1、1生物产品去除重金属功效评价技术规范国家标准编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会国家标准委关于下达2018年第二批国家标准制修订计划的通知，项目编号“20180935-T-424”。本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2020年完成。本标准由江南大学等单位共同组成。二、目的及意义目前较为成熟的重金属检测技术，比如原子荧光光谱法、原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法都已经有了较为成熟的技术经验，但是上述检测方法其检测时还需要对样品进行特殊化处理，以减少信号干扰。且检测耗时较长，需要大型的实验检测设备，成本昂贵，所以在检测中具有很强的局限性。例
2、如，电感耦合等离子体光谱法具有抗干扰、分析速度快、线性较宽的优势，可以实现多元素同时分析。此外对于定性、定量分析都有积极的作用，其缺点在于设备较为昂贵，就部分元素分析而言其优势也不是十分明显。原子吸收光谱法的优势在与具有检车具有极高的准确性，且相对干扰较少，易于消除具有很好的选择性。且缺陷在于，很多非金属元素不能同时进行检测，每检测一次元素都需要更换元素等。一种元素等不能同时完成多种元素测量，且仪器较贵，操作较复杂。如果2操作不当，就容易对结果形成干扰。原子荧光光谱法检测灵敏性较好，对相关重金属元素的检测具有十分重要的意义。但是在实际的检测中，原子荧光光谱法会受到多种因素影响，而影响最终检测效
3、果。比如荧光效果猝灭或者不稳定，就将导致检验结果不一致。目前应用于重金属检测的酶类主要有：葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、磷酸酯酶等等，当前的酶的种类十分有限，在未来的研究中还需要不断深入开发。此标准选择了三种生物酶制剂（脲酶、过氧化物酶、-淀粉酶）去除重金属功效的评价，建立一个生物产品去除重金属的检测方法。三、标准制定原则（一）标准编制原则标准的制定过程中采用文献调查法、专家座谈法、免疫学方法等多种研究方法，方法科学先进、过程周密严谨、数据真实可信、结果明确。本标准是为相关组织生物产品去除重金属功效评价提供技术支撑，考虑到生产、监管等不同需求，在方法选择上，主要基于现状、现有成熟的技术以及结果及验
4、证基础确定的，因此实用性较强。（二）标准制订主要依据1、标准编写遵循 GB1.1-2009标准化工作导则第 1 部分：标准的结构和编写规则的有关要求。2、标准编写内容参考了与重金属检测相关文献，标准参照了GB/T 6379.1-2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）3第 1 部分总则与定义和 GB/T 6379.2-2004测量方法与结果的准确度第 2 部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法。四、标准主要技术内容本标准主要包括以下 7 个部分：（1） 范围；（2） 规范性引用文件；（3） 术语和定义；（4） 原理；（5） 仪器设备及器具；（6） 材料与试剂；（7） 分析步骤；（
5、8） 结果分析等。（9） 附录1.范围本标准规定了利用生物产品（微生物、植物提取物等）去除重金属的功效评价的原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。2.规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验用水规格和试验方法3.术语与定义吸附率：是指生物产品制剂能吸附的重金属质量占重金属总量4的百分比。4.原理生物产品通过吸附方式富集重金属元素，从而达到去除的目的，这是一个复杂的过程，这一过程受吸附剂本身的特性、金属离子的种类及特性以及各
6、种吸附条件的影响。不同的过程影响因素也不同，主要影响因素包括生物产品剂量、温度、pH 、时间等。通过不同生物产品对重金属的吸附率指标进行计算，来评估生物产品在重金属去除的效用。5.仪器设备及器具5.1 恒温水浴锅：精度为 0.1 。5.2 微孔板酶标仪：带 450 nm 滤光片。5.3 离心机：相对离心力3380 g。5.4 漩涡混合器。5.5 电子分析天平：精确到 0.1 mg。5.6 烘箱：精度为 0.1 。5.7 压力蒸汽灭菌锅：额定温度 121 ，额定压力 0.14 MPa。5.8 50 mL 超滤离心管：截留分子量 3 KD。6.材料与试剂除特殊说明外，本标准所用其余试剂均为分析纯，
7、水均为符合 GB/T 6682 的规定。6.1 主要试剂吸附重金属离子酶制剂：-淀粉酶、脲酶、过氧化物酶；重金属离子元素标准物质：纯度98% ，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质；Cd、Pb、Hg 三种重金属离子的单克隆抗体和抗原：本实验室制备。56.2 主要缓冲溶液0.01mol/L pH 9.6 碳酸盐缓冲液（CBS）：称取 1.59g Na2CO3，2.93g NaHCO3 溶于纯水，调 pH 至 9.6，纯水定容到 500 mL。0.1mol/L pH 8.0 硼酸缓冲液（BB ）：称取 6.94g Na2B4O7，3.09g H3BO4 溶于纯水，调 pH 至 8.0，纯水定容
8、到500mL。0.01mol/L pH 7.4 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取 0.20 g KH2PO4，3.62g Na2HPO412H2O，0.20g KCl，和 8.00g NaCl 溶于纯水，调 pH 至 7.4，纯水定容到 1000 mL。0.1mol/L pH4.0 MES 缓冲液（MES）：称取 2-(N-吗啉代)乙磺酸 9.60g,溶于纯水，定容到 500mL。0.01mol/L pH 7.4 HBS 缓冲液：称取 1.19 g HEPES，0.10 g KCl，和 4.00 g NaCl 溶于纯水，调 pH 至 7.4，纯水定容到 500 mL。0.001 mol/L EDT
9、A 溶液：称取 26.00 mg EDTA，加上述 HBS 缓冲液定容到 100 mL。0.01 mmol/L ITCBE 溶液：称取 4.50 mg ITCBE，加上述 HBS缓冲液定容到 100 mL。pH 7.4 洗涤缓冲液（PBST）：含量为 0.05%（V/V ）Tween 20的磷酸盐缓冲液。抗体稀释液：含量为 0.05%（V/V）Tween 20 和 0.1%（W/V）明胶的磷酸盐缓冲液，4贮存。封闭液：含量为 0.2%（W/V）明胶的碳酸盐缓冲液，4贮存。显色液 A：称取 36.80 g NaH2PO412H2O，9.33 g 柠檬酸溶于900 mL 纯水，然后加入 0.18
10、mL H2O2，纯水定容到 1000 mL，4贮6存。显色液 B（TMB 溶液）：称取 600 mg TMB 加到 500mL 乙二醇 4超声至溶解，4贮存。终止液（2 mol/L H2SO4）：量取 122 mL 的浓 H2SO4 缓缓地加入到 888 mL 纯水（冰浴）中，同时轻轻搅拌，冷却至室温。7.分析步骤7.1 标准曲线建立利用棋盘法确定 OD 在 1.501.80 工作点的包被抗原和单克隆抗体使用浓度，并通过 ic-ELISA 测定该包被抗原和抗体使用浓度下的IC50 值。以零孔的吸光值（A max）和对应 IC50 值的比值(A max/ IC50)大小确定最佳包被抗原浓度和抗体
11、浓度。在此工作点浓度条件下，建立标准曲线，用 Origin 软件作图，以标准品浓度的对数值为横坐标，以 OD450nm 为纵坐标，绘制标准曲线。7.2 实验条件及方法的确定7.2.1 酶制剂质量分数评价选取的酶制剂质量分数分别为 0.1%、0.2%、0.4%、0.8% ，即分别称取 5mg、10mg、20mg、40mg，作用时间为 12h，常温条件下，用 5mL pH7.4 HBS 缓冲液溶解，加入重金属离子的量为 10 g，即浓度为 2g/mL。酶制剂吸附作用后，7500g 超滤 30 min，取滤出液，记录体积为 V。滤出液中加入 100 L EDTA 溶液若吸附重金属 Pb，滤出液中加入
12、 100 L ITCBE，螯合 2h 后，滤出液用 HBS 缓冲液稀释 50 倍进行 ELISA 方法检测。7.2.2 作用温度评价在一定的作用 pH（pH=7.4）以及作用时间（12h）下，酶制剂质量分数根据 7.2.1 结果选定（该质量分数下，对重金属离子吸附效果最佳），选取酶制剂作用的温度分别为 20、37、50、65、780，按照 7.2.1 中方法对重金属离子进行吸附作用评价。7.2.3 作用时间评价在一定的作用 pH（pH=7.4）以及作用温度（常温）下，酶制剂质量分数根据 7.2.1 结果选定（该质量分数下，对重金属离子吸附效果最佳），选取酶制剂作用的时间分别为3h、6h、12h
13、、24h、48h，按照 7.2.1 中方法对重金属离子进行吸附作用评价。7.2.4 作用 pH 评价在一定的作用时间（12h）以及作用温度（常温）下，酶制剂质量分数根据 7.2.1 结果选定（该质量分数下，对重金属离子吸附效果最佳），选取不同 pH 缓冲液溶解酶制剂， pH 分别为4.0、6.0、7.4、8.0、9.6，按照 7.2.1 中方法对重金属离子进行吸附作用评价。7.2.5 吸附率计算方法按照式（1）计算：.(1)=()(0) 100式中：r吸附率；C空白样品重金属离子吸附量，ng；Ce供试样品重金属离子吸附量， ng；C0失活样品重金属离子吸附量，ng。（其中，重金属离子吸附量 C
14、 计算方法为：重金属离子初始量即10000 ng 与待测样品液中重金属含量之差。待测样品液中重金属含量计算方法为：待测样品液吸光值代入标准曲线计算值再乘以对应稀释倍数 50 及滤出液体积。）8.结果分析88.1 对 Hg 吸附效果的评价（1）间接竞争抑制曲线通过 Origin 软件建立标准曲线，以 Hg 标准品浓度的对数值为横坐标，以 450 nm 处的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，如图 1，得到公式 y=0.03253+(（1.50196-0.03253 ）)/( （1+（x5.55566 ）1.28279）) ，回归系数 R2=0.99418。（2）酶制剂质量分数评价按照 7.2.1 中方
15、法，选取不同质量分数酶制剂，对重金属离子图 1 Hg 间接竞争抑制曲线表 1 不同质量分数酶制剂对重金属离子 Hg 吸附作用酶的种类 酶的质量分数（ %）滤出液体积V（mL）滤出液中重金属离子 Hg 含量 m（ng）吸附量Ce（ng）吸附率 r（ %）0.1 4.1 669.3 9330.7 93.3%0.2 4.0 590.3 9409.7 94.1%0.4 3.9 693.3 9306.7 93.1%脲酶0.8 4.0 583.7 9416.3 94.2%0.1 4.0 805.0 9195.0 92.0%0.2 3.8 701.5 9298.5 93.0%0.4 4.0 794.4 92
16、05.6 92.1%过氧化物酶0.8 4.2 697.1 9302.9 93.0%0.1 3.8 5541.8 4458.2 44.6%0.2 3.8 624.0 9376.0 93.8%0.4 4.0 1508.5 8491.5 84.9%-淀粉酶0.8 3.9 554.2 9445.8 94.5%9Hg 进行吸附作用评价，数据如表 1、图 2 所示。观察表 1 和图 2 数据，从对重金属离子 Hg 吸附效果和酶制剂用量的角度出发，选择脲酶，质量分数 0.2%进行下一步实验。（3）脲酶对重金属离子 Hg 作用时间评价在一定质量分数 0.2%、作用 pH=7.4 以及作用温度（常温）下，设置作
17、用的时间分别为 3h、6h、12h、24h、48h，按照 7.2.3 中方法对重金属离子 Hg 进行吸附作用评价，数据如表 2、图 3 所示。图 2 不同质量分数酶制剂对 Hg 吸附曲线表 2 脲酶作用时间评价脲酶作用时间（h）滤出液体积 V（mL ）滤出液中重金属离子 Hg 含量 m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（ %）3 3.0 708.4 9291.6 92.9%6 2.8 596.6 9403.4 94.0%12 3.2 469.3 9530.7 95.3%24 3.4 549.1 9450.9 94.5%48 2.6 380.8 9619.2 96.2%10根据图 3，可以明
18、显看出酶制剂溶液与重金属作用 12h 时，吸附效果较好，虽然作用 48h 吸附率高，但时间较长，因此选择作用时间为 12h。（4）脲酶对重金属离子 Hg 作用温度评价在一定质量分数 0.2%、作用 pH=7.4 以及作用时间（12h）下，设置作用的温度分别为 20、37、50 、 65、80 ，按照 7.2.2中方法对重金属离子 Hg 进行吸附作用评价，数据如表 3、图 4 所示。图 3 不同作用时间下脲酶对 Hg 吸附曲线表 3 脲酶作用温度评价脲酶作用温度（）滤出液体积 V（mL）滤出液中重金属离子 Hg 含量 m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（ %）20 2.8 829.4 91
19、70.6 91.7%37 2.6 783.4 9216.6 92.2%50 3.2 1221.5 8778.5 87.8%65 3.4 1062.2 8937.8 89.4%80 2.0 832.2 9167.8 91.7%11根据图 4，可以明显看出酶制剂溶液与重金属作用温度为 2037时，吸附效果较好。（5）脲酶对重金属离子 Hg 作用 pH 评价在固定的质量分数 0.2%、作用温度（37）以及作用时间（12h）下，用不同 pH 的缓冲溶液溶解酶制剂，按照 7.2.4 中方法对重金属离子 Hg 进行吸附作用评价，数据如表 4、图 5 所示。图 4 不同作用温度下脲酶对 Hg 吸附曲线表 4
20、 脲酶作用 pH 评价脲酶溶液 pH 滤出液体积 V（mL ）滤出液中重金属离子 Hg 含量 m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（ %）4.0 3.7 1518.7 8481.3 84.8%6.0 3.0 744.9 9255.1 92.6%7.4 3.2 882.8 9117.2 91.2%8.0 3.1 935.0 9065.0 90.7%9.6 3.3 993.2 9006.8 90.1%12由图 5 明细观察到，当脲酶溶液 pH 为 6.0 时，吸附效果最佳，随着 pH 值增大，吸附效果逐渐变差。综合上述数据分析可得，当脲酶质量分数为 0.2%时，作用时间12h，作用温度 203
21、7，作用 pH 为 6.0 时，对重金属离子 Hg 的吸附效果较好。8.2 对 Pb 吸附效果的评价（1）间接竞争抑制曲线通过 Origin 软件建立标准曲线，以 Pb 标准品浓度的对数值为横坐标，以 450 nm 处的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，如图 1，得到公式 y=0.22898+(（1.80322-0.22898 ）)/( （1+（x2.16825 ）1.28279）) ，回归系数 R2=0.99453。图 5 不同溶液 pH 下脲酶对 Hg 吸附曲线13（2）酶制剂质量分数评价按照 7.2.1 中方法，选取不同质量分数酶制剂，对重金属离子Pb 进行吸附作用评价，数据如表 5、图 7
22、 所示。图 6 Pb 间接竞争抑制曲线表 5 不同质量分数酶制剂对重金属离子 Pb 吸附作用酶的种类 酶的质量分数（ %）滤出液体积V（mL）滤出液中重金属离子 Pb 含量 m（ng）吸附量Ce（ng）吸附率 r（ %）0.1 3.6 717.8 9282.2 81.2%0.2 3.2 385.0 9615.0 93.3%0.4 3.1 522.6 9477.4 88.9%脲酶0.8 3.3 632.3 9367.7 84.5%0.1 2.9 720.1 9279.9 61.2%0.2 3.1 603.3 9396.7 84.8%0.4 3.5 517.0 9483.0 90.1%过氧化物酶0
23、.8 3.2 206.3 9793.7 96.9%0.1 3.7 931.8 9068.2 43.9%0.2 4.0 654.3 9345.7 86.5%0.4 3.5 409.8 9590.2 92.9%-淀粉酶0.8 2.9 230.9 9769.1 96.4%14观察表 5 和图 7 数据，从对重金属离子 Hg 吸附效果和酶制剂用量的角度出发，选择脲酶，质量分数 0.2%进行下一步实验。（3）脲酶对重金属离子 Pb 作用时间评价具体操作方法同 8.1 中的（3），数据如表 6、图 8 所示。图 7 不同质量分数酶制剂对 Pb 吸附曲线表 6 脲酶作用时间评价脲酶作用时间（h）滤出液体积
24、V（mL ）滤出液中重金属离子 Pb 含量 m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（ %）3 3.4 535.2 9464.8 94.6%6 3.0 265.8 9734.2 97.3%12 2.9 365.3 9634.7 96.3%24 3.4 701.6 9298.4 93.0%48 3.0 706.2 9293.8 92.9%15根据图 8 可以看出，当脲酶与重金属离子作用时间在 6h12h 时，吸附效果较好，随着时间继续延长，吸附率明显下降。（4）脲酶对重金属离子 Pb 作用温度评价具体操作方法同 8.1 中的（4），数据如表 7、图 9 所示。图 8 不同作用时间下脲酶对 Pb
25、吸附曲线表 7 脲酶作用温度评价脲酶作用温度（）滤出液体积 V（mL ）滤出液中重金属离子 Pb 含量 m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（ %）20 3.0 436.6 9563.4 95.6%37 2.9 535.1 9464.9 94.6%50 3.2 402.2 9597.8 96.0%65 3.7 197.9 9802.1 98.0%80 2.5 659.1 9340.9 93.4%16由图 9 明显看出，在 65时，脲酶吸附效果最佳，随着温度继续升高，吸附率急剧下降。（5）脲酶对重金属离子 Pb 作用 pH 评价具体操作方法同 8.1 中的（3），数据如表 8、图 10 所示
26、。图 9 不同作用温度下脲酶对 Pb 吸附曲线表 8 脲酶作用 pH 评价脲酶溶液 pH 滤出液体积V（mL）滤出液中重金属离子 Pb含量m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（%）4.0 3.4 843.1 9156.9 91.6%6.0 3.6 691.5 9308.5 93.1%7.4 3.3 415.2 9584.8 95.8%8.0 2.8 444.6 9555.4 95.6%9.6 3.7 149.6 9850.4 98.5%17根据图 10 分析可知，当脲酶溶液 pH9.6 时，吸附效果最好。综合上述数据分析可得，当脲酶质量分数为 0.2%时，作用时间612h，作用温度 65，
27、作用 pH 为 9.6 时，对重金属离子 Pb 的吸附效果较好。8.3 对 Cd 吸附效果的评价（1）间接竞争抑制曲线通过 Origin 软件建立标准曲线，以 Cd 标准品浓度的对数值为横坐标，以 450 nm 处的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，如图11，得到公式 y=0.11631+(（2.00154-0.11631 ）)/( （1+（x5.37751 ）0.67925）) ，回归系数 R2=0.99595。图 10 不同溶液 pH 下脲酶对 Pb 吸附曲线18（2）酶制剂质量分数评价按照 7.2.1 中方法，选取不同质量分数酶制剂，对重金属离子Cd 进行吸附作用评价，数据如表 9、图 12
28、 所示。图 11 Cd 间接竞争抑制曲线表 9 不同质量分数酶制剂对重金属离子 Cd 吸附作用酶的种类 酶的质量分数（ %）滤出液体积V（mL）滤出液中重金属离子 Cd 含量 m（ng）吸附量Ce（ng）吸附率 r（ %）0.1 3.8 7935.9 2064.1 20.6%0.2 4.2 9669.1 330.9 3.3%0.4 3.6 6211.5 3788.5 37.9%脲酶0.8 3.4 8528.0 1472.0 14.7%0.1 4.3 5413.3 4586.7 45.9%0.2 4.0 6367.5 3632.5 36.3%0.4 3.3 5028.4 4971.6 49.7%
29、过氧化物酶0.8 3.3 4492.4 5507.6 55.1%0.1 3.8 2729.7 7270.3 72.7%0.2 3.8 1719.4 8280.6 82.8%0.4 3.3 545.1 9454.9 94.5%-淀粉酶0.8 3.3 241.8 9758.2 97.6%19根据图 12 并结合表 9 中数据分析，-淀粉酶的吸附效果最好，当其质量分数为 0.4%时，吸附效果较好；当质量分数 0.8%时，吸附率较 0.4%时变化不明显，因此，选择 -淀粉酶、质量分数 0.4%进行下一步实验。（3）-淀粉酶对重金属离子 Cd 作用时间评价-淀粉酶质量分数 0.4%，具体操作方法同 8.
30、1 中的（3），数据如表 10、图 13 所示。图 12 不同质量分数酶制剂对重金属离子 Cd 吸附作用表 10 脲酶作用时间评价-淀粉酶作用时间（h）滤出液体积V（mL ）滤出液中重金属离子 Cd 含量m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（%）3 3.5 9112.9 887.1 8.9%6 3.8 3782.0 6218.0 62.2%12 3.3 1478.8 8521.2 85.2%24 3.2 1943.6 8056.4 80.6%48 3.4 1313.4 8686.6 86.9%20根据图 13 可以看出，当 -淀粉酶与重金属离子作用时间在12h24h 时，吸附效果较好，随着
31、时间继续延长，吸附率无明显变化。（4）-淀粉酶对重金属离子 Pb 作用温度评价-淀粉酶质量分数 0.4%，具体操作方法同 8.1 中的（4），数据如表 11、图 14 所示。图 13 不同作用时间下 -淀粉酶对 Cd 吸附曲线表 11 -淀粉酶作用温度评价-淀粉酶作用温度（）滤出液体积V（mL ）滤出液中重金属离子 Cd含量m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（% ）20 4.0 1021.2 8978.8 89.8%37 4.0 777.2 9222.8 92.2%50 3.8 495.6 9504.4 95.0%65 4.0 262.8 9737.2 97.4%80 3.5 681.1
32、 9318.9 93.2%21由图 14 明显看出，在 65时，-淀粉酶吸附效果最佳，随着温度继续升高，吸附率急剧下降。（5）-淀粉酶对重金属离子 Cd 作用 pH 评价-淀粉酶质量分数 0.4%，具体操作方法同 8.1 中的（3），数据如 12、图 15 所示。图 14 不同作用温度下 -淀粉酶对 Cd 吸附曲线表 12 -淀粉酶作用 pH 评价-淀粉酶溶液pH滤出液体积 V（mL）滤出液中重金属离子 Cd 含量m（ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（% ）4.0 3.4 50.23571 3516.5 64.8%6.0 3.6 23.18086 1622.7 83.8%7.4 3.3 3
33、6.37216 2546.1 74.5%8.0 2.8 32.00427 2240.3 77.6%9.6 3.7 45.53865 3187.7 68.1%22根据图 15 分析可知，当 -淀粉酶溶液 pH6.0 时，吸附效果最好。综合上述数据分析可得，当 -淀粉酶质量分数为 0.4%时，作用时间 12h24h，作用温度 65，作用 pH 为 9.6 时，对重金属离子Cd 的吸附效果较好。8.4 金属硫蛋白对三种重金属离子的吸附实验金属硫蛋白是一种富含半胱氨酸的短肽，对多种重金属有高度亲和性。金属硫蛋白的结构及金属硫蛋白中的半胱氨酸含量对其结合某些金属离子有重要的影响。近年来，金属硫蛋白凭借其
34、结合重金属离子特性，且此过程具有吸附效率高、成本低、重金属离子可回收等优点，而被广泛应用于重金属吸附领域的研究，并显现出良好的应用前景。图 15 不同作用 pH 下 -淀粉酶对 Cd 吸附曲线23金属硫蛋白质量分数 0.2%，用 5mL HBS 缓冲溶液（pH=7.4 ）溶解，作用温度为室温条件下，作用时间 12h，按照 7.2 中方法对三种重金属离子进行吸附作用评价，数据如表 13 所示。五、主要工作过程（一）组成标准起草小组根据国家制修订有关程序和要求，2017 年 6 月，组成了标准起草工作组，明确了任务要求，安排了工作进度，会议研究讨论了生物产品去除重金属功效评价技术规范初稿，对起草小
35、组在标准起草过程中的一些思考及难点问题进行了深刻讨论，此外各单位代表就标准内容及方法选择也进行了讨论。（二）开展相关调研情况生物产品去除重金属功效评价技术规范标准属于生物产业领域的标准，是支撑生产方、第三方组织开展相关产品评价的技术依据。起草工作小组首先针对生产和检测开展了大量的调研工作。从满足实际检测需要出发，开展了国内外相关资料的收集和确认工作，资料的检索和信息的收集过程中，分析比较了大量的国内外文献方法，在符合标准化工作规划和标准化计划要求的基础上，初步形成了检测方法的制定思路。表 16 金属硫蛋白对三种重金属离子吸附作用评价重金属离子种类滤出液体积 V（mL）滤出液中重金属离子含量m（
36、ng）吸附量 Ce（ng）吸附率 r（%）Hg 4.1 241.1 9785.9 97.9%Pb 3.9 74.5 9925.5 99.3%Cd 4.2 212.4 9787.6 97.9%24（三）标准起草完善过程在广泛调查研究的基础上，标准起草单位组织相关技术人员对生物产品去除重金属功效评价技术规范标准项目进行了预研，课题组成员广泛收集了生物产品去除重金属相关的标准、文献，了解了国内外相关技术动态，并且明确了工作思路和进程安排，分析了通过前期的实验摸索、反复论证，确定了本标准方法设定的重要参数，其中包括温度、pH、时间等指标参数，开展了实际样品的检测。然后依据 GB/T 1.12000标准
37、化工作导则第 1 部分：标准的结构和编写规则、GB/T 1.22002标准化工作导则第 2 部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法等标准编制要求，对生物产品去除重金属功效评价技术规范标准开展了起草工作。于 2016 年 3月中旬，起草工作小组完成了生物产品去除重金属功效评价技术规范国家标准（草案）。六、 方法验证及结果七、与有关的现行法律、法规和强制性国家标准的关系采用本方法对三种重金属离子（Hg、Pb、Cd）进行酶制剂吸附酶联免疫方法检测，其结果显示，在一定条件下，脲酶对重金属离子 Hg、Pb 吸附作用较好，- 淀粉酶对重金属离子 Cd 吸附作用较好。八、标准属性的建议本标准属于管理服务标准，建议作为推荐性标准批准发布。九、贯彻国家标准的要求和措施建议
