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SDS-PAGE相关溶液的配方(10%过硫酸铵、5×电泳缓冲液、5×上样缓冲液).pdf

上传人:HR专家 文档编号:5921704 上传时间:2019-03-21 格式:PDF 页数:2 大小:117.77KB
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资源描述

1、SDS-PAGE相关溶液的配方(10%过硫酸铵、5电泳缓冲液、5上样缓冲液)10%(W/V, g/ml)过硫酸铵(APs)的配制:(1ml)1.称取0.1 g过硫酸铵;2.加入1ml的去离子水,将固体粉末彻底溶解;3.贮存于4。注意:10%过硫酸铵最好现配现用,配好的溶液在4保存可使用2周左右,过期会失去催化效果。5Tris-Glycine电泳缓冲液的配制:(1L)1.称取Tris粉末15.1 g、Glycine(甘氨酸)94 g、SDS 5.0 g;2.加入约800 ml的去离子水,搅拌溶解;3.加去离子水定容至1L,室温保存。注意:加水时应让水延着壁缓缓流下,以避免由于SDS的原因产生很多

2、泡沫。5SDS-PAGE Loading Buffer的配制(方案一):(5ml)(本方案摘自Takara网站)组分:Tris-HCl pH6.8(250 mM);SDS(10%);溴酚兰(0.5%);甘油(50%);-巯基乙醇(5%)配制过程:1.量取1M Tris-HCl(pH6.8)1.25 ml;甘油2.5 ml;称取SDS固体粉末0.5 g;溴酚兰25 mg;2.加入去离子水溶解后定容至5ml;3.小份(500 l)分装后,于室温保存。4.使用前将25 l的-巯基乙醇加入到每小份中去。5.加入-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。5SDS-PAGE Loading

3、Buffer的配制(方案二):(10 ml)(本方案摘自蛋白质技术手册汪家政、范明)组分:Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS(2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);-巯基乙醇(14.4 mM)配制过程:1.量取1M Tris-HCl(pH6.8)0.6 ml;50%的甘油5ml;10%的SDS溶液2ml;1%的溴酚兰1ml;2.加入去离子水定容至10 ml;3.分装;4.在4可保存数周,-20可保存数月之久。以上两种上样Buffer的配方不太一样,你还可以参考下面这个配方2SDS凝胶加样缓冲液组分(摘自分子克隆第三版)Tris-HCl pH6.8(100 mM);SDS(4%);溴酚兰(0.2%);甘油(20%);-巯基乙醇或二硫苏糖醇(200 mM)不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

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