1、 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB 5009.31xxxx 2010-发布 1.1.1.1 2010-06-01 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布xxxx-xx-xx 发布 xxxx-xx-xx 实施食品安全国家标准食品中对羟基苯甲酸酯类的测定（征求意见稿）GB 5009.31xxxxI前 言本标准代替 GB/T 5009.31-2003食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 。本标准与 GB/T 5009.31-2003 相比主要变化如下：扩大了对羟基苯甲酸酯类的检测范围，增加了对羟基苯甲酸酯甲酯、对羟基苯甲酸丁酯的检测；修
2、改了分析步骤中酱油、醋、果汁液体试样称量方式的表述；修改了对羟基苯甲酸酯类的标准曲线范围；气相色谱法增加毛细管柱分析测定条件，删除了填充柱分析测定条件；增加了食品中对羟基苯甲酸酯类测定方法的定量限；修改了计算公式，将计算结果以对羟基苯甲酸酯类计，改为计算结果以对羟基苯甲酸计。GB 5009.31xxxx1食品安全国家标准食品中对羟基苯甲酸酯类的测定1 范围本标准规定了食品中对羟基苯甲酸酯类的气相色谱法。本标准适用于酱油、醋、水果汁及果酱中对羟基苯甲酸酯类的测定。2 原理试样酸化后，对羟基苯甲酸酯类用乙醚提取浓缩后，用乙醇定容，并利用氢火焰离子化检测器气相色谱法进行分离测定，保留时间定性，外标法
3、定量。3 试剂和材料注 1：除特别规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的二级水。3.1. 试剂3.1.1. 无水乙醚 (C2H5OC2H5)：重蒸。3.1.2. 无水乙醇（C 2H5OH）：优级纯。3.1.3. 盐酸（HCL） 。3.1.4. 氯化钠（NaCl） 。3.1.5. 无水硫酸钠（Na 2SO4） 。3.1.6. 碳酸氢钠（NaHCO 3） 。3.2. 试剂配制3.2.1. 饱和氯化钠溶液：称取约 40 g 氯化钠，加 100 mL 水充分搅拌溶解。3.2.2. 碳酸氢钠溶液（10 g/L ）：称取 1 g 碳酸氢钠，溶于水并稀释至 100 mL。:3.2.3.
4、盐酸溶液（1:1）：量取 50 mL 盐酸，用水稀释至 100 mL。3.3. 标准品3.3.1. 对羟基苯甲酸甲酯，纯度99.8% 。3.3.2. 对羟基苯甲酸乙酯，纯度99.7% 。3.3.3. 对羟基苯甲酸丙酯，纯度99.3% 。3.3.4. 对羟基苯甲酸丁酯，纯度99.7% 。3.4. 标准溶液配制3.4.1. 对羟基苯甲酸酯类标准储备液（1.00 mg/mL）：准确称取 0.0500 g 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯标准物质于 50.0 mL 容量瓶中 ，用无水乙醇溶解并定容至刻度，浓度分别为 1.00 mg/mL ，置于 14冰箱保存，可保
5、存 1 个月。3.4.2. 对羟基苯甲酸酯类标准中间液（100 g/mL）：分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准储备液（3.4.1）1.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。临用时配制。GB 5009.31xxxx23.4.3. 对羟基苯甲酸酯类标准工作液 1-5 的配制：分别吸取对羟基苯甲酸酯类中间液（3.4.2） ，0.40 mL、 1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释并定容。此即为 4.0 g/mL、10.0 g/mL、20.0 g/mL、50.0 g/mL、100 g/mL 的标准工作液 1-5 的
6、浓度，临用时配制。3.4.4. 对羟基苯甲酸酯类标准工作液 6（200 g/mL）：分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准储备液（3.4.1）2.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。临用时配制。3.4.5. 对羟基苯甲酸酯类标准工作液 7（300 g/mL）：分别吸取对羟基苯甲酸酯类标准储备液（3.4.1）3.0 mL 于 10.0 mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。临用时配制。 4 仪器与设备4.1. 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID） 。4.2. 旋转蒸发仪。4.3. 涡旋混匀器4.4. 氮气，纯度 99.99 %。 5 分析步骤5.1. 试样制备
7、5.1.1. 试样处理5.1.1.1.酱油、醋、水果汁一般液体试样摇匀后可直接取样。称取 5.000 g 试样于小烧杯中，并转移至 125 mL 分液漏斗中，用 10 mL 饱和氯化钠溶液分次洗涤小烧杯，并合并洗涤液于 125 mL 分液漏斗，加入 1 mL 1:1 盐酸酸化，摇匀，分别以 75,50,50 mL 乙醚提取三次，每次 2 min ，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于 250 mL 分液漏斗中，加入 10 mL 饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以 1 g/100mL 碳酸氢钠溶液 30,30,30 mL 洗涤三次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，将有机层经过无水硫酸钠（约 20 g
8、）滤入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用氮气除去残留溶剂，用无水乙醇定容至 2.0 mL，供气相色谱用。5.1.1.2.果酱称取 5.000 g 事先均匀化的果酱试样于 100 mL 具塞试管中，加入 1 mL 1:1 盐酸酸化，10 mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混匀 1-2 min，使其为均匀溶液，再分别以 50,30,30 mL 乙醚提取三次，每次 2 min ，用吸管转移至 250 mL 分液漏斗中，以下按 5.1.1.1 操作“加入 10 mL 饱和氯化钠溶液洗涤一次，”。5.2. 测定5.2.1. 色谱条件a) 色谱柱 : 弱极性石英毛细管柱（内涂 5%苯基甲基聚硅氧烷， 30 m0
9、.32 mm0.5 m）或等效柱。b) 柱温升温程序：初温 100保持 1 min，20 /min 升温至 170 ，以 12 /min 升温至 220 保持1 min，再以 10/min 升温至 250 保持 6 min。c) 进样口：温度 220 ；进样量 1 L，分流进样，分流比 110(分流不分流可根据色谱条件调整） 。d) 检测器：氢火焰离子化检测器（FID） ，温度 260 。e) 载气：高纯氮气，流量 2.0 mL/min，尾吹 30 mL/min。f) 氢气：40 mL/min ；空气 450 mL/min（载气、氢气、空气流量大小可据仪器条件进行调整） 。5.2.2. 色谱分
10、析GB 5009.31xxxx3分别吸取 1 L 的标准系列各浓度溶液（ 3.4.3、3.4.4、3.4.5）注入气相色谱仪中，可测得不同浓度被测物的响应值峰面积或峰高，以浓度为横坐标，相应的峰面积值或峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同样进样 1 L 试样待测液（ 5.1.1.1、5.1.1.2） ，保留时间定性，测得峰面积或峰高，根据标准曲线得到进样液中的组分浓度；试样待测液响应值若超出标准曲线线性范围，应用乙醇稀释后再进样分析。平行测定次数不少于两次。6 分析结果的表述试样中对羟基苯甲酸含量按式（1）计算： （1）fmVCXi10式中：Xi试样中对羟基苯甲酸的含量，单位为克每千克( g/kg
11、)；C由标准曲线计算出进样液中对羟基苯甲酸酯类的浓度，单位为微克每毫升（g/mL） ；V乙醇加入量，单位为毫升(mL) ；m试样质量，单位为克(g) ；对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数。0.9078对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸的换算系数；0.8312对羟基苯甲酸乙酯与对羟基苯甲酸的换算系数；0.7665对羟基苯甲酸丙酯酯与对羟基苯甲酸的换算系数；0.7111对羟基苯甲酸乙酯与对羟基苯甲酸的换算系数；计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留二位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。8 检出限、线
12、性范围及色谱图标准浓度的线性范围 4.0 g/mL300 g/mL ；当试样量为 5 g、定容体积为 2.0 mL 时，对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的方法定量限(LOQ)2.0 mg/kg 。GB 5009.31xxxx4附录 A色谱图图 A.1 给出了对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯标准气相色谱图A.1 对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯标准气相色谱图图 A.2 为检出对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的酱油试样的气相色谱图A.2 检出对羟基苯甲酸乙酯、丙酯的酱油试样的气相色谱图GB 5009.31xxxx5食品安全国家标准 食品中对羟基苯甲酸酯类的测定编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的
13、起草过程、主要起草单位、起草人等）标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。主要起草人：杨大进、方从容、杨杰、陆晶晶。简要起草过程：编制组根据卫生部卫生标准专业委员会2010 年卫生标准制（修）订项目委托协议书要求，依据 GB/T1.1-2009标准化工作导则第一部分：标准结构与编写规则和 GB/T 20001.4-2001标准编写与规则 第四部分：化学分析方法 ，参照 GB/T 5009.1食品卫生检验方法 理化部分 总则 ；认真贯彻落实 2011 年食品安全国家标准清理工作方案要求。2010 年 11 月份底完成资料收集、整理工作，以确定研究方法与技术路线增加分离度高的毛细管
14、气相色谱法，对国标方法进行复核，并对气相色谱仪器使用条件进行优化。开展方法重现性、灵敏度、检出限、分离度、准确度、线性关系等技术内容的确定研究。2011 年 5 月底完成检验方法的实验摸索研究，起草出方法初稿。2011 年 6 月底完成检验方法标准验证工作，公开征求各方对标准（草案）意见。2011 年 8 月按照协议要求完成卫生标准（修）订工作，按期提交送审稿。二、标准的重要内容及主要修改情况1 扩大对羟基苯甲酸酯类的检测范围，增加对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定用于食品防腐剂的对羟基苯甲酸酯类有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等，其中对羟基苯甲酸
15、丁酯的防腐作用最好。我国 GB2760食品添加剂使用卫生标准明确规定了对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯及其钠盐、对羟基苯甲酸丙酯及其钠盐的使用范围和最大使用量。为了与 GB2760-2007 的限量标准的规定相配套，同时又与国际的相关限量标准相接轨，需扩大对羟基苯甲酸酯类的检测范围。2 将液体试样的取样方法的表述进行修改：建议将酱油、醋、水果汁：吸取 5 g 预先均匀化的试样于 250 mL 分液漏斗中的取样方法，改为称取5.000 g 试样于小烧杯中，用饱和氯化钠分次洗涤转移的处理方法。理由：酱油、醋、水果汁这三种液体食品，由于它们的原料、制造工艺和配方不同，它们之间的相对密度各不相同，
16、就是同一品种之间相对密度差异也较大，因此吸取 5 .0 mL 试样的质量与实际称取 5 mL 的试样质量，结果有很大的差异。3 增加毛细管柱分析测定条件原标准采用填充柱分析， 溶剂峰干扰大、分离效果差、准确性差、灵敏度低，对含量较低的样品不能满足需要。因此改用分离度高、灵敏度高的毛细管色谱法，同时增加毛细管柱分析测定条件，并对毛细管柱分析条件进行了优化。根据标准和文献的报道，选用同样柱长 30 m、同样内径 0.32 mm、同样膜厚0.25 m 的 DB-1、HP-5、INNOWAX 、FFAP 四种不同极性的毛细管柱对约 100 g/mL 对羟基苯甲酸酯类标准进行分析。最终选择 HP-5 （
17、30 m0.32 mm0.25 m）做为对羟基苯甲酸酯类的分析柱。4 将计算公式中以对羟基苯甲酸酯类计改为以对羟基苯甲酸计 GB 5009.31xxxx6GB2760-2007 中规定了食品中对羟基苯甲酸酯类限量标准的限量值是以对羟基苯甲酸计的，为了与相应的限量标准相配套，检验方法的测定值也应以对羟基苯甲酸计。5 将标准中用无水乙醇定容至每毫升含 1 mg 对羟基苯甲酸乙酯、丙酯改为用无水乙醇定容至 2.0 mL.通过对市场采集的样品中对羟基苯甲酸酯类含量的测定，当定容至 2.0 mL 时，既可以使大多数样品中对羟基苯甲酸酯类的测定浓度包含在在标准曲线范围内，又可以满足方法定量限的要求。6 对
18、修订后的标准方法的科学性、可操作性的验证：线性范围：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准系列浓度在 4.0 g/mL300 g/mL 范围内具良好线形关系；对羟基苯甲酸甲酯 r0.999；对羟基苯甲酸乙酯 r0.999；对羟基苯甲酸丙酯 r0.999；对羟基苯甲酸丁酯 r0.999；。定量限： 选取不含对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的酱油、水果汁、果酱样品各 6 份，称取 5g 试样，加入高于仪器噪音 10 倍的浓度水平的对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯标准溶液，按标准方法进行处理，定容体积为 2.0 mL，确定方法检出限(LOQ)0.0020 g
19、/kg 。检测方法的应用：从市场采集到 20 份样品包括酱油、醋、果酱等进行检测，测出对羟基苯甲酸乙酯最大值为 0.091g/kg，最小值为 0.0021 g/kg；对羟基苯甲酸丙酯最大值为 0.065 g/kg，最小值为0.0026g/kg；对羟基苯甲酸甲酯、 对羟基苯甲酸丁酯在所有样品中都未检出。三、国际国内标准情况目前国内规定的食品中对羟基苯甲酸酯类的测定方法既有地方标准（食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 DB37/T 1100-2008） ，也有国家标准（食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 GB/T 5009.31-2003） ；还有行业标准（蜂王浆中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类检验方法 SN/T 1303-2003） 。近年来出现相关对羟基苯甲酸酯类文献几十余篇，我编制组详细研究、分析，以确定修订 GB/T 5009.31 标准分析方法的技术路线。日本卫生试验法（1990-1994 年） 食品添加剂试验法中亦规定了食品中对羟基苯甲酸酯类测定的相关检测方法，方法包括紫外吸收光谱法定性和定量、气相色谱法定性定量。GB/T 5009.31 就是在日本卫生试验法，气相色谱法测定食品中对羟基苯甲酸酯类方法上进行修改后制定的。四、其他需要在网上公开说明的事项无。
