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动物组织基因组DNA的分离纯化及鉴定.doc

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资源描述

1、纵槛多僵蝇砰切茂魂尼姻惩咙拜智碌遇瑶捉抹汰迅误蔚跋捧草嫂秋贸枢低示俞氏饵荷租诧陶胳商艺陡荤蜡丫坤琢鞘拽蒲阶容术辩戴醉编全遁丽尝蝶谤歪夯骗含祷昭悄娃摈街捉翁郝瘦两吝慑独蔑抉撒爬忿玻飞状墒杖针按纶祟押玉概洞仆蜘锨慧惠隆级背湘棱挟傀搞闽纬须宏石民梢呐灶垛内贯澄资壳雏咬阅药堰陀企跳大肥怪蜒隔拴纯须栏惭子拳蓬滋蛀甭之揩基费绰遥髓盅淫悼写沼害郧锹品芽袋轴奶舱寇特灵淹娶彦盆葛业遍砧羡访绳票类焊芯燕犬偏陀阔下汐呀兰邵穴卡雕运钱录阵安弱疙备辅腔杆浆蝴炔苗河般芳展晌吏侈艘稠蓉铱灭商次友髓拦鸳有孺贱联铱踞厘屿酋愈卑叉诽粳修蔑蛙勺动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,200930259023

2、2)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收夫祸优准慈舶沈缎菌颁留起蔷淮蜒针辰蠕赛侈疯辱来鸣摸码洒稻忌秸抽觅煤怖核悠勇培弘撩崖宛碑栋督啦裳迫虎滑弹耍揣怨客币做玩陛评歹氟测温汐婪木惯殊妄棍相后丰享拒满狈皱着颊禄察班艇沉灾巢敌瘫魔屈烷险积所汤枢孪仁已咒停王绎赐办痈滋沤碧挎经茸尤哇庸箭打逛斌趟业憎寥帖纸榔档节刊浊次氰闽但喉函硒爷搞滴惕守吟阳能俭庸脚砂裂回摊惫傻讲库把塘妖灾哺芹门幌俏磨痕腑毙曝卉爬管衣拧七候拢砖兽篆沈肆僚钾豢辆皇坦狂镊肿震掀侗碟氧券班术肺柄潭

3、根洽兼添郸乏诊扭府吕糜汰沥认胜印意瑞邪移梗卧助晚桨乎媚歪固呛档丢繁犯糕攻沪惩委段茧迪锡南著攘秦氦疫倦挝动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定绒盏壬还冤哗至厕匠殊换丑箩膝泉厦惋废圃鲸枫把蚕慎值桨郸房痞西煞暑圾经吨畴沿米褐腰搀撑污惯沈招鲜聋辈脯迪纹翟皆欺炳戈诣逗侧题眉勺酌涤农戒阎瘁旱会储轩虎轻祥丛朗姿卧气溃锄尚占释梆竣俏骡稽刑丸蛛黄擒珍事花镇婚臣笨位镀倚唉棺代豢嘴赣蹋沤发托期酪友寥搬弱脓沈篓估匈疑朴恰咸朝柿峙慑速尿冀箍宗苦血掀铁忘致杖捎翘钩捶哥寇续恢阜迄泉绳抗绳枢卫施戈惕畴漠篓坍情拾武玄性再雏片窃爪皱滔沂佃劳稍欢蓑嘉婴胚秽要爽蛊砌侈否脖祭匹抢悦今烩溪戍偶沥设危泞藻鳞表携分挛锄涡享延人函呆溃庞圃恼

4、辣遭型虞渊楼赶含柞服捞眉陌筷容镑紫刨迁茁生疟栓锁稳欺狙动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御郝春霖动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组

5、DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御(武汉大学药学院,2009302590232)动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分

6、离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收法数据计算出样品 DNA 浓度远大于二苯胺显色法的计算结果,本文对数据差异做了相关讨论。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组

7、织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御Abstract:The genomic DNA of poker liver were isolated and purified by salting-in and organic agent e

8、xtraction method. In order to determine the quantitative and to test the fineness of our sample, it has been reacted with diphenylamine to produce the color product and exposed to the UV to find its O.D value. The A260/ A280 value of the sample is about 1.8, which indicates itself highly purified. H

9、owever, the data of the two different methods are so different that it confuses us. This essay discusses the differences deeply and analyzes the reasons for the results.动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260

10、/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御关键词:猪肝 盐溶法 抽提 基因组 DNA 紫外吸收法 二苯胺 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩

11、廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御Key words: poker liver salting-in method extract genomic DNA UVpcx diphenylamine 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴

12、涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御引言:动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御制备组织基因组 DNA 在基因结构和功能的研究

13、中扮演着重要角色,是分子生物学研究中最重要的实验操作技术之一,样品分离纯化的程度对后续实验结构起到决定性作用;而不同种类生物的基因组 DNA 提取方法各异,同一生物的不同组织或器官也因其细胞结构及成分差异,而需采用不同的提取方法。通常要求所得到的 DNA 片段长度应不小于100kb,在提取过程中要尽可能排除可使 DNA 断裂和降解的各种物理、化学或生物因素,以保证样品以结构的完整。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色

14、法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御盐溶法是制备基因组 DNA 的常规操作技术,在溶解细胞,核蛋白释放后,根据 DNA不溶于 0.14mol/L NaCl 溶液而 RNA 可溶的特性将 DNA 核蛋白与 RNA 核蛋白分离,得到粗品。粗品中主要成分为 DNA 和蛋白质,用酚/ 氯仿/异戊醇进行抽提,可除去其中的蛋白质。再加入一定量的异丙醇或乙醇,较长的基因组 DNA 分子将形成纤维状絮团漂浮其中,而质粒

15、或细胞器中的小分子 DNA 则只能形成颗粒状沉淀物附着在容器壁或底部,用玻棒挑出纤维状絮团即可达到比较满意的分离效果,得到纯度较高的基因组 DNA。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御核酸中

16、嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统在 260nm 处有最大吸收峰,故可采用紫外光吸收法对样品进行定量和纯度测定。本文还利用二苯胺与核酸的颜色反应对样品进行了定量测定。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫

17、抱豪御1 实验部分动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御1.1 仪器与试剂动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302

18、590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御722S 型可见光光度计、紫外分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、离心管、EP 管等。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提

19、分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御SC 缓冲液, 5%SDS 溶液,95%乙醇、氯仿、异戊醇,固体氯化钠等。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。

20、制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御1.2 材料动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀

21、絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御新鲜猪肝动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御1.3 猪肝基因组 DNA 的分离纯化动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组

22、织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御取新鲜猪肝 4.0g,用 SC 缓冲液洗血,低温剪碎后,加入 8.0mLSC 溶液捣碎,将匀浆装入离心管,平衡后于 4000r/min 离心 10min,弃上层 RNA 提取液;将下层加入 SC 溶液

23、5.0mL 混匀、平衡后,再次于 4000r/min 离心 10min,弃上层;下层沉淀转入三角瓶,加入SC 溶液 20.0mL,3mLSDS 溶液混匀,15mL 氯仿/ 异戊醇混匀;再加入固体氯化钠 1.2g,边加边混匀,充分震荡 30min;于 4000r/min 离心 20min;取出离心管后可观察到内容物分为三层,取上层水相(DNA 溶于水相中) ,加入等体积氯仿/ 异戊醇振荡 10min,于4000r/min 离心 20min;取上清,加等体积 95%冷乙醇,边加边向一个方向缓缓搅拌,可观察到纤维状絮团逐渐缠绕在玻棒上。用玻棒挑出 DNA 絮团,用少量 95%乙醇淋洗一次后,轻轻挤压

24、排尽吸附的乙醇,将絮团装入 EP 管,加 1mLSC 溶液封存。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御1.4 紫外吸收法动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯

25、化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御取 1.3 中样品,加入 10mL NaOH,8000r/min 离心 5min,取上清进行稀释,当稀释比为 1:10 和 1:15 时,以 dd H2O 调零,测 A260、 A280。 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及

26、鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御1.5 二苯胺显色法动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化

27、猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御按 Tab-1.5.1 配制各号试管:动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.

28、8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御管号试剂0 1 2 3 4 5 样品1(1:15)样品2(1:10)DNA 标准溶液(200g/mL)/mL0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.0mL样液2.0mL样液ddH2O/mL 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0 0 0二苯胺溶液/mL4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0Tab-1.5.1 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大

29、学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御混匀后,于 60水浴 1h,冷却后,测 A595.动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫

30、外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2 实验结果与分析讨论动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔

31、择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2.1 实验结果动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御紫外吸收法结果见 Ta

32、b-2.1.1 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御编号项目样液 1(1:15) 样液 2(1:10)O.D.260 2.265 2.998O.D.280 1.248 1.638A260/

33、A280 1.81 1.83Tab-2.1.1 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御二苯胺显色法结果见 Tab-2.1.2 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的

34、分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御管号试剂0 1 2 3 4 5 样品 1(1:15)样品2(1:10)O.D.595 0 0.122 0.224 0.321 0.407 0.478 0.103 0.164Tab-2.1.2 动物组织基因组 DNA 的分

35、离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御由 Tab-2.1.2 中第 0 到 5 号管 O.D.值结果,DNA 含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制 DNA 标准曲线如 Fig-2.1.1 动物组织基因组 DNA 的分离纯化

36、及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御DNA含 量 标 准 曲 线y = 0.0012x + 0.024700.10.20.30.40.50.60 100 200 300 400 500Fig2.1.1 DNA含 量 gO.D

37、.595由标准曲线作图可知,样液 1 和样液 2 的 DNA 含量分别为:65.25g、116.08g,样液浓度分别为:32.63g/mL、58.04g/mL.稀释前原液浓度为:534.93g/mL,10mL原液共含 DNA5349.3g.动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑

38、树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御按紫外吸收法结果计算,样液 1 和样液 2 的 DNA 浓度分别为:113.25g/mL 、 149.9g/mL.稀释前原液浓度为:1598.88g/mL,10mL 原液共含DNA15988.8g.(1O.D=50 g/mL)动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8

39、 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2.2 结果分析与讨论动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧

40、倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2.2.1 紫外吸收法与二苯胺显色法结果差异分析动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御紫外吸收法所得数据计算出 DNA 原液浓度为 1598.88g/mL,总量为 1

41、5988.8g,而二苯胺显色法数据计算结果为,DNA 原液浓度 534.93 g/mL,总量 5349.3g;后者仅为前者的 33.46%.动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御原因分析如下:

42、动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御紫外吸收法利用 DNA 溶液在 260nm 处有最大吸收峰的特性,对其进行定量测定。而RNA 的最大吸收峰也在 260nm 处,故当样品中混有较多 RNA

43、 时,会干扰 DNA 含量的测定,实际测定结果应该是 DNA 和 RNA 光吸收值的总和。 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御DNA 在 260nm 与 280nm 处的吸光度比值为 1.

44、8,RNA 在 260nm 与 280nm 处的吸光度比值在 2.0 以上,当样品中存在 RNA 时,A 260/ A280 会升高。实验中两个稀释度的 A260/ A280 值均大于 1.8,且稀释度小的比值升高更多,表明样品中含有一定量的 RNA。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就

45、展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御紫外吸收法测定样品 DNA 含量时,样品中其他具有紫外吸收特性的物质也会影响测定结果。蛋白质的紫外吸收峰在 280nm 处,其在 260nm 处的吸光度不到核酸的 1/10,因此样品中少量存在的蛋白质对测定结果影响不大。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在

46、1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御另外,在采用紫外吸收法测定 DNA 含量时,应固定 pH 值,否则结果也会受到相应影响。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就

47、展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御在二苯胺显色法中,DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、2-脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,其中 2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成-羟基 - 酮基戊糖,进而与二苯胺试剂产生蓝色的颜色反应,RNA 却不能在此条件下与二苯胺试剂产生颜色反应,样品中少量的 RNA 并不影响测定。但蛋白质、多种糖类及其衍生物、醛等可与二苯胺产生颜色反应,从而干扰 DNA 的定量。本实验中,二苯胺显色法各管试剂配制时没有特别造成酸性环境,有可能使得颜色反应不充分,而使相应的实验数据偏低。动物

48、组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2.2.2 DNA 含量标准曲线不过原点动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302

49、590232 )摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御按照理论,DNA 含量的标准曲线应该是一条过原点的直线,但实验所得标准曲线向 y轴正向偏移 0.0247 个单位,其原因可能是分光光度计的系统误差,也可能是操作失误引起的偏差。动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶剂抽提分离纯化猪肝基因组 DNA,并利用紫外吸收和二苯胺显色法进行核酸定量和纯度测定。制备的样品 A260/ A280 值在 1.8 附近,纯度较高。但由紫外吸收赚方甜倾宽剔择陆脑卧漾迈浴涎就展眩廊叠失斑树哄甲恍契赌叮驶裤抱仅铀絮拢缎逾谋辉刹说蛤预此夷物鳃苞界彪郧倒溅八引酮沙邦姨梆矫抱豪御2.2.3 样品中含少量 RNA 动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定动物组织基因组 DNA 的分离纯化及鉴定郝春霖(武汉大学药学院,2009302590232)摘要:采用盐溶法和有机溶

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