1、紫薇的组织培养实验10 园林技术 1-2 班二班第一组组员：储海云 褚琴梅 董红侠 高小丽 耿蒙蒙 袁露露一 培养基的配置与灭菌1 实验目的： 学习并掌握 MS 培养基的配制和灭菌过程。2 实验原理：培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般含碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等,通常采用母液法配制。培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，确保无菌操作的顺利进行。3 实验材料、试剂和仪器设备1.试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/LNaOH, 1mol/LHCl,各类母液2.仪
2、器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH 试纸，锥形瓶等。4 实验步骤：4.1 培养基的配制A 确定配方:MS+ NAA 0.5 mg/L+ 6-BA 0.5 mg/LB 清洗玻璃器皿、用具及培养瓶C 把装有母液的试剂瓶从冰箱取出，在实验台上按顺序放好D 不锈钢锅里放入 750 ml 的蒸馏水E 称取琼脂 8g 放入锅中F 加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解G 量取母液： 浓缩 10 倍的大量元素 100 ml浓缩 100 倍的微量元素 10 ml浓缩 100 倍的铁盐母液 10 ml浓缩 50 倍的有机物母液 20 mlNAA 0.5 mg/L 取 4 ml6-BA 0.
3、5 mg/L 取 2 mlH 称取蔗糖 30gI 定容 1LJ 调整 PH 值 6.5-7 之间K 分装 20 瓶（每瓶 4045 ml）4.2 培养基的灭菌A 高压灭菌锅先加水至水位线，再放入培养基，顺时针拧紧盖子，直到不能拧动为止B 接通电源，按下工作键，当压力达到 0.10Mpa 时，使压力表保持0.100.15Mpa，灭菌 30minC 灭菌器蜂鸣报警时，立即断开电源，让压力自然下降。D 当达到 0.05Mpa 时放出蒸汽，至零时，打开锅取出物品E 放入冰箱保存备用二 外植体的初代培养1 实验目的:掌握外植体灭菌、无菌操作技术的方法。2 实验原理:植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离
4、体的植物器官或组织，甚至单个细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。3 实验用具及材料：超净工作台、培养基、无菌碟、无菌水、镊子、剪刀、70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、酒精灯4 外植体的选择与灭菌选取紫薇新稍嫩枝去叶片，剪成 34cm 的小段在自来水中冲洗于无菌条件下用 75%酒精灭菌 3060s用 0.1%升汞浸泡 810min用无菌水冲洗 5 次将材料剪成 2cm 带一个叶芽的茎段。5.无 菌 接 种 步 骤 ： 用 70%酒 精 擦 拭 工 作
5、台 和 双 手 将 初 步 洗 涤 及 切 割 的 材 料 放 入 烧 杯 ， 带 入 超 净 工 作 台 上 ， 用 70%酒精 灭 菌 8s， 再 用 0.1%升汞灭 菌 ， 再 用 无 菌 水 冲 洗 ， 最 后 放 在 滤 纸上 沥 去 水 分 。 材 料 吸 干 后 ， 一 手 拿 镊 子 、 一 手 拿 剪 刀 ， 对 材 料 进 行 适 当 的 切 剪 。将 茎 剪 成 含 有 一 个 节 的 小 段 。 在 接 种 过 程 中 要 经 常 灼 烧 接 种 器 械 ，防 止 交 叉 污 染 。 用 灼 烧 消 毒 过 的 器 械 将 切 割 好 的 外 植 体 插 植 到 培 养
6、 基 上 。 具 体 操 作过 程 是 ： 先 打 开 瓶 盖 ， 将 培 养 瓶 倾 斜 45 度 拿 着 ， 使 培 养 瓶 口 靠 近 酒精 灯 火 焰 ， 并 将 瓶 口 在 火 焰 上 方 转 动 ， 使 瓶 口 里 外 灼 烧 数 秒 钟 。 然后 用 镊 子 夹 取 一 块 切 好 的 外 植 体 送 入 培 养 瓶 内 ， 轻 轻 插 入 培 养 基 上 。茎 段 要 正 放 （ 尖 端 向 上 ） ， 接 种 完 后 ， 将 瓶 口 在 火 焰 上 再 灼 烧 数 秒钟 。 在 酒 精 灯 范 围 内 盖 上 盖 子 。 接 种 结 束 后 ， 将 接 种 好 的 培 养 瓶 转 到 培 养 室 培 养 ， 清 理 和 关 闭 超 净 工作 台 。 定 期 观 察 外 植 体 初 代 培 养 情 况 。
