1、2100检测简介 赖琼英 一、 2100检测在整个环节中的作用 二、 2100检测仪器 三、 2100检测的工作原理 四、 Cliper检测步骤 五、 Caliper检测过程中的注意事项 六、 产前文库的峰图判断 2100检测简介 2100检测的作用 产前实验流程 抽血 -血浆分离 -DNA提取 -建库 -QC(QPCR&2100)-上机 -数据分析 -报告发放 2100检测是对文库进行定性以及定量新一代测序质控 .定性则是判断文库构建是否成功，而定量是有别于 QPCR并作为 QPCR的参照为上机提供参考。 2100检测所用仪器 Agilent 2100 Bioanalyzer 2100检测所
2、用仪器 Caliper LabChip GX Agilent 2100 Bioanalyzer、 Caliper GX对比 仪器名称 Agilent 2100 Bioanalyzer Caliper LabChip GX 片段检测范围 251000bp 251000bp 检测所需时间 12个样品 40分钟 96个样品 2小时 16分钟 检测成本 12RMB(8RMB)/个样品 3-4RMB/个样品 定性范围（以ladder 作为样品） 0.150 ng/L 0.150 ng/L 检测所需样品体积 1 L 理论： 1.5L 实际： 2L 只针对 Kit1000 2100检测原理 一句话概括 -可
3、定量的电泳仪 Agilent 2100 Bioanalyzer、 Caliper LabChip GX都是基于芯片实验室技术的核酸分析系统，通过微流体技术对样品进行分离。当给芯片加入电压时，样品便在芯片上的显微蚀刻管道中进行毛细管电泳，在样品流动过程中，不同 DNA 片段根据其大小被分离。凝胶 -染料基质中的荧光染料可嵌入 DNA双链，通过激光激发荧光，使其被仪器检测到，仪器依据收集到的荧光信号强度对样品定量。 定性及定量原理 Agilent 2100 Bioanalyzer每次独立的检测都是 ladder最先出来的，而 caliper也是每 12样品之前会首先跑 ladder， ladder
4、会根据自身的各个条带（已知 size）及其相对应的迁移时间，形成一个迁移时间和 size的函数关系，样品孔中的特定的 DNA片段就能根据迁移时间算出 size来。 ladder孔和样品孔中的 marker起到对齐和定范围的校准作用。 定性及定量原理 DNA 定量 则 是一个多步骤的过程。第一步，将特定 DNA片断的面积与各个样品中均存在的 marker（已知浓度）的面积进行比较。第二步，使用经验校正因子来校正已知谱带的面积。第三步，由校正面积计算得出未知谱带的浓度。 相对于传统电泳优势 1. 高质量的结果 ：提供高度准确的芯片电泳数字化数据。 2. 快速得出结果 ：比传统的凝胶电泳的速度快高达
5、数十倍 。 3. 重现性高的结果 ：自动进行样品分离与分析，提供标准化的、重现性高的结果 。 4. 先进、易用的软件： 操作简便， 便于数据处理、分析与存档 。 5.耗样量少： 正常检测只需要 1-1.5ul样品。 6.安全： 最大限度地减少与有害物质的接触 。 Caliper GX检测步骤 （ 1）室温平衡试剂盒； （ 2）清洗芯片、准备芯片； （ 3）配胶（此步骤根据需要执行）； （ 4）按特定的顺序稀释样品（ 2+18）； （ 5）混匀样品并转板； （ 6）上机检测； （ 7）清洗芯片； （ 8）数据分析。 Caliper检测过程注意事项 选择合适的试剂盒 过期芯片不能使用 检测胶中含有
6、 DMSO（二甲基亚砜）， 避免与皮肤和眼睛接触；配好的胶要用锡箔纸包好，避光保存。 加样转板后确保芯片及 96孔板中无气泡才能上机检测，若有气泡，用干净枪头将气泡戳破。 Caliper检测过程注意事项 上机检测时要确定使用试剂盒和上机程序一致。 检测过程中，应远离振动大的仪器及设备（离心机等）。 检测完成以后，应及时将芯片取出清洗，不允许不处理而过夜。 Caliper GX软件界面 1000 ladder 峰图 产前合格文库峰图 产前不合格文库峰图 产前拖尾文库峰图 常见问题 1、 2100分析仪为什么不能检测单链 DNA？ 因为在 2100的检测中，凝胶 -染料基质中的荧光染料可嵌入 DNA双链，通过激光激发荧光，使其被仪器检测到。在单链 DNA中不存在双螺旋结构，荧光染料无法镶嵌在基因中。 2、为什么不允许检测芯片在分析仪中长时间放置？ 因为芯片中加有胶 -荧光染料 mix，如果长时间不用时，胶 -荧光染料 mix会凝固，会黏在电极上，造成电极清洗困难，对样品检测造成污染。
