1、1ICS 07.080A 21中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T XXXXX201X 生物产品降解杂环类农药功效评价技术规范Technical specification for efficacy evaluation of heterocyclic pesticides degradation by biological products（征求意见稿）201X-XX-XX 发布 201X-XX-XX 实施中 华 人 民 共 和 国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会发 布GB/T201 前 言本标准按照 GB/T 1.
2、12009 给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位： 本标准主要起草人：GB/T2011生物产品降解杂环类农药功效评价技术规范1 范围本标准规定了生物产品降解杂环类农药的功效评价原理、试剂与材料、仪器设备与器具、分析步骤和结果分析。本标准适用于微生物和酶生物产品降解类杂环类农药的效果评价。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 15818 培养基配置方法SN/T 1591 进
3、出口茶叶中 9 种有机杂环类农药残留的检验方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本文本。3.1 生物产品 biologic products利用生物技术获得的微生物和酶产品。3.2杂环类农药 heterocyclic pesticides分子中含有杂环结构的有机化合物农药。3.3 降解功效 degradation efficacy生物产品降解能力。4 原理生物产品对氨基甲酸酯类农药降解处理后，经液液萃取，净化，浓缩，定容后，采用气相色谱-质GB/T2012谱联用技术检测，外标法定量。计算生物制品对杂环类农药的降解效率。5 仪器和设备5.1 恒温振荡器：转速 0-300 r/min；温控范围，室
4、温-100。5.2 分光光度计：波长 330nm-800 nm，吸光度精确至 0.001。5.3 pH 计：精度 0.01。5.4 高速冷冻离心机：最小离心力为 8000 g，具有 1.5 mL 离心管。5.5 分析天平：精度 0.001 g、0.01 g、0.1 g。5.6 恒温水浴锅：精度为0.1 。5.7 比色皿：1 cm。5.8 气相色谱仪：配质谱检测器。5.9 色谱柱：30 m0.25 mm 毛细管柱，壁涂 5%苯基聚硅氧烷，膜厚 0.25m。5.10 旋转蒸发仪。5.11 活性炭固相萃取小柱：250 mg 或相当者。5.12 中性氧化铝固相萃取小柱：250 mg 或相当者。5.13
5、 固相萃取装置，带真空泵。5.14 微量注射器：10L。6 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 中规定的一级水。6.1 杂环类农药杂环类农药标准品，纯度99。6.2 基础培养基按照 GB/T 15818 中方法配制。或选用商品化的预制干燥培养基，严格按照商品说明书加水配制。6.3 0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液，pH 8.0GB/T2013分别配制 0.2 mol/L 的 Na2HPO4和 0.2 mol/L 的 NaH2PO4，量取 Na2HPO4 61 mL, NaH2PO4 39 mL, 用 3 mol/L 的稀盐酸和 1 mol/L 的氢氧化钠
6、调节溶液 pH 备用。7 分析步骤7.1 试验设计不同类型生物产品降解杂环类农药功效试验设计应符合表1要求。表1. 生物产品降解杂环类农药功效试验设计产品种类项目微生物产品 酶产品处理设计1.供测样品2.失活样品3.空白对照杂环类农药选择 莠去津、氯苯嘧啶醇、腐霉利、吡虫啉、多菌灵、百草枯农药处理 将杂环类农药标准物质用丙酮配制成1.00 mg/mL的储备溶液，4冷藏保存备用重复次数 不少于3次降解反应条件 按正交试验结果确定7.2 微生物产品试验实施7.2.1 培养基制备 选择基础培养基，或根据微生物特殊生长需要对培养基进行改良。7.2.2 供试样品处理块状固体产品应进行研磨处理。7.2.3
7、 失活样品处理取供试的固体或液体微生物样品进行 121C，30 min 杀菌处理。7.2.4 最佳反应体系确定设计正交试验，影响因素宜选取微生物制品添加量、反应温度、反应转速、反应时间、底物浓度等，确定最佳反应体系条件。7.2.5 降解试验取 250 mL 三角瓶 9 个，空白样 3 个，供试样品瓶 3 个，失活样品瓶 3 个。按照最佳反应体系确定的底物浓度，制备底物溶液，灭菌后备用。然后根据微生物添加量，制备成反应体系为 100 mL 的培养液，在最佳反应体系条件下进行降解反应。GB/T20147.3 酶产品试验实施7.3.1 供试样品处理固体酶产品应进行研磨处理，称取一定质量的供试固体酶粉
8、，采用不同pH的磷酸盐缓冲液按要求稀释为不同浓度（g/mL）备用；若供试样品为液体，用不同pH的磷酸盐缓冲液按要求稀释为不同浓度（mL/mL）备用。7.3.2 失活样品处理取供试的固体或液体酶样品在 100 C 下进行 30 min 的酶失活处理。7.3.3 最佳反应条件确定设计正交实验，影响因素宜选择酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间、缓冲液体系及其 pH 值等，确定最佳反应体系条件。7.3.4 降解试验取 25 mL 离心管 9 个，空白样 3 个，供试样品瓶 3 个，失活样品瓶 3 个。按照最佳反应体系确定的酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间、pH 值，制备成反应体系为 10 mL
9、的反应液，在最佳反应体系条件下进行降解反应。8 结果分析8.1 样品前处理按照 SN/T 1591-2005 要求进行处理。8.2 测定按照 SN/T 1591-2005 要求进行测定8.3 结果计算降解率按照式（1）计算：(1)=()()() 100%式中：R降解率（%） ；Xi底物原始浓度（mg/L） ；Xa为供试样品降解反应终点底物浓度（mg/L） ；Xb为失活样品降解反应终点底物浓度（mg/L） ；Xc为空白样品降解反应终点底物浓度（mg/L） 。GB/T2015以平行样的平均值为最终的降解率值，计算结果保留到小数点后两位。8.4 结果判定以降解率的大小评价被测试生物产品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%时，降解效果为好；降解率大于等于60%，小于80%时，降解效果为良好；降解率大于等于40%，小于60%时，降解效果为较好；降解率大于等于20%，小于40%时，降解效果为一般；降解率小于20%时，降解效果为差。8.5 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过相对标准偏差的 10%。_
