1、考点一 微生物的实验室培养 考点清单 基础知识,一、培养基 1.概念:人们按照微生物对 营养物质 的不同需求,配制出供其生长 繁殖的营养基质。 2.营养成分 (1)确定原则:根据微生物的 需要 。 (2)主要营养物质:碳源、 氮源 、水和无机盐。 (3)其他条件:pH、 特殊营养 和氧气。,3.种类 (1)根据物理性质可分液体培养基和 固体 培养基,二者的区别是 是否添加 琼脂 等凝固剂。 (2)根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基,4.培养基的制备 步骤:计算称量 溶化 调pH灭菌 倒平板 。 【名师点拨】 (1)培养基用什么方法灭菌?培养基灭菌后需要立即进 行倒平板操作吗? 提示:培养基的
2、灭菌常用高压蒸汽灭菌。为防止烫伤,需要冷却到50 左右时才能进行倒平板操作。 (2)倒平板时为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 提示:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。 (3)平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 提示:可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。,二、无菌技术 1.目的:获得 纯净的培养物 。 2.关键:防止 外来杂菌 的入侵。 3.常用方法:灭菌和消毒,二者的区别是前者 可以杀死全部微生物, 包括芽孢和孢子 。,三、纯化大肠杆菌 1.原理:在培养基上将细菌稀释或分散成 单个 细胞,使其长成单 个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。 2.两种微生物纯化培养的方法,3.菌种的
3、保藏方法 (1)临时保藏法:对于 频繁 使用的菌种,先接种到试管的 固体 斜面 培养基上培养,然后放入 4 的冰箱中保藏。 (2)甘油管藏法:对于需要 长期保存 的菌种,先将菌液转入灭菌后 的 甘油 中,混匀后放在 -20 冷冻箱中保存。,【名师点拨】 (1)微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板 法吗?微生物接种的核心是什么? 提示:不是,微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法,其核 心是防止杂菌的污染,保证培养物的纯度。 (2)平板划线法中有哪几次烧接种环?其目的相同吗?,(3) 在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 提示:以免接种环温度太高,杀死菌种。 (4)
4、在做第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末 端开始划线?目的是什么? 提示:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划 线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终 能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。这样做的目的是将聚集的菌种逐 步分散以便获得单个菌落。,重难突破 1.微生物的培养基,2.倒平板的过程,3.稀释涂布平板的操作过程 (1)系列稀释:移液管需要经过灭菌。移液时,试管口和移液管应离火焰1 2 cm处。,(2)涂布平板,考点二 微生物的分离与计数 考点清单 基础知识,一、纤维素分解菌的分离 1.纤维素酶 (1)组成:纤维素分解菌可产生 纤维素酶 ,纤维素酶是一种复合酶, 一般认为它至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。 (2)作用:,2.纤维素分解菌的分离 (1)方法: 刚果红染色法 。 (2)原理,(3)标志:使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基,根据 是否产生透 明圈 来筛选纤维素分解菌。,(4)操作流程,二、土壤中分解尿素的细菌的计数,重难突破 1.统计菌落数目的两种方法 (1)显微镜直接计数法:,(2)间接计数法(活菌计数法):,2.微生物的筛选与鉴别方法 (1)微生物的筛选方法:,(2)微生物的鉴别方法:,
