铺薄层板的经验总结.doc

1、铺薄层板的经验总结1.CMC-Na 配置也比较重要,不能太稀了 ,不然硅胶的黏附性不好,铺好的硅胶容易脱落.太稠了也不行,不容易和硅胶混匀2.CMC-Na 与硅胶混合时注意比例 ,一般为 30 克硅胶加入 100 克 0.3-0.5%的 CMC-Na 水溶液.如果铺多了的话可以凭经验就能感觉到适合的程度.混合时最好朝一个方向研,这样也不容易有气泡3.铺板的均匀.这也是关系到板好坏的重要方面.为了使薄层板硅胶均匀,铺好后将玻璃板放在桌边小心上下颠动,保证薄层板所以地方都一样均匀.4.铺板的厚度,个人所好有所不同.有的铺得较厚,这种情况 CMC-Na 不能太稀,不然硅胶哗哗的掉.厚的板展开的时候慢

2、些,但是点样量可以多一些不容易扩散.薄的板展开比较快,容易扩散点样量宜少5.薄层板的活化.活化一定要铺好板干了以后放到烘箱活化.干了是指看不到有水痕在上面.一般可以选择晚上铺板,早上的时候正好薄层板已干,可放进烘箱活化.为什么要完全干了才能活化，如果未完全干会导致活化的时候薄层板硅胶开裂.一、手工铺板是非常考验你的耐力的事情，最好是找实验室的 GGJJMMDD 们一起，一来速度快，二来大家仪器交流心得。1CMC-Na 溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的 CMC-Na 可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用。2就是硅胶和 CMC-Na

3、溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。可以一个人研磨，一个人缓慢的倒 CMC-Na 溶液。研磨时最能考验你的定力，我觉得你该找女生来磨，但是那种太文弱的不行。研磨时要顺着一个方向，速度不宜快，要顺着研钵的边缘，观察仔细，一定要把气泡赶尽杀绝。研磨好的因改是均匀的，没有气泡，没有固体的粉末类异物，溶液有一定的粘性。3铺板，我觉得是各人各喜欢，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，倒时也要注意不能引入小气泡。可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上（顺便说一句，玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4 个角要“健全” ） ，如有需要，可以双手 10 个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使

4、得硅胶分摊匀称。尤其是 4 个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。铺好的板，要找个干净的地方放置晾干，这个过程也是耐心的等着它，请勿打扰！自然晾干后，活化一下（105 摄氏度 40 分钟左右） ，置于密封的干燥器保存。最后想说一下，如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心。如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高！自己多看看人家怎么铺的，练练手，肯定就成高手了！ 二、楼上的讲得很好，我再补充两点切身体会：（1）CMC-Na 溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几

5、天以后就会变绿，起霉。（2）如果有抽滤装置你可以直接把 CMC-Na 溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子） ，还有两个好处一是节省 CMC-Na 溶液，二是倒滤过的 CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了！） 三、本人的工作经验：薄层层析制板1. 配制 4%5%的羧甲基纤维素（CMC ）：称取 CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。2. 40%硅胶：按 CMC 溶液的量、按 40%的比例称取薄板层析硅胶，倒入大研钵中，与CMC 溶液混合，充分研磨成均匀糊状。3. 加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。4. 将载玻片置于平台上，用药匙

6、舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。5. 自然干燥后，放入烘干箱烘 12 小时以上。再在 105110活化，活化时间为 0.51 小时，冷却后即可使用。 四我也来谈一下自己的一点经验吧。CMC-Na ：硅胶为 2.5：1 较好，楼上师兄说的 3：1应该也可以，但是硅胶配的过稀时后果很严重，板子在晾干时会出现许多裂缝，象万寿菊样的开花状，完全不能用。此乃本人的惨痛经历，当时不知道是硅胶过稀的原因，还以为冬天太冷板子给冻裂了，又作了一批放在暖气房，还是照裂不务。浪费了整整一瓶 GF254啊（做的是制备板用量较大） 。有个问题至今不明白，请教各位大虾，晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以

7、避免板子炸裂。 楼上的兄弟，我也有过同样的遭遇。当时板子铺得太厚，后来加长研磨的时间就好了。 首先我想说的是手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量。手工铺板的要点我认为有如下几点：1.手工铺制的板子常用的有：硅胶 G 板和硅胶 CMC 板。前者是煅石膏（石膏经 140烘烤34 小时）与硅胶按 11.3：10 混合均匀。每份硅胶 G 加水 23 份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。2.载板要求平滑清洁。在使用前一定要处理干净，用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干；3.CMC-Na 要用蒸馏水为溶剂，加热溶解后，放冷，最好滤过使用；消泡剂可直接与 CMC-Na 溶液混

8、合使用；4. 我在做时，先在研钵中加 CMC 溶液，再加硅胶，按同一方向研磨，这样更容易调匀不易包埋硅胶颗粒；稠度以用研棒粘取，成连珠状不成线状下滴为好；配制时遵循现配现用、少量多次的原则，因其易干影响铺制效果。 薄层色谱法实践技巧 目的： 1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度； 3. 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫描法，薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、

9、异板精密度、回收率； 4. 手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量； 5. 化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度； 6. 中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度； 7. 手工铺制的板子常用的有：硅胶 G 板和硅胶 CMC-Na 板。前者是煅石膏（石膏经 140烘烤 34 小时）与硅胶按 11.3：10 混合均匀。每份硅胶 G 加水 23 份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。 8. 如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心；如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么

10、高； 9. 单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器（也是完全手动的那种） ，铺出的板子基本上可以保证均一的。 10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板；铺水板是最考技术的，主要是碾磨技术，大家可以探讨一下； 11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了 CMC-Na 的板都易烘糊，尤其是温度高于100 度时，后改用不加 CMC 辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论 CMC 易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶 G 与水的比例要达 1：3.5 左右，而且研磨后要尽快涂布，不能易于凝固而难于涂布。 展开： 12. 药典：展开容器 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密

11、的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 13. 药典：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点 5mm为宜（切勿将样点侵入展开剂中） ，密封顶盖，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为815 cm，溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，按正文项下的规定检测。 14. 展开剂的选择（分离单体）： （1）粗分，也就是当你的样品极性范围比较大的时候，可以直接采用极性较小的流动相。然后将前沿、原点以及前沿及原点间的硅胶分别刮下，提取。这样，样品就被分为几个部分，而各个部分的极性相差

12、也比较小了。然后再将这几部分分别进行下面的细分 TLC。 （2）细分。经过粗分之后，我们一般对各个部分的极性都能够做到心中有数了。比如，被冲到前沿的样品，要采用更小极性强度的流动相，而死吸附部分，则需要较大强度的流动相。 我们在初步确定了流动相的极性强度之后，可以自己设计几个溶剂系统。在选择流动相的组成的时候，可以参考 snyder 的溶剂分类，从质子受体，质子给体和偶极作用的溶剂中各选择一种，然后再选择一个强度调节剂。当然，也可以参考文献中采用的流动相。选好了要用的流动相，就可以根据我们初步确定的极性强度得到流动相的配比了（如果是二元流动相的话） 。如果是三元及以上的流动相，可以采用 Gla

13、jch 和 Youngstrom 的七种溶剂系统的方案进行选择流动相的配比。然后从中选择分离效果比较好的组合。 最开始可以采用微量圆环法（将样品点在中间，然后将流动相用毛细管从原点向圆周扩散）和小板实验法来摸索，然后再应用于大的制备 TLC。 我也曾直接采用圆环法，也称为环形展开，来进行制备的。本来是应该有专门的 U 形展开室来展开，但是因为我们这里没有这个设备，所以我一般采用简易的方法：即将样品点在中央，然后用尖头的滴管源源不断的向圆心滴加流动相的。样品会分出不同的同心圆而得到分离。这样的好处有三：（1）只要操作小心，各个同心圆真的就非常圆，即不会出现线性层析中的边缘效应等。 （2）分离效果

14、更好，拖尾现象小于线性层析。 （3）由于圆心式展开的 Rfc 是线性展开的 Rf 的平方根，要大于线性展开的 Rf，所以分的更开。弊端在于将各个组分从板上刮下的时候需更小心才不会使之混杂。 15. 当展开剂极性差别很大时，特别是极性大的成分所占比例很小时，往往会出现溶剂脱混现象。在这种情况下，展开槽 饱和与不饱和差别没有显著性差异，薄层板上往往会出现类似分层的现象，所以只有换展开系统来调整。 16. 甲醇用量较小，而甲醇又易挥发，容易产生边缘效应，要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。 17. 如果经过一次展开后,展开槽内仍剩下足够的展开剂,可以展开第二块板子吗？ 个人认为最好不要。一般来说为

15、得到较好的分离效果，应先饱和一下，第二次使用如果还要饱和就会造成另一侧残留的展开剂附着在板子上，造成影响。而且有机溶剂一般较易挥发。 18. 自己手铺的薄层板怎么都没有买来的高效板好用，用过之后也可以用极性大些的展开剂将展开的点，二次展开跑过，这样就可以重复利用了。 显色： 19. 药典：显色装置 喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用的玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。 20. 说关于薄层板加热变黑的问题，其实很容易解决：当喷完显色剂后不用在放烘箱里烘了，可以用电吹风在板子背面吹吹就能显色了。我们实验室里一般都采用此法，

16、简便、快洁如果一非想使用烘箱烘的话，一定要用带玻璃窗的，当看到显色了就取出，不然不好控制显色时间，时间过长，CMC 容易碳化变黑。 21. 根据我的经验， 薄层版变黑 与 CMCNa 的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的） ，我老师说这是因为浓硫酸把 CMCNa 炭化了，其实这种情况你只要适当降低 CMC-Na 的浓度就可以了，当然如果不加 CMC-Na 的话容易把板弄破。 22. 显色剂：称取 100mgDC 红色 19 号（染料索引号 No 45170）溶于 150ml 二乙醚、70ml 95乙醇和 15ml 水。此溶液可

17、保存一周。薄层板喷布显色剂 R6 后，立即在 366nm 下观察和记录。 问题与应用： 23. 板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是，板子要在常温下晾干后，再在烘箱中活化。如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的。 24. 板铺好后，自然凉干最好，一定是要从玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空气流动；然后再放到烘箱中活化，这样就不会有裂开的现象了； 如果直接铺好后或者只是硅胶表面是干的，放进烘箱都会有裂开的。 25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。 ” 你的板没有完全干透，表面看是干了，但是最中间的没有干，所以你直接放入 105

18、 度的烘箱烘，当然会炸裂了，所以应该先用低温大约 40 度左右烘 30 分钟左右，再用 105 度活化，就可以解决这个问题了。 26. 板子炸裂也可能是 CMC-Na 中有絮状沉淀所致。 27. 但凡加了 CMC 的板都易烘糊，尤其是温度高于 100 度时，若改用不加 CMC 辅的水板来作，就不会有烘糊现象，但不加 CMC 辅的板又太软，点样时容易点出洞，有个好办法是将 CMC 的浓度调至 0.1%，这样就不易烘黑的。 28. 系统适用性：如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度。 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫瞄法，应该做线性范围，同板精密度，异板精密度，回收率。 CM

19、C-Na 溶液的配制： 29. 药典规定 CMC-Na 浓度为 0.20.5，实际操作中 0.40.5最为实用；CMC-Na溶液的溶剂应用蒸馏水，以尽量减少污染。 30. 配制 CMC-Na 溶液，根据实际经验一般将溶液浓度配成 0.3%，需要铺厚板可配成 0.5%左右，薄板可配成 0.2%即可。 CMC-Na 溶解最好是自然溶解（浓度不是太高） ，也可在水浴中加热促溶（用时还是过滤一下好，避免铺出的板子有麻坑） 。 31. 配制 CMC-Na 溶液时，可以先量取好蒸馏水，再将称量好的 CMC-Na 均匀撒在水中，用玻璃棒搅拌，如果操作的好的话可以不用加热都能溶解的很好；当溶解完全后，应该抽滤

20、一下，这样铺的板子很均匀，不过滤会因为一些肉眼看不到的不溶物混入，这样铺的板子会出现许多小颗粒； 32. 第一个关键的地方，你的 CMC-Na 溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的 CMC-Na 可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用； 33. 如果有抽滤装置你可以直接把 CMC-Na 溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子） ，还有两个好处一是节省 CMC-Na 溶液，二是倒滤过的 CMC-Na 溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了。 34. 在 CMC-Na 的溶解过程中，可以使用可进行加热操作的磁力搅拌器

21、，大概搅拌 5 小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使 CMC-Na 溶解，并且溶液更澄清; CMC-Na 后处理，很多人说是过滤，或者抽滤，我觉得可能速度很慢，而且又容易浪费。我的做法是离心，5000rpm 离心 20min。倒出上清液， （非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染） 。更难能可贵的是，我可以收集下面没有充分溶解的 CMC-Na。继续加到水中，还可以配制。 35. 配制 4% 5%的羧甲基纤维素（CMC）：称取 CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。 36. 有个办法过滤 CMC-Na 溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没

22、漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒 CMC-Na 溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。 37. CMC 溶液的浓度 0.3-0.7% 比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞； 38. 先将 CMC-Na 溶解完全,可将溶解成所需浓度加热后超声处理,再抽滤,可很快得到上清液 39. CMC-Na 煮沸大概 30 分钟或更久的，其实这个过程很慢。千分之 3。过滤一下，抽滤最好。要放冷。 40. 制备 CMC-Na 时，我的方法是将 CMC-Na

23、 加入沸腾的水中，慢加快搅，防止成团，完全溶解之后，自然沉降或者是抽滤（建议不用滤纸，太慢了，脱脂棉是个不错的选择） 。 41. 对于 CMC-Na 溶液的配置，我认为最好提前几日配好，放置再用。配置时可用超声分散，对少量没有立即溶解的，放置后会逐渐消失。 42. CMC-Na 要用蒸馏水为溶剂，加热溶解后，放冷，最好滤过使用；消泡剂可直接与CMC-Na 溶液混合使用； 43. 如是铺 CMC-Na 的薄层板，先将 CMC-Na 溶解完全，可将溶解成所需浓度加热后超声处理，再抽滤，可很快得到上清液。 44. 关于 CMC-Na 的配制我觉得还要说一点就是： 这个东西也算是一种高分子材料，而高分

24、子材料的溶解必然都会有一个溶胀，溶解的过程，所以配制的时候，应该将称好的 CMC-Na 少量的撒在水的表面，让其自然沉降，注意要散开平铺，这样能够充分浸润，使其溶胀，之后可以置于水浴锅内加热溶解；当然如果你不是很急着用的话也完全可以，直接用水泡着放那，估计十天半月的也可以用了。 45. CMC-Na 的溶解需要煮？药检所的老师用一个大缸子装水，按比例加入 CMC-Na，让他自然溶涨、溶解，临用前用漏斗，加脱脂棉，滤过即可； 46. 根据我的经验，薄层版变黑与 CMCNa 的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的） ，我老师说这是因

25、为浓硫酸把 CMCNa 炭化了，其实color=blue=这种情况你只要适当降低 CMC-Na 的浓度就可以了，当然如果不加 CMC-Na 的话容易把板弄破； 47. CMC-Na 溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。 48. CMC-Na 完全溶解后，用布氏漏斗过滤。玻板： 49. 选择合适的薄层板（如：2010 cm） ，清洁干净（先用洗手液或洗衣粉清洗，再用自来水冲洗干净，接着用蘸有乙醇的棉花擦拭干净，最后把板吹干或烘干） ，放置于清洁处，备用。 50. 玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4 个角要“健全” 。 51. 载板要求平滑清洁。在使用前一定要处理干净，

26、用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干。 52. 清洗玻璃板相当重要，切记要清洗得相当干净，不然会在铺板中产生小气孔。 53. 薄层板最好用洗洁精浸泡 12 小时，这样比较容易清洗，清洗后薄层板依柱竖起，半小时即可晾干。 54. 板子一定要洗干净，用适中浓度的盐酸浸泡是一个不错的选择。 55. 板要绝对干净。 总结：完整、平滑、清洁！研磨： 56. 硅胶和粘合剂的比例不用固定，稀点铺薄板，稠点铺厚板，以目的决定比例。 57. 硅胶的研磨，当然是一个方向了，可以适量的加入一定量的无水乙醇或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后放在干净容器内超声，效果都是不错的。手工铺硅胶的用量一般 1020 cm 的

27、约 34 克，硅胶和 CMC-Na 的用量一般是 1：2.83，具体根据要铺板子的厚度和CMC-Na 的浓度决定。 58. 40%硅胶：按 CMC 溶液的量、按 40%的比例称取薄板层析硅胶，倒入大研钵中，与CMC 溶液混合，充分研磨成均匀糊状。 59. 先在研钵中加 CMC 溶液，再加硅胶，按同一方向研磨，这样更容易调匀不易包埋硅胶颗粒；稠度以用研棒粘取，成连珠状不成线状下滴为好；配制时遵循现配现用、少量多次的原则，因其易干影响铺制效果。 60. 硅胶和 CMC-Na 溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。可以一个人研磨，一个人缓慢的倒 CMC-Na 溶液。研磨时最能考验

28、你的定力，我觉得你该找女生来磨，但是那种太文弱的不行。研磨时要顺着一个方向，速度不宜快，要顺着研钵的边缘，观察仔细，一定要把气泡赶尽杀绝。研磨好的因改是均匀的，没有气泡，没有固体的粉末类异物，溶液有一定的粘性。 61. 硅胶的浓度要适中。太稀铺板时易淌出，同时延长板的干燥时间；太稠，流动性不好，铺板是靠其流动性的，同时也很可能在没铺好前凝固。 62. 建议硅胶应配制成偏稀的状态，这样铺制更容易，不必辛苦地颠好久，而且可多可少，可薄可厚。 63. 我的经验是 CMC-Na 与硅胶配成 3：1 比较合适，CMC-Na 用千分之三到千分之五，硅胶浓度稍大一些或小一些也行，但不能太低，否则板子边缘会凹

29、凸不平。 64. CMC-Na：硅胶为 2.5：1 较好，楼上师兄说的 3：1 应该也可以，但是硅胶配的过稀时后果很严重，板子在晾干时会出现许多裂缝，象万寿菊样的开花状，完全不能用。 65. 充分磨好硅胶，后，再边磨边加 CMC-Na 溶液；铺的时候，如果慢且多，那么有时会干了，你还要边磨边放点 CMC-Na 溶液。 66. 研磨时防止气泡可以加少量的乙醇或者丙酮；加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。 67. 加长研磨的时间，勿太厚，避免板子炸裂。 68. 超声的排气效果很好。 69. 0.4 CMC-Na 溶液（1：3）置研钵中，朝一个方向慢慢研细约 1015 分钟，10g 吸附剂加入 3

30、 滴 95乙醇以驱赶气泡； 70. 硅胶的研磨时间:如果严格规定的话,需在一分钟内完成,从加入 CMC 溶液到吸附剂中至涂布结束,应在四分钟内完成 71. 硅胶与 CMC-Na 溶液的比例根据硅胶型号的不同而不同：硅胶或硅胶 GF254 比例一般为 1：2 1：3，硅胶 H 或硅胶 HF254 比例一般为 1：3 1：4。 72. 研磨的时候确实需要沿一个方向研，不要敷衍 73. 硅胶研磨要充分，防止气泡。 74. 实在怕有气泡，可以超声一下。 铺板： 75. 药典：薄层板制备 除另有规定外，将 1 份固定相和 3 份水（或加有黏合剂的水溶液）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂

31、布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为 0.20.3 mm） ，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在 110 烘 30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视） 。表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染。 76. 薄层板的厚度：如果定性分析，一般厚度以.25 mm 为好；如果要分离制备少量的纯物质时，厚度应稍大一些，常用的为 0.5 mm0.75 mm，甚至有 1 mm2 mm 的。 77. 铺板，我觉得是各人各喜欢，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，倒时也要注意不能引入小气泡。可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，如有

32、需要，可以双手 10 个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使得硅胶分摊匀称。尤其是 4 个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。 78. 将薄层用硅胶粉称定加入 3 倍量的 CMC-Na 溶液，研磨均匀（匀速一个方向）成糊状（我用 1 分钟左右） ，不要静置迅速将涂料倒于备好的玻璃板（事先清洗干净，不可有污渍、水滴。 ）自上而下自然流注铺于玻璃板，倒量为距离边缘 3 厘米左右即可（铺厚板用量适当多些，薄板量少些） ，然后用研钵棒涂布玻璃板上。颠板（上下左右或倾斜根据板的涂布情况而定） 。铺好的板要选择一个水平、通风的平台放置，不可落上灰尘。 79. 依

33、据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒到薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜层析板，使吸附剂流至层析板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜层析板，使吸附剂回流；然后是另外两个方向，重复上述操作，后轻颠几下薄层板即可。 80. 将吸附剂制备好后，直接将适量倾倒于玻板的中央处，接着用研棒轻轻将吸附剂溶液向四周摊匀，然后开始颠玻板；颠的时候可要注意啦：一定要轻轻的颠，从玻板的一头颠到另一头，然后反过来进行。重复几次即可。 81. 将研好的糊糊倒在干净的板上，我一般是从中间一次性倒下去，然后用左手托板，轻轻倾斜，使糊糊向板边缘流动，右手拿研棒将没铺到的地方涂均匀，但要注意研棒在接触糊糊一直到最后涂抹

34、均匀才能离开板，一旦提起就不能再去涂抹，否则会留下痕迹。涂抹结束后，就颠板啦，我的经验是颠的幅度不易大，但频率可以快些。 82. 颠板。此过程要与前面步骤连续进行，且不宜久颠，以保证颠好后硅胶还有一定的流动性，放置到平台时仍可以靠自身流动修正颠板及移动所产生的不均。 83. 将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。 84. 铺板时，用的硅胶量要掌握好。 85. 将硅胶倒入在盛有 CMC-Na 溶液的研钵中，CMC-Na 溶液的浓度不宜过高，研磨均匀，大约 5-10 分钟，用研棒粘取，成珠滴为好，铺板，两面颠簸至平放置平台上。 86. 载玻片的涂布：将干燥后的载玻片两片夹在

35、一起，沉浸入糊状物中，使在载玻片上形成固体层为了浸蕉一对载玻片，用你的指间夹住载玻片的一端，并尽可能地向下进入所提供的糊状物中当载波片一浸入糊状物中后，立即以快而平稳的速度将其拉出，并让过量的糊状物滴回小心的分开载玻片，放到水平台上，干燥 （注意：糊状物一定要均匀；要迅速拉出载玻片，大多数人拉得太慢） 87. 研磨硅胶时，我一般取 30 g 硅胶 H，加入的 CMC-Na 100 ml，研磨，当将研棒提起时，硅胶象成溜似的滴下为正好。 88. 铺完板后，最好将两边的边缘修理一下，并且各个边缘都要擦干净，这样可以避免跑歪。 89. 边缘坏一点可以用刀子刮去整齐的一条。 晾干： 90. 对铺好的板

36、要选择平整的地方，自然干燥，不易人为强制干燥。干燥后再活化，否则板会开裂。 91. 铺好的板，要找个干净的地方放置晾干，这个过程也是耐心的等着它，请勿打扰。 92. 板铺好后，自然凉干最好，一定是要从玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空气流动。 93. 板子铺好之后一定要放在平面上阴干（一定是阴干，不然你会后悔的） ，如果看荧光最好是找一个比较干净的房间，不然荧光下板子上会有很多点点。 94. 要等阴干且透后才能放入烘箱干燥活化时。还有一点，铺板和凉板时周围的环境要好，桌面要干净，最怕是有粉尘，如有粉尘落在未干的板上可就惨了，定量不行，可以定性，但不好看。 95. 自然干燥后，放入烘干

37、箱烘 12 小时以上。 96. 薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀。 97. 铺制好的薄层板先让其稍干后，即看不出有明显的水印，放入烘箱内用 50 度以下的温度并开鼓风干燥 30 分钟，再升温干燥至干，注意升温过快在使用的过程中有可能发生起层的现象，不利于分离，以上方法经本人两年多的实践，效果较好且耗时又不太长。 98. 置平整处过夜自然晾干；如使用较急亦可 60烘干。 活化：99. 活化的目的是除去水分。 100. 自然晾干后，活化一下（105 摄氏度 40 分钟左右） ，置于密封的干燥器保存。 101. 再在 105110活化，活化时间为 0.51 小时，冷却

38、后即可使用。 102. 厚板在活化时容易裂，考虑到化学药相对容易分离，所以降低活化温度，自然晾干后，40 或 60 摄氏度的烘箱中 23 小时即可，干燥器中保存。 103. 用于分离中药的薄板需要活化，活化后要立即使用，可以称热点样饱和，不然空气中的水分会导致你作无用功，使得吸附色谱转为分配色谱。 104. 薄层烘干的时候最好不要在带鼓风的烘箱中烘，容易起皱，或者破裂。 点样： 105. 药典：点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 106. 药典：除另有规定外，在洁净干燥的环境中，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线距的底边 1520 mm，高效板

39、一般基线距底边 810 mm，圆点状直径一般不大于 3 mm，高效板一般不大于 2 mm；条带状宽度一般为 510 mm。高效板条带宽度一般为 48 mm，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。一般不少于 8 mm，高效板供试品间隔不少于 5 mm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 107. 点样，可以用进样器，也可以用定量毛细管（有点贵啊，5ul 的 2 块多一根） ，点样时尽量使点小且圆整，尽量不要破坏板子。 108. 毛细管点样，点样量不能控制。你可以到药店买 12ml 的注射器作为点样器，可以满足 TLC 鉴别的要求，而且很便宜哦！ 109.

40、 点样，我上学的时候，老师用比较便宜的进样器（大约 10 几块钱吧，10l 即可） ，将针尖打磨圆滑，老师好像是用锉一点一点锉的，这样点样的时候样品溶液不容易沿针尖上行（甲醇溶液都这样） ，并且针尖不会刺破已经铺好的薄层板。现在，我和师兄都是实行的这个办法，还是比较实用的，点样量可以精确到 0.5?l。当然，点样的时候手不能抖动，动作要轻 110. 要磨平微量进样器的针尖，简单的方法就是，在展缸的盖子上轻磨（当然是靠近中间部分） ，就很快能解决问题 ，且很平滑。 111. 关于点样：我们一直都用液相平头进样针，10 ul 就够了，如果点样量低于 1ul 的话，就用气相进样针。都可以很好的控制点

41、样量，且斑点也可以满足要求。速度也快。可以避免毛细管先快后慢的毛病。 112. 用定容毛细点样管：5 ul ，2 ul ，1 ul。 113. 对于点样我也有些心得。原来有专门的点样管，是 10 ul 规格的，是点 10 ul 的好说，反正点完就是了，但要点 5ul 或更少，那就全凭眼力了，做得是一点把握没有啊，但还得点，呵呵。自从发现可以用微量进样器后，不仅可以控制的得心应手，不会因为一按不稳把药液给全点上去导致斑点过大，还可以重复利用节省开支，重要的是还环保。呵呵！提倡广大的兄弟姐妹也用微量进样器替代塑料的点样管，经济又好用。 平衡与饱和： 114. 药典：展开前如需要溶剂蒸气预预平衡，可

42、在展开缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持 1530 分钟，溶剂蒸气预平衡后，应迅速放入载有供试品的薄层板，立即密闭，展开。如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则须在展开缸的内侧壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，使系统平衡或按正文规定操作。 115. 饱和也非常重要，边缘效应很严重的不妨用下端浸在展开剂中的滤纸贴在展开缸的内壁，这样饱和效果会好一些。 116. 在层析缸口涂适量凡士林，增加密封性。 117. 层析缸在展开前最好平衡一个小时左右，让里面的展开剂平衡。也可以在两边放滤纸条，增加展开剂的散发面积，减少边缘效应。 118. 以展开剂边缘效应的大小，确定展开剂

43、平衡时间的长短，一般平衡时间在 30 分钟即可。小型薄层色谱在药物合成中的使用方法经验总结薄层色谱法(TLC,thin-layer chromatography)是一种在铺成薄层的固体上进行的平面色谱方法, 由俄国学者 NAIzmailov 等在 1938 年首次报导。但直到 1956 年德国学者 E1Stahl较完整地发展了这个方法,TLC 才得到广泛重视和研究,成为色谱法的一个重要分支,处于活跃和发展状态。EStahl 因此项工作获得 IUPAC 的 Talanta(分析化学)大奖。薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)具有相同的分离原理 ,是依据不同物质在流动相与固定相之间的吸附和

44、解吸速率不同来进行物质的分离。薄层色谱与纸色谱、柱色谱等属于传统分析;高效液相色谱、质谱、气谱等属于仪器分析。随着时代的发展,仪器分析渐渐取代传统分析,现已成为主流。仪器分析在精密性、准确性、连续性、重现性等方面,有着传统分析达不到的优点。例如定量分析多组分有机混合物,或者在有标准品的情况下确定未知物时, HPLC 法与 TLC法比较,具有准确度高、重现性强的优点。但是和传统分析比较,仪器分析主要的弱点就是不灵活,必须按照固定的程序操作,更改条件比传统方法繁琐得多。其次是成本高的问题,先期投入大、人员培训周期长、运行维护的人力、物力费用高。相反,这些正是传统分析的优点。因此,在普通的有机合成、

45、精细化工实验室,传统分析仍不可完全被代替,其优势在于灵活多变、应用方便、成本低廉。TLC 法有着悠久的历史,随着经济发展,对外交流增多,很多实验室已采用商品化的薄层板,如涤纶片基硅胶板。商品化硅胶板和自制硅胶板相比,具有性能稳定、重现性高的特点,可进行半定量分析1。总之，与经典的柱上色谱,常用的气相色谱、纸上色谱,以及较近发展起来的高效液相色谱比较,TLC 有以下特点:1) 设备简单,操作方便;2)快捷,展开时间短;3)可采用多种固定相及显色手段,方法多样而高效;4)可广泛选择流动相;5)检出灵敏度高,一般可达 10-10g 以下;6)样品量适用范围大；7)技术多样化 , 特别是二维展开、浓度

46、梯度展开等,展开机理亦有吸附、分配、离子交换、电泳、等电聚焦等多种,可联合采用数种手段,为其它色谱技术所不及。以上是 TLC 的长处,但应当指出,TLC 在自动化程度及分离效果上比气相色谱和高效液相色谱稍差,分析特别复杂的样品有时有困难,也不适于挥发性样品的分析。近年来,发展了高压TLC、高效离心 TLC、圆柱 TLC、等离子检出等新技术,TLC 在自动化和高效方面已达到与高效液相色谱同等的水平。小型薄层色谱(m-TLC)技术作为合成实验中的常规监测手段以及 TLC 和其它色谱技术的前导技术发挥着重要作用。m-TLC 技术细节的掌握和未知体系技术参数的确定是 m-TLC 应用于新的反应体系的关

47、键2。1 薄层色谱的制作1.1 使用的化学药品和仪器有:(1)化学药品: 使用的主要化学药品列于表 1。表 1品名 规格 来源硅胶-G （60H） TLC 专用 青岛海洋化工羧甲基纤维素钠（CMC） 分析纯 上海化学试剂二厂甲醇 分析纯 上海振兴化工二厂乙醇 分析纯 上海振兴化工二厂(2)仪器:m-TLC 仪器一套,自备包括 m-TLC 基板,展开槽,显色槽。 1.2 m-TLC 薄层板的制备(1)将(2.5 7.5)cm2 载玻片依次用水和乙醇洗净，晾干。要求玻片无划痕, 水膜均匀,完全洁净。置玻片于 80烘箱干燥,转入干燥器冷却至室温,备用。(2)用 110g 硅胶-G 配 2.5mLCM

48、C-Na 水溶液(0.50%,w/w) 调制硅胶糊 (slurry)。(3)将硅胶糊均匀涂于(2.57.5)cm2 载玻片上,每块载玻片约用 0.20.4g 硅胶(干重)。保持薄板水平,令其自然干燥 12d。其间保持薄板洁净。(4)将薄板放入 110烘箱活化 30min。(5)将薄板转入干燥器,令其自然冷却至室温,备用。2 薄层板制备的常见问题及解决方法2.1 关于配制 CMC-Na：CMC-Na 是一种高分子材料, 而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀、溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的 CMC-Na 逐量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,使其溶胀,之后可

49、以置于水浴锅内加热溶解,当然如果你不是很急着用的话也完全可以直接用水泡着放一边,泡个几天也是可以用的。以下是配置 CMC-Na 过程中需要注意的方面：先将称好的 CMC-Na 加入所需水量的 8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入。这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.0.5%CMC-Na 与水如果不好溶涨，可在溶涨前加几滴乙醇，比较好溶，但是尽量不加，因为加入乙醇后使 CMC-Na 的粘合性降低。CMC-Na 溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。而且放置时间太长的 CMC-Na 溶液可能会发黄，如果有霉菌出现，绝对不能再使用。(2)CMC-Na 溶液的浓度 0.3%-0.7%比较合适，实际操作中 0.40.5最为实用，浓度高了，将来显色时,如果有加热过程稍不小心板子容易发黑;浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时如果紧张，容易出洞。(3)在 CMC-Na 的溶解过程中，可以使用有加热操作功能的磁力搅拌器，大概搅拌 5 小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使 CMC-Na 溶解，并且溶液更澄清。如果有