC膜与溶液喷点-溶液喷点,CT线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志CT线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划线(FL100
5、0喷头)工艺比较,20,胶体金垫与溶液喷点,胶体金垫 1.材料选择 2.糖的作用 3.缓冲溶液的作用喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头) 1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘效应 3.生产方便性,21,样品垫,材料选择各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSAPVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100,22,吸水纸,吸水效率 进口与国产纸的差异,23,粘性底板,原理作用供应商的选择对NC膜的影响,24,干燥方法,干燥方法的比较 1.冷冻干燥法 2. 烘箱 3.烘房温湿度的控制 1.温度对蛋白的影响 2.湿度的控制办法,25
6、,溶液体系分析,各环节缓冲溶液的选择与统一 盐的作用 表面活性剂的作用 糖的作用 大分子蛋白的作用 其他作用物质,26,注意事项,试剂原料耗材的批号控制，确保来源可靠有保障 设置关键控制点，确保流程无差错 仪器定期维护校准 研发时即考虑一定生产量的工艺问题，避免上量后不匹配 均一性，稳定性,27,胶体金技术在中国的发展-回顾,1995年：国内基本空白，没有研发，1-2家生产单位仅是大包装分切 1997年：杭州艾康起步，依靠美国技术转让快速发展为国内第一品牌，2007年因专利纠纷被Inverness收购 1998年：美国BioDot公司第一台RR3000仪器进入中国，国内单位开始少量研发与生产
7、1999年：基因公司代理BioDot，开始大力推广胶体金技术 2000年：“第一届胶体金技术培训班”在北京生物制品研究所成功举办 2008年： BioDot中国办事处成立，全权负责中国区市场/销售/售后 2010年：星星之火已经燎原-国内已有约150多家单位从事胶体金技术的研发与生产，HCG产品全球市场的70-80%在中国生产,28,RR3000-中国第一台BioDot仪器(1998年),29,胶体金技术在中国的发展-机遇,中国具有行业优势：前端大量的生物学人才+科研，后端廉价的劳动力+生产 OTC、家庭自检市场保持稳定需求 食品安全、畜牧兽医、生物反恐、流行性传染病等领域需要现场快速检测，会
8、有较快增长 临床医疗市场将向全自动仪器与简约化快速化检测这两级发展，基层社区服务中心、中西部地区对快速检测产品会有一定的需求,30,胶体金技术在中国的发展-挑战,关键材料NC膜均为进口 优质的上游原料（抗原抗体）依赖进口，仅少部分实现国产化，但质量不稳定 稳定的生产仪器及关键配件，大部分进口 专利：基本被国外公司垄断,31,胶体金技术发展展望(一),标记物的发展:乳胶微粒、荧光微粒(Merck) 、顺磁微粒、量子点,32,胶体金技术发展展望(二),检测仪的发展：胶体金定量仪（ESE）、荧光定量仪(ESE，Biosite)；磁微粒检测仪（Magna Biosciences）,33,胶体金技术发展展望(三),新材料的使用：Whatman Fusion 5材料不吸附或极低吸附蛋白 材料“四和一”，节约了60%的组装劳动力 检测线和质控线上的包被试剂，需先与乳胶微粒共价，或pH4时直接包被 Conjugate复合物需定量喷点灵敏度比NC膜稍高，检测时间大大缩短（从5-10分钟缩短到1分钟）,34,胶体金技术发展展望(四),新层析模式：Amic 4 Castchip,35,谢谢!,联系方式: 周军 BioDot中国 手机:13701763579 电邮:内部交流，版权所有,
