1、1高中化学选修 1 速简笔记适于加强记忆，配套课本使用5.1 DNA 粗提取、鉴定11）DNA 在 0.1mol/LNaCl 溶液中溶解度最大，2mol/L 溶解度最小。DNA 不溶于酒精溶液，某些蛋白质能溶，进一步分离。2）DNA 在 80C 以上变性，多数蛋白质不能忍受 6080C。洗涤剂瓦解细胞膜，对 DNA 无影响；蛋白酶水解蛋白质。3）DNA、二苯胺，沸水浴，蓝色。21）选取：DNA 含量较高的生物组织。2）动物：加蒸馏水，搅拌，过滤，收集滤液。植物：切碎，加洗涤剂、食盐，搅拌研磨，过滤，收集滤液。3）纯化 DNA：控制 NaCl 浓度：2mol/L，过滤不溶物质，0.14mol/L
2、 ，析出 DNA，过滤溶液中杂质，2mol/L，溶解 DNA。直到丝状物不再增加为止。滤液中加嫩肉粉，木瓜蛋白酶。滤液 6075C 恒温水浴箱保温，严格控制温度范围。4）析出鉴定：过滤，加与滤液体积相等、冷却的 95%酒精溶液，静置，白色丝状物。用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起，滤纸吸去水分。2mol/LNaCl 溶液溶解，二苯胺试剂，混合均匀，沸水加热，冷却，变蓝。31）血液，加柠檬酸钠，防止凝固。2）加洗涤剂时，轻缓、柔和，否则容易产生大量泡沫。加入酒精、搅拌，以免加剧 DNA 分子破裂，不能形成絮状沉淀。3）二苯胺试剂现配现用：溶于冰醋酸，加浓硫酸，棕色瓶保存，临用前加 2%乙醛溶液。4）提取
3、高纯度 DNA，CTAB、SDS 、吐温。41）蒸馏水使鸡血细胞破裂：低渗液体，水分进入细胞胀破，搅拌加速细胞膜、核膜破裂。2）洗涤剂：离子去污剂，溶解细胞膜，有利于 DNA 释放。食盐：有利于 DNA 溶解。尼龙布过滤。3）研磨目的：破碎细胞壁，使核物质容易溶解在 NaCl 溶液中。不充分：DNA 提取量减少，导致看不到鉴定效果。4）滤液中含核蛋白多糖、RNA。5）反复溶解析出 DNA：能除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质。6）方案原理：一 DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同二蛋白酶分解蛋白质，三蛋白质、DNA 变性温度不同。5.2 多聚酶链式反应11）分析细胞内参与 DNA
4、 复制的各种组成成分与反应条件。2）DNA 羟基末端 3端，磷酸基团末端 5端，DNA 合成方向：从子链 5端向 3端延伸。3）变性：80100C 双链解体。4）条件：DNA 模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、TaqDNA 聚合酶、控制温度反复进行。5）一般经历三十多次循环，步骤：94C 变性、55C 复性 、72C 延伸。6）循环之前进行一次预变性，增加大分子模板 DNA 彻底变性的概率。7）两种引物使 DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。8）微量离心管，0.5mL，微量移液器，PCR 仪或三个恒温水浴锅来回转移。221）使用前高压灭菌
5、，避免外源 DNA 因素的污染。2）缓冲液和酶分装，-20C 储存，使用前在冰块上缓慢融化。3）每吸取一次，移液器枪头必须更换。盖严离心管后，用手指轻轻弹击侧壁，使混合均匀。离心机，使反应液集中在离心管底部。4）DNA 在 260nm 紫外线波段有一强烈吸收峰。DNA 含量鉴定：50 倍稀释，蒸馏水对照，波长 260nm 处，紫外分光光度计读数调零，加入比色杯中，测定光吸收值，计算含量：（50：标准厚度 1cm 比色杯中，OD206 为 1 相当于 50g/mL双链DNA）DNA 含量（g/mL ）=50 读数 稀释倍数5）PCR 突出优点：快速、高效、灵活、易于操作。5.3 血红蛋白的提取和
6、分离11）凝胶色谱法：分离蛋白质，相对分子质量，凝胶，多孔球体，多糖类化合物，葡聚糖、琼脂糖，较小的易进入通道，路程长，速度慢，较大的在外部移动，短，快。洗脱。2）一定范围内，缓冲溶液，维持 PH 基本不变，12 种缓冲剂溶解于水，调节使用比例。体外溶液 PH 与体内基本一致。3）电泳，带电粒子在电场作用下发生迁移。生物大分子一定 PH 下带上正负电。向着与所带电荷相反的电极移动。带电性质不同、分子大小、形状不同，产生不同迁移速度。4）琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定蛋白质分子量，SDS-聚丙烯酰胺电泳。迁移率取决于所带净电荷的多少以及分子的大小。加入 SDS，消除净电荷对迁移率的影响
7、，使蛋白质发生完全变性，解聚成单条。测定结果只是单条肽链的分子量。SDS 负电荷大大超过原有分子量，电泳迁移率完全取决于分子大小。2蛋白质的提取和分离：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。1）血液中 90%是血红蛋白，四条肽链，两条 -肽链、两条 -肽链。每条环绕一个亚铁血红素集团，携带一分子氧或二氧化碳，含有血红素呈红色。2）红细胞洗涤：去除杂蛋白，有利于分离纯化。采集的血样及时分离红细胞，低速短时间离心。胶头吸管吸出上层透明黄色血浆。下层暗红色红细胞液体倒入烧杯，五倍体积 0.9%生理盐水，搅拌、离心、重复三次，直至上清液不再呈现黄色，表明已经洗涤干净。3）血红蛋白释放：加蒸馏水至原体积，4
8、0%甲苯，磁力搅拌器，红细胞破裂。4）分离血红蛋白溶液：离心管，2000r/min，4 层，从上到下，无色透明甲苯层，白色薄层固体：脂溶性物质沉淀层，红色透明液体：血红蛋白水溶液，其他杂质暗红色沉淀物。滤纸过滤，除去脂溶性物质，分液漏斗，静置，分出下层红色透明液体。5）透析：透析袋，20mmol/L 磷酸缓冲液，pH 为 7.0。6）凝胶色谱柱：打孔，刀切出凹穴，移液管上部不得超出橡皮胶凹穴底面，尼龙网，圆片，100 目尼龙纱，下端出口部连接尼龙管，螺丝夹控制开关，收集器。7）装填：垂直固定，根据色谱柱内体积计算所需的凝胶量。交联葡聚糖凝胶，G 凝胶交联程度、膨胀程度、分离范围，75 凝胶得水
9、值。蒸馏水充分溶胀，凝胶悬浮液。尼龙管打开，一次性缓慢倒入，轻轻敲动，使装填均匀。不能有气泡存在，有气泡须重装。完成后，立即连接缓冲液洗脱瓶，50cm 操作压，20mmol/L 磷酸缓冲液，充分洗涤平衡，使装填紧密。8）样品加入洗脱：打开流出口，缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。3吸管，1mL 样品加到顶端，不要破坏凝胶面，打开出口，渗入凝胶床内。样品完全进入，关闭出口。20mmol/L 磷酸缓冲液 ，适当高度，缓冲液洗脱瓶，打开出口，洗脱。待红色蛋白质接近底端，试管收集流出液，每 5mL 一管，连续收集。31）洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白。离心速度过高、时间过长，使白细胞等一同沉淀，
10、达不到分离效果。2）加速凝胶膨胀，加洗脱液湿凝胶，沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，节省时间，除去微生物，排除胶粒内的空气。3）气泡会搅乱蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒。4）蛋白质分离时，红色区带在洗脱过程均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。1.1 果酒果醋制作11）果酒：酵母菌，异养型，兼性厌氧型，发酵温度 1825C，真菌（真核） ，出芽生殖。有氧时，有氧呼吸，大量繁殖 20C，无氧时，酒精发酵。C 6H12O62C 2H5OH+2CO22）葡萄酒自然发酵，附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，色素进入发酵液，呈深红色。3）缺氧、酸性发酵液中，酵母菌可繁殖生长，大多
11、数不适应。4）秋季生长繁殖，冬季休眠，春夏旺盛，土壤，传播到葡萄上。21）果醋：醋酸菌，异养型，好氧型，3035C，原核生物，二分裂生殖。2）对氧气的含量特别敏感，氧气、糖源充足，糖分解为醋酸，缺糖源时，乙醇分解为乙醛，变为醋酸。C 2H5OH+O2CH 3COOH+H2O3）挑选葡萄，冲洗，榨汁，酒精发酵（果酒） ，醋酸发酵（果醋）4）带盖的瓶子，12h 拧松一次，放出 CO2，拧紧，产生酒精后，打开，盖纱布，醋发酵。5）充气口：醋酸发酵，连接充气泵。排气口：排出 CO2，防止爆裂。长而弯曲的胶管，防止空气微生物污染。出料口：取样。制酒时关闭充气口，制醋时，输入氧气。先通气后密封，有氧呼吸大
12、量繁殖，无氧呼吸酒精发酵。31）选择新鲜的葡萄，冲洗，除去枝梗。2）防止发酵液污染。榨汁机清洗干净，晾干。发酵瓶 70%酒精消毒。装入后封闭充气口。3）留有 1/3 的空间，暂时储存 CO2。控制好温度、发酵时间。4）重铬酸钾检测酒精，酸性呈灰绿色。5）先冲洗再除去枝梗，避免除去枝梗时葡萄破损，被杂菌污染。1.2 腐乳制作11）毛霉：异养型，好氧型，1518 C，丝状真菌（真核） ，孢子生殖。2）发达白色菌丝，蛋白酶分解蛋白质，脂肪酶分解脂肪为甘油和脂肪酸。21）毛霉生长：含水量 70%豆腐，笼屉，空气中的毛霉孢子。现代严格无菌，避免其他杂菌污染，保证产品质量。2）加盐腌制：分层整齐排放瓶中，
13、逐层加盐，层数加高增加盐量，接近瓶口表面铺厚。加盐：析出水分，使其变硬，不会过早酥烂；抑制微生物生长，避免变质。3）配制卤汤：酒、香辛料。加酒 12%：抑制微生物生长，使具有独特香味。香辛料：调制风味，防腐杀菌。4）密封腌制31）控制好材料用量，盐浓度过低，不足以抑制微生物生长，过高影响口味。2）酒含量过低，不足以抑制，过高成熟时间延长。3）防止杂菌污染，玻璃瓶洗刷干净，沸水消毒。4装瓶迅速小心，胶条封口，最好将瓶口先通过酒精灯火焰，防止瓶口被污染。41）盐可防止杂菌污染，避免豆腐腐败。2）含水量过高豆腐不易成型。3）皮是前期发酵时表面生长的匍匐菌丝，使腐乳成形，对人体无害。4）越接近瓶口，杂
14、菌污染越有可能，铺厚可防止杂菌污染。5）品质影响因素：菌种、杂菌，温度，发酵时间，调味品。1.3 泡菜制作11）乳酸菌：异养型，厌氧型，原核，二分裂生殖，无氧时分解葡萄糖为乳酸。2）亚硝酸盐，白色粉末，易溶于水，食物添加剂，0.30.5g 中毒，3g 死亡。绝大部分随尿排出，特定条件下，亚硝胺，致癌、致畸、致变异。3）选择原料，处理，称取食盐，配制盐水，泡菜盐水，加入调味料，装坛，发酵，成品，测定亚硝酸盐含量。4）清水、盐 4:1，配制盐水， 煮沸冷却，新鲜蔬菜混合均匀，装到半坛，香辛料，盐水没过全部菜料，盖好，坛盖边沿水槽注满水，保证无氧环境。经常向水槽中补充水，发酵时间由室内温度决定。5）
15、盐酸酸化，亚硝酸盐、对氨基苯磺酸，重氮化反应，N-1-萘基乙二胺盐酸盐，形成红色染料，与已知浓度的标准显色液，目测比较估算含量。21）泡菜坛火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好。检查，坛口向上压入水中，有无渗水。2）控制好腌制时间、温度、食盐用量，温度过高、用量过低、时间过短，细菌大量繁殖，亚硝酸盐增加。10d 后，亚硝酸盐含量开始下降。3测定亚硝酸盐含量：1）配制溶液：4mg/mL 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸、20%盐酸。2mg/mL N-1-萘基乙二胺盐酸盐：溶于水，避光保存。5g/mL 亚硝酸盐溶液 ，水溶解，定容。提取剂：氯化镉、氯化钡，溶于蒸馏水，浓盐酸调 PH 为 1,。
16、氢氧化钠乳液，2.5mol/L 氢氧化钠溶液。2）制备标准显色液：刻度移液管，0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50mL 亚硝酸盐溶液，（1、2、3、4、5、7.5g 亚硝酸盐） ，50mL 比色管，空白对照。2.0mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置，1.0mL N-1-萘基乙二胺盐酸盐，蒸馏水，混匀，观察颜色梯度变化。3）制备样品处理液：3 坛泡菜，标记，泡菜，榨汁机粉碎，过滤，汁液。转移到容量瓶，蒸馏水，提取剂，摇床振荡，氢氧化钠溶液，蒸馏水定容，过滤。转移，氢氧化钠乳液，定容，过滤，溶液变得无色透明。4）比色：吸取滤液，对氨基苯磺酸溶液，N-1-萘基乙二胺盐酸盐，定容
17、，静置。比较，找出最相近，记录计算，每 2d 测一次。41）含有抗生素牛奶不能发酵成酸奶，杀菌。2）少吃腌制蔬菜，过久变质，硝酸盐被微生物还原成亚硝酸盐，危害人体。3）泡菜坛内一层白膜，产膜酵母繁殖。2.1 微生物实验室培养11）培养基：液体培养基、固体培养基（琼脂）：微生物表面生长，形成肉眼可见的菌落。合成培养基、天然培养基（成分不明） ，选择培养基、鉴别培养基。5水、碳源、氮源、无机盐。pH、特殊营养物质、氧气。单质碳不能作为碳源，只有固氮微生物才能利用 N2。乳酸杆菌 维生素，霉菌 酸性，细菌 中性或碱性，厌氧微生物 无氧环境。2）纯净培养物，关键，防止外来杂菌入侵。无菌技术：空间、衣着
18、、手消毒，器皿、接种用具、培养基灭菌，实验操作必须在酒精灯火焰附近进行，避免与周围物品相接触。3）消毒：较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物。煮沸消毒法 100 C56min，巴氏消毒法：不耐高温液体，7075 C 煮 30min、80 C15min。75%酒精消毒双手，氯气消毒水源。灭菌：强烈理化因素杀死物体内外所有微生物、芽孢、孢子。灼烧灭菌，酒精灯火焰充分燃烧层，迅速彻底。干热灭菌，干热灭菌箱，160170 C，耐高温、需保持干燥的物品。高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌锅，水加热煮沸，冷空气排出，密闭，100kPa，121 C。紫外线照射，喷洒消毒液，石炭酸、酶酚皂溶液。21）
19、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算：100mL称量：准确，牛肉膏黏稠，玻璃棒挑取，称量纸，牛、蛋白胨吸潮，迅速，及时盖上瓶盖。溶化：牛肉膏、称量纸一同放入烧杯，少量水，加热，分离，玻璃棒取出纸。蛋白胨、氯化钠，搅拌，溶解，琼脂，加热熔化，搅拌，防止琼脂糊底烧杯破裂，蒸馏水至 100mL。灭菌：培养基，转移到锥形瓶，棉絮，牛皮纸，皮筋勒紧，高压灭菌锅，培养皿，旧报纸包紧，干热灭菌箱。倒平板：冷却到 50 C 左右， 酒精灯火焰附近。培养皿放好，右手锥形瓶，左手拔棉絮。右手锥形瓶，瓶口迅速通过火焰。左手打开培养皿，稍大于瓶口的缝隙，右手倒入培养基，左手立即盖上。平板冷却凝固，倒过来放置，皿盖下皿底上
20、。2）纯化大肠杆菌：平板划线法、稀释涂布平板法。使聚集在一起的微生物分散成单个细菌，在培养基表面形成单个菌落，以便纯化菌种。平板划线法：接种环灼烧冷却，火焰旁打开菌液试管棉塞，试管口通过火焰，接种环沾取一环，试管口通过火焰盖上，左手打开培养皿缝隙，右手接种环迅速伸入，划三到五条平行线，盖上，不要划破培养基，灼烧接种环冷却，第一区域划线末端往第二划线，三四五，最后一区不要与第一区相连，平板倒置，培养箱培养。稀释涂布平板法：系列稀释：各 9mL 水，6 试管，灭菌，10 1106 编号，移液管，1mL 菌液，注入 101，移液管吹吸三次，充分混匀。从 101 吸取 1mL 注入 102，重复。移液
21、管灭菌，火焰附近 12cm 处操作。涂布平板：涂布器，浸入 70%酒精，取少量菌液（不超过 0.1mL） ，滴加培养基上，沾有少量酒精涂布器，引燃，酒精燃尽后，冷却，均匀涂布表面，可转动培养皿。取出时让多余酒精滴尽，再引燃，不要将过热涂布器放入酒精，以免引燃酒精。接种后、未接种，37C 恒温箱 。3）菌种保藏：临时保藏：固体斜面培养基，4C 冰箱，每 36 个月，转移到新鲜。保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。6长期保存：甘油管藏，3mL 甘油瓶，1mL 甘油，灭菌，1mL 菌液，混匀，-20C 冷冻箱。31）灭菌冷却，用手触摸锥形瓶，感觉温度下降到刚好不烫手时，开始倒平板。2）瓶口通过火
22、焰，灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基。3）平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高，平板倒置，使培养基表面水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染。4）培养基溅在皿盖和皿底之间，空气中的微生物可能在这里滋生，最好不再使用。5）第一次灼烧接种环，避免可能存在的微生物污染培养基。每次划线前灼烧，杀死上次划线后残留的菌种，使下次划线菌种直接来源于上次划线末端，从而通过划线次数增加，每次划线时菌种数目减少，以便得到单个细菌菌落。划线结束后灼烧，杀死残留菌种，以免污染周围环境、感染操作者。6）灼烧冷却再划线，以免温度太高，杀死菌种。7）从末端开始划线，线条末端细菌数目少，能
23、使每次划线菌种数目随着划线次数增多而减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。8）应从各个细节保证无菌，所有操作在酒精灯附近进行，酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触其他任何物体，吸管要放在酒精灯附近。9）营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。10）将未接种的培养基在恒温箱中保温 12 天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2.2 土壤细菌分
24、离与计数11）寻找目的菌株时，必须根据它对生存环境的要求，到相应的环境中寻找。微生物筛选，人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基。碳源：葡萄糖、尿素，氮源：尿素，只有能合成脲酶的微生物才能生长。2）统计菌落数目。稀释涂布平板法，统计样品活菌数目，稀释度足够高。一个菌落来源于一个活菌，统计平板上的菌落数，推测。选择菌落数为 30300。统计的菌落数往往比活菌实际数目低，统计结果用菌落数表示。血球计数板计数法，显微镜直接计数，不能区分死活，不适于运动细菌，个体微小看不到。3）设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高可信度。21）土壤取样：7090%
25、细菌，酸碱度接近 中性的潮湿 土壤，38cm 土壤层。铲去表层土。2）样品稀释：稀释程度直接影响菌落数目。一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在 30300 之间，便于计数。测定细菌数量，10 4、10 5、10 6，放线菌 103、10 4、10 5，真菌 102、10 3、10 4。3）微生物培养观察：细菌 3037C12d，放线菌 2528C57d，霉菌 2528C34d。每隔 24 小时统计一次，选取数目稳定时的为结果，防止因培养时间不足而遗漏菌落数目。同种微生物一定条件下，稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色。表格。形态：标点状、圆形、丝状、不规则状、假根状、纺锤状突起：扁
26、平、隆起、凸透镜状、垫状、脐突状边缘：完整、波状、裂片状、啮蚀状、丝状、卷曲状731）无菌操作：铁铲、信封使用前灭菌，火焰旁称取土壤，倒入锥形瓶，塞好。全部操作在火焰旁进行。2）做好标记。标记培养皿，培养基种类、培养日期、平板上培养样品的稀释度。3）耗时太长，事先制定计划，提高工作效率。4每克样品中的菌株数=（C / V） MC 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V 涂布平板时所用稀释液体积 mL，M 稀释倍数2.3 分解纤维素微生物分离11）纤维素：棉花中含量最高，复合酶，C 1 酶、C X 酶、葡萄糖苷酶。前两种分解纤维素为纤维二糖，第三种分解纤维二糖为葡萄糖。滤纸条，醋酸-醋酸钠缓冲液
27、，纤维素酶（7080U/mL） ，振荡 140r/min，滤纸完全分解。2）刚果红染色法：筛选纤维素分解菌，颜色反应。刚果红 CR，染料，纤维素，红色复合物，不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。2土壤取样，选择培养，梯度稀释，涂布鉴别培养基上，挑选产生透明圈菌落，发酵培养1）土壤取样：富含纤维素环境，多年落叶腐殖土，多年积累枯枝败叶，滤纸埋在土里。2）选择培养：液体培养基，碳源：纤维素，对照：牛肉膏蛋白胨培养基。土样，30mL 选择培养基，锥形瓶，摇床，振荡，直至培养液变混浊。吸取，转移，新鲜选择培养基，振荡变混浊，吸取，稀释涂布，鉴别培养基。3）刚果红染色法：
28、长出菌落，1mg/mLCR 溶液，倒去 CR，1mol/LNaCl 溶液，倒掉NaCl。10mg/mLCR 溶液，灭菌，培养基 200:1CR 溶液加入，混匀，倒平板，长出菌落。4）发酵培养：纤维素酶，液体发酵、固体发酵。测定方法：纤维素酶分解滤纸后产生的葡萄糖定量测定。31）富含纤维素环境，生物与环境的相互依存关系，纤维素分解菌含量相对较高，获得目的微生物几率较高。2）滤纸埋在土壤中，使纤维素分解菌相对聚集，人工设置生存环境。深 10cm 腐殖土壤。3）两种染色法比较：优点：颜色反应基本为纤维素分解菌缺点：操作繁琐，使菌落之间混杂。优点：操作简单，不存在混杂。缺点：含淀粉物质，假阳性反应；有
29、些微生物降解色素，不易区分。4）选择培养浓缩所需微生物，选择培养条件下，能适应这种营养条件的微生物迅速繁殖，不适应的被抑制。3.1 菊花组织培养11）细胞分化：个体发育，形态、结构、功能，稳定性差异。2）离体植物组织或细胞，分裂，愈伤组织，排列疏松无规则，高度液泡化，无定形，薄壁细胞。脱分化，再分化。3）植物材料的选择直接关系到实验的成败。年龄、保存时间的长短。菊花：未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。4）MS 培养基，液体，大量元素、微量元素、有机物（甘氨酸、维生素） 、蔗糖、植物激素。生长素、细胞分裂素，启动细胞分裂、脱分化、再分化关键性激素。加强趋势。用量比例影响植物细胞的发育方向：生细：根
30、分化，生细：芽分化，生=细：愈伤组织。8pH：5.8 左右，温度 1822C，每日日光灯照射 12h。21）制备 MS 培养基：4C 保存，培养基母液。配制母液：大量元素浓缩 10 倍，微量元素浓缩 100 倍，常温保存。激素、维生素、用量较小的有机物 1mg/mL。根据浓缩倍数计算用量。配制培养基：1L 培养基，琼脂 ，加 800mL 蒸馏水，加热熔化 ，蔗糖，母液依次加入，蒸馏水定容，调节 pH，分装 ，锥形瓶，50mL 或 100mL。菊花茎段培养比较容易，不必添加植物激素。灭菌：培养基、器械，高压蒸汽灭菌。2）外植体消毒：生长旺盛的嫩枝，流水冲洗，少许洗衣粉，软刷轻轻刷洗，冲洗，无菌吸
31、水纸吸干表面，70%酒精，摇动 23 次，立即取出，无菌水清洗，吸干，放入 0.1%氯化汞溶液中，取出，清洗 3 次，漂净消毒液。考虑消毒效果、植物耐受能力。3）接种：70%酒精，擦拭工作台，点燃酒精灯，酒精灯旁进行，火焰灼烧灭菌。锥形瓶左侧，经消毒的菊花茎段，无菌培养皿，切成小段，左手锥形瓶，右手拉开绳子，右手手心攥封口膜，避免封口膜接触瓶口一面被污染。左手瓶，瓶口旋转通过火焰，右手镊子，夹取茎段，插入培养基。注意方向，不要倒插。每瓶 68 块，重新扎好。4）培养：无菌箱，定期消毒，1822 C，日光灯照射 12h。5）移栽：生根，打开封口膜，培养间，流水清洗根部，消过毒蛭石或珍珠岩，长壮，
32、土壤。6）栽培：记录生长情况。31）MS 培养基中，大量元素、微量元素提供所需无机盐，蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压，有机物满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS 培养基以大量无机营养为主。2）进行无性繁殖的植物，容易进行组织培养。3.2 月季花药培养11）被子植物，雄蕊，花丝、花药。花药囊状结构，花粉，花粉母细胞减数分裂，单倍体的生殖细胞。花粉发育，小孢子四分体时期、单核期、双核期。1 个小孢子母细胞，减数分裂，小孢子四分体时期，4 个单倍体细胞连在一起，单核期，彼此分离，4 个单细胞核花粉粒，浓厚原生质，核位于细胞中央（单核居中期）
33、 ，长大，核由中央移向一侧（单核靠边期） ，分裂，1 个生殖细胞核、1 个花粉管细胞核，形成两个细胞，1 个生殖细胞、1 个营养细胞，生殖细胞再分裂一次，2 个精子。2）成熟花粉粒两类：二核花粉粒：花粉管细胞核、生殖细胞核，精子在花粉管中形成。三核花粉粒，成熟前生殖细胞分裂两个精子，两个精子核、一个花粉管核（营养核） 。同一生殖细胞分裂形成的 2 个精子基因组成完全相同。3）绿色开花植物，双受精 种 子胚 珠胚 乳受 精 极 核个 极 核精 子 胚受 精 卵精 子卵 细 胞 N32（母本体细胞）珠被种皮，子房果实，子房壁果皮4）产生花粉植株两种途径：胚状体阶段发育；诱导培养基形成愈伤组织，诱导
34、分化。没有绝对的界限，取决于激素的种类及其浓度配比。细胞胚（胚状体） ，体细胞转变，形态上与合子非常相似，发育过程与合子胚类似。9花粉胚，单倍体性细胞产生，也可发育，单倍体植株。5）主要影响因素：材料的选择、培养基的组成。同一种，亲本植株的生理状况。花期早期的花药更容易。月季初花期：五月初到五月中旬。选择合适的花粉发育时期，某一时期对离体刺激敏感。单核靠边期，成功率最高。单核期之前质地幼嫩，极易破碎，之后花瓣松动，消毒困难。选择完全未开放的花蕾。亲本的生长条件、材料的低温预处理，接种密度。21）材料选取：镜检：确定是否处于合适的发育期。醋酸洋红法，焙花青-铬矾法 （花粉细胞核不易着色植物）蓝黑
35、色。醋酸洋红法：花药，载玻片，一滴 1%醋酸洋红，捣碎花药，盖玻片，显微镜检查。醋酸洋红：45%醋酸，煮沸，洋红，加热回流，冷却至 50C，过滤。焙花青-铬矾法：花药，卡诺氏固定液 ，固定，取出，载玻片，焙花青- 铬矾溶液，显微镜。卡诺氏固定液：无水酒精、冰醋酸，3:1 ，混匀。焙花青-铬矾：铬钾矾，蒸馏水，焙花青，混匀，加热至沸腾，冷却，过滤，蒸馏水定容。2）材料消毒：花蕾，70%酒精浸泡，取出，无菌水清洗，无菌吸水纸，0.1%氯化汞溶液，无菌水冲洗。3）接种培养：无菌条件下，除去萼片、花瓣，花药接种，培养基。剥离花药时，尽量不损伤花药，否则接种后容易从受伤部分产生愈伤组织。彻底去除花丝，与
36、花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。每瓶 710 个，25 C，不需要光照，幼小植株才需要光照。花药开裂，愈伤组织或胚状体。愈伤组织及时转移，分化培养基，再生植株。胚状体，尽快将幼小植株分开，分别移植，培养基。花粉培养，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组数目常会发生变化，鉴定筛选。4.1 果胶酶果汁生产11）果胶：植物细胞壁和胞间层的组成成分，半乳糖醛酸聚合，高分子化合物。不溶于水，影响出汁率，使果汁浑浊。2）果胶酶：瓦解植物细胞壁和胞间层，分解果胶为可溶性的半乳糖醛酸，澄清，总称。3）酶的活性：酶催化一定化学反应的能力，反应速度。单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增
37、加量。温度、pH、酶的抑制剂。4）控制好酶的用量，使果胶酶得到充分的利用，节约成本。苹果泥。21）一恒定温度设置 pH 梯度，一恒定 pH 设置温度梯度。30、35、40、45、50、55、60、65、70 C，5、6、7、8、9。2）搅拌制苹果泥，分装苹果泥、果胶酶、恒温水浴保温，设置梯度，加果胶酶，过滤果汁3）碘液检测，是否变蓝，酶是否具有活性。苹果汁体积、果汁澄清程度。4）果胶酶的最适用量：酶用量增加，过滤到得果汁体积增加，则酶用量不足；当酶用量增加到某个值时，再增加，体积不再改变，则酶用量足够。31）先将苹果切成小块，放入榨汁机，加适量水，搅拌，橙子，不必去掉橙皮。2）不同 pH，体积
38、分数 0.1%NaOH 溶液和盐酸调节。3）用果胶酶处理果泥，玻璃棒不时搅拌反应混合物，使果胶酶能充分地催化反应。4）分装恒温处理，保证底物和酶混合时的温度是相同的，避免果泥和酶混合影响混合物的温度，进而影响酶的活性。5）大规模生产果汁：水果，榨汁，瞬间高温灭菌 90 C，冷却，酶处理 45 C13h，离心处理，过滤，浓缩，瞬间高温灭菌，包装，制品。体积温度或 pH104.2 加酶洗衣粉洗涤效果11）加酶洗衣粉：酶制剂：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶。 （复合酶）应用最广泛、效果最明显：碱性蛋白酶、碱性脂肪酶。碱性蛋白酶，大分子蛋白质（血渍、奶渍）水解为可溶性氨基酸、小分子肽。 2）酶活性影
39、响因素：温度、酸碱度、表面活性剂。3）普通洗衣粉中含磷，微生物、藻类大量繁殖，水体污染，加酶洗衣粉，降低表面活性剂、三聚磷酸的用量。基因工程，耐酸、耐碱、忍受表面活性剂、较高温度，特殊水溶性物质包裹，隔离层。21）有效控制变量：大烧杯、固定水量，固定大小的新布，玻璃棒搅拌洗涤，洗衣粉用量，天平称量，污渍污染程度保持一致，滴加污染物量控制。2）探究过程中，考虑理论层面、日常生活中的具体情况。30、40、50 C。3）不同类型加酶洗衣粉的洗涤效果。污染物 蛋白酶洗衣粉 复合酶洗衣粉 普通洗衣粉油渍 汗渍 血渍 4.3 酵母细胞固定化11）葡萄糖异构酶：高果糖浆 42%生产，葡萄糖转化为果糖。稳定性
40、好，持续发挥作用，酶溶解于葡萄糖溶液，无法回收。2）固定化酶技术：固定，颗粒状载体，反应柱，柱子底端，筛板。酶颗粒无法通过筛板，反应溶液自由出入。葡萄糖溶液上端注入，下端流出。反应柱连续使用半年，降低生产成本，提高果糖的产量和质量。3）固定化酶、固定化细胞技术：包埋法（细胞） 、化学结合法、物理吸附法（酶） 。细胞个体大，酶个体小，个大的细胞难以被吸附或结合，个小的酶容易从包埋材料中漏出。固定的是一种酶，物理吸附法最容易，对细胞活性影响最小。发酵过程变成连续酶反应：包埋法。反应物大分子物质，化学结合法。4）包埋法固定细胞，均匀包埋，不溶于水的多孔性载体。海藻酸钠，包埋酵母细胞。21）酵母细胞活
41、化：缺水时休眠，重新恢复正常的生活状态。称量，干酵母，蒸馏水，玻璃棒搅拌，混合均匀，成糊状，放置。2）配制 CaCl2 溶液：0.05mol/L ，无水 CaCl2，蒸馏水，充分溶解。3）配制海藻酸钠溶液：海藻酸钠，水，酒精灯加热，边搅拌，调成糊状，直至完全溶化，蒸馏水定容。加热时用小火，或间断加热。4）结合：海藻酸钠溶液，冷却至室温，已活化酵母细胞，搅拌，混合均匀，注射器。5）固定化酵母细胞：固定速度缓慢滴加到 CaCl2 溶液，液滴在溶液中形成凝胶珠，浸泡。6）发酵：凝胶珠，蒸馏水冲洗，10%葡萄糖溶液，锥形瓶，25 C，无菌。7）海藻酸钠溶解速度较慢，加热促进溶解，小火间断加热：加热，取
42、下冷却：高温会杀死酵母细胞，搅拌，加热。加热过快，海藻酸钠会发生焦糊。8）检验凝胶珠质量：用力挤压不容易破裂，用力摔打容易弹起，质量合格。9）凝胶珠颜色过浅，海藻酸钠偏低，固定数目较少；形状不是圆形或椭圆，偏高。10）发酵会产生酒精，会看到有气泡生成，有酒味。6.1 植物芳香油的提取11）天然香料的来源：植物、动物。不同植物的根、茎、叶、花、果实、种子。2）芳香油的提取方法：蒸馏、压榨、萃取等。11芳香油的性质：挥发性强，成分复杂，以萜类化合物及其衍生物为主。21）水蒸气蒸馏法：水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物，冷却后水油分层。水中蒸馏：沸水中加热蒸馏。水上蒸馏：隔放在沸水上
43、加热蒸馏。水汽蒸馏：利用外来高温水蒸气加热蒸馏。适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油不足：有些原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解。2）压榨法：通过机械压缩力将液相物从液固两相混合物中分离出来。适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取3）萃取法：芳香油易溶于有机溶剂，溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。原料浸泡在溶剂中得到浸泡液有机溶剂挥发芳香油。适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中不足：有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质所有仪器必须事先干燥，保证无水。左边的部分通过加热进行蒸馏，中部将蒸馏物冷凝，右边的部分用来接收。安装仪器一般都按照
44、自下而上、从左到右的顺序。拆卸仪器的顺序与安装时相反。 （1）固定热源酒精灯。（2）固定蒸馏瓶，使其离热源的距离适当，并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直。（3）安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台平行。（4）连接冷凝管。保证上端出水口向上，下端进水口向下。 （5）连接接液管（或称尾接管） 。（6）将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接受器，接收瓶应在实验前称重，并做好记录。（7）将温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上。在蒸馏瓶中加几粒沸石，防止液体过度沸腾。打开水龙头，缓缓通入冷水，然后开始加热。加热时可以观察到，蒸馏瓶中的
45、液体逐渐沸腾，蒸气逐渐上升，温度计读数也略有上升。当蒸气的顶端达到温度计水银球部位时，温度计读数急剧上升。在整个蒸馏过程中，应保证温度计的水银球上常有因冷凝作用而形成的液滴。控制蒸馏的时间和速度，通常以每秒 12 滴为宜。分液漏斗的使用方法如下。（1）首先把活塞擦干，为活塞均匀涂上一层润滑脂，切勿将润滑脂涂得太厚或使润滑脂进入活塞孔中，以免污染萃取液。（2）塞好活塞后，把活塞旋转几圈，使润滑脂分布均匀。并用水检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏，确认不漏水。（3）将分液漏斗放置在大小合适的、并已固定在铁架台上的铁圈中，关好活塞。将待分离的液体从上部开口处倒入漏斗中，塞紧顶塞，注意顶塞不能涂润滑脂
46、。（4）取下分液漏斗，用右手手掌顶住漏斗顶塞并握住漏斗颈，左手握住漏斗活塞处，大拇指压紧活塞，将分液漏斗略倾斜，前后振荡（开始振荡时要慢） 。（5）振荡后，使漏斗口仍保持原倾斜状态，左手仍握在漏斗活塞处，下部管口指向无人处，用拇指和食指旋开活塞，使其释放出漏斗内的蒸气或产生的气体，以使内外压力平衡，这一步操作也称做“放气” 。（6）重复上述操作，直至分液漏斗中只放出很少的气体时为止。再将分液漏斗剧烈振荡23 min，然后将漏斗放回铁圈中，待液体静置分层。蒸馏完毕，应先撤出热源，然后停12止通水，最后拆卸蒸馏装置，拆卸的顺序与安装时相反。31）玫瑰精油的提取0.1g/mL 氯化钠溶液：促使油水混
47、合物（乳浊液）中油和水的分离。无水硫酸钠：吸收油层中的水分。实验步骤：采集玫瑰花：采集盛花期（5 月中上旬）的玫瑰花，清水清洗沥干。装入蒸馏原料：称取 50g 玫瑰花放入蒸馏瓶，添加 200mL 蒸馏水。安装蒸馏装置：按照从左向右、自下到上次序安装水蒸气蒸馏装置。加热蒸馏：控制蒸馏时间和速度（12 滴/秒） ，获得乳白色乳浊液；拆卸装置。分离油层：向乳浊液加入 NaCl 溶液后，利用分液漏斗分离出上面的油层。除去水分：向油层中加入无水硫酸钠，24h 后过滤，得到玫瑰油。注意事项：蒸馏时间不能过短，温度不能过高。2）橘皮精油的提取橘皮精油的主要成分：柠檬烯，主要分布在橘皮中。石灰水：防止压榨时滑
48、脱，提高出油率，降低压榨液黏稠度，过滤不堵塞筛眼。小苏打、硫酸钠：促进油和水的分离（用量分别为橘皮质量的 0.25和 5） 。实验步骤：橘皮的处理：将新鲜橘皮用清水清洗沥干。石灰水浸泡：用 78石灰水浸泡橘皮 24h。清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水彻底漂洗干净，沥干。粉碎和压榨：将橘皮粉碎，加入小苏打和硫酸钠后，用压榨机压榨得到压榨液。过滤压榨液：用布袋过滤，滤液再高速离心处理，分离出上层橘皮油。静置处理：将橘皮油在 510冰箱中静置 57d，分离出上层澄清橘皮油。再次过滤：将下层橘皮油用滤纸过滤，滤液与上层橘皮油合并，得到橘皮精油。静置处理目的：除去果蜡和水分。6.2 胡萝卜素的提取11）胡萝
49、卜素性质：橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。依据碳碳双键的数目划分为 、 三类。最主要为 -胡萝卜素。2）作用：治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；常用于食品色素；使癌变细胞恢复成正常细胞。3）提取 胡萝卜素的方法主要有三种：从植物中提取从大面积养殖的岩藻中获得利用微生物的发酵生产2实验步骤：粉碎：使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。干燥：脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。萃取1）萃取剂的选择：水溶性的：乙醇、丙酮水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、 乙醚、苯、四氯化碳等选择：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。2）影响萃取的因素主要因素：萃取剂的性质和使用量次要因素：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。3）
