1、表业生物技术学报Jouma_I ofAgrieulnmd Si01tclmo|ogy 200l|0(3)增趔荣昌猪与新荣昌猪I系遗传变异的RAPD标记分析李竞杜华茂黄伟鞠静丽(西南农业大掌荣昌校区生物技术系，重庆荣昌462460)孔路军曾秀王孝友辜玉红(重庆市养猪科学研究院生物技术研究中心，重庆荣昌462460)关键词：荣昌猪盘童：RAPD分析摘要：利用60个随机引物对荣昌猪和新荣昌猪1系的基田蛆DNA进行RAPD分析，其中35个引物可扩增出清晰的RAPD带型，1个引物A。表现出明显的遗传乡态性结果表明：荣昌猪和新荣I系群内平均相似系教分别为0787、080；平均遗传砸高为02130198两品
2、系阃平均相似系数为O795；平均遗侍距高为0206两品兼内及品系同都存在着DNA分子水平上的差异荣昌猪是我国三大地方优良猪种之一，荣昌猪的内质和鬃质特性属世界一流，荣昌猪遗传性能稳定，是宝贵的猪遗传基因库，利用其基因，可不断培育出优良的品种(品系)新荣昌猪l系就是重庆市养猪研究院与四川农业大学合作在荣昌猪的基础上历经十年的系统选育，成功地培育的第一个低外血含量的瘦肉型专门化母系川80年代以来，引进长白、约克等大量外来瘦肉型猪种作为终端父本，广泛开展经济杂交，提高生产力但由于缺乏对荣昌猪的保护意识和受经济利益的驱使，导致荣昌猪种基因混杂现象严重因此，作好荣昌猪遗传资源的保护，使荣昌猪的优良基因不
3、至于丢失，其意义重大但目前对品种的群体遗传多样性的评定还停留在表型和定性的描述上，缺乏有力的科学依据因此从分子水平上进行深入研究将有助于荣昌猪资源保护和合理利用随机扩增多态DNA(Random amplifiedpolyrnorphic DNA，RAPD)技术“I，是】990年由Williams和Welsh等人建立起来的一种新的揭示基因组DNA多态性的方法广泛应用于动，植物群体和个体遗传结构分析，遗传图谱构建基因定位和连锁分析品种(系)亲缘关系鉴定、动物育种的标记辅助选择等领域140本文利用RAPD技术分析了荣昌猪和新荣I系两品系的群体遗传变异以及群体内和群体问的分布，为保护与合理利用这一地方
4、优良品种提供科学依据1材料与方法11试验猪群来源与血样采集 本实验所用荣昌猪，新荣1系由熏庆市养猪研究院荣昌品系猪场、重庆市养猪科学研究院新荣I系猪场和重庆市板桥种猪场提供共采集血样95头份，其中荣昌猪81头份，新荣I系14头份12基因组DN的提取纯化采用泛特津小量基因组DNA纯化试剂盒(购于长春迁特漳生化技术发展有限责任公司)提供的试剂和方法，并作适当的改进进行基因组DNA的提取纯化13 PcIi反应体系与反应程序的优化在25ul反应体系中，含10 x Buffer25ul、MgCl2(25mM)25ul、aNTP(10mML)IOul、TaqDNA聚合酶(SUui)o3ul、随机引物1Ol
5、ll、模板DNA(40ngu1)15ul、ddH20162u1优化的PCR反应程序为：94“(23min(预变性)；94lmin；36lmin；722min进行36个循环后，于72“C再延伸10rain,置4“C保存待电泳检测14 P隙产物的检测采用琼脂糖凝胶电泳对基因组和PCR扩增产物进行电泳检测15数据处理与分析备品系内条带共享率以公式s=2N曲州a崎岫)及D=l-S进行相似系数和遗传距离的统计1912姥栗与分辑21随机引物的筛选与确定结果表明，以条带数较多、重复性较好、扩增效率较高为原则，筛选RAPD标记多态性的随机引物，印确定以引物Al(序列为CAGGCCCTTC)、A9(序列为!竺
6、查些兰塑垫苎兰塑GGGTAACGCC)、B14(序列为TCCGCTCTGG) 均趋于正态分布特征；群内平均相似系数为080，和B15(序列为GGAGGGTGTT)作为荣昌猪和新 平均遗传距离为020与荣昌猪相比，群内遗传更荣I系的进一步RAPD标记分析但在分析结果中 趋于稳定，但仍具有一定的遗传距离其原因可能发现，只有随机引物A1表现出明显的遗传多态性。 与作为新荣I系选育母本的荣昌猪群内的袭型特征故最后取引物A1作为本课题的RAPD分析的最终 较复杂相关引物 33荣昌猪与新荣I系两品系闻带纹相似系数及遗22 POR及电泳结果分别任选18头荣昌猪和12 传距离 结果表明，两品系带纹相似系数范围
7、头新荣1系猪的基因组作为PCR反应的模板，以优 0588-0952，相应的遗传距离范围为0048-0412；化的PCR反应液组成，PCR反应程序及电泳条件， 群内平均相似系数为0795，平均遗传距离为0206在同一张琼脂糖凝胶上电泳从电泳结果来看，随 提示作为琢于荣昌猪的新荣I系具有很高的母本血机引物A1(序列为CAGGCCCTTC)在荣昌猪和 缘关系其一定程度的遗传距离(介于荣昌猪与新新荣I系两品系中所产生的范围为512条，且该带 荣I系问)可能一是因为引入了外种猪；二是因为纹差异存在于两品系内部及其之间条带分子量大 母本本身就具有一定的遗传差异小范围约在200bp-2700bpu问23荣昌
8、猪和新荣I系个体间的相似系数(s) 根据A1引物扩增的RADP带谱，用公式计算出荣昌猪和新荣I系个体问的相似系数(s)遗传距离(D)及其平均值3讨论31荣吕猪品系带纹相似系数及群内遗传距离结果表明荣昌猪带纹相似系数范围为O667-0958，个体间遗传距高范围为0042-0333，均趋于正态分布特征：群内平均相似系数为0787。平均遗传距离为O213在同一品系内表现出如此较高的遗传差异，其原因可能主要与荣昌猪的表型分为八大类有关这也说明荣昌猪的遗传多样性较为丰富提示作为地方猪种的荣昌猪在进一步的良种选育等方面是一个优良的地方资源32新荣l系带纹相似系数及群内遗传距离 从结果也可看出斯荣I系带纹相
9、似系数范围为06670947，-t-体I,q遗传距离范围为0053-0333，参考文献1何承均四川畜牧暮医。199926(11)：332 Welsh JMcClelland CNucleic Acids Rcs,1990，18(24)；721372183 谢新民，施启腰，柳小春，等 湖南农业大学学报1998，24(2)1431474吴开平，吴丰春，魏_ji【。等遗传2000,22(4)：217-2205 常青，周开亚，王义权，等遗传学报，1999,2“5)：480-4886周傻玲，陈永久，罗明，等畜牧兽医学报，1998,29(5)：39扣3967赵凯，张周平，橱公社等中国膏牧杂志，2001，37(2)：17198李金录李娩平韩占兵甘萧畜牧兽医，20006：1-39 Lynch M们Mol Biol Evol，1990，7：478-484
