1、三种热感手法对阳虚大鼠肾上腺超微结构影响的实验研究三种热感手法对阳虚大鼠肾上腺超微结构影响的实验研究更新日期：2011-01-24 点击： 王倚东 针刺手法是决定针刺治疗效果的关键因素之一，历来研究者甚多。针刺补泻方法繁多，后世学者意见纷纷，很难肯定多种补泻方法疗效的优劣。鉴于此，我们根据多年的临床实践和对多种热补手法的运用体会，深感复式手法的“烧山火”较“捻转”及“提插”温补手法作用效果好。我们以“阳虚”大鼠为研究对象，着重比较“烧山火”手法， “捻转”及“提插”温补手法，三种不同补法对阳虚大鼠肾上腺超微结构的影响，以期从实验的角度比较出三种热感手法的优劣。 1 实验材料 1.1 实验动物：
2、健康 Wistar大鼠，雄性，体重(27718)g，由河南省实验动物中心提供。 1.2 主要试剂：醋酸氢化可的松注射液，中国上海信谊药厂生产，批号 970507，规格 10 mg/2 ml。0.9%无菌生理盐水，郑州化学制药厂生产，批号 96102603。乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)，西安化学制药厂，批号 860908。肝素钠注射液，常州化学制药厂，苏卫药准字(93)2239-5号。25%乌拉坦注射液，北京红星制药厂，批号 90058。无水乙醇(分析醇)，中国安徽酒精厂，批号 961210。 1.3 主要仪器：800 型离心沉淀机(上海手术器械十厂)；Ls 8510型液体闪煤油计数器(美国贝
3、克曼公司)；4809 型托盘天平(江苏常熟衡器厂)；可调微量移液管(上海精仪厂)；光学显微镜(Olympus，Japan)BH 系列；显微镜照相(Olympus，Japan)PM-10-M型。 2 实验方法 2.1 模型制备：健康的 Wistar雄性大鼠 50只，体重(27718)g，随机分成 5组，即模型组(M)、提插组(A)、捻转组(B)、烧山火组(C)、空白对照(D)。每组 10只。 “阳虚”动物模型以大剂量醋酸氢化可的松 25 mg/(kg*d)肌肉注射1 ，连续 12 d；手法组(A，B，C)在造模的同时进行针刺手法治疗，1 次/d，共 12次，空白对照组(D)在相同的时间注射和造模
4、组相当容积药液的生理盐水。各组实验动物按上述条件处理 12 d。第 13 d用 25%乌拉坦按 100 g体重 0.4 ml腹腔注射麻醉后2 ，颈部切开，分离颈总动脉以备插管，经颈动脉放血。采血 2 ml置于肝素(15 u/ml)干燥试管中3 。实验结束取血标本后，立即解剖取出肾上腺，固定于 10%的福尔马林溶液中。72 h后，切取 2 mm厚度组织块，其制作原理、组织切片的程序按脱水、透明石蜡包埋、HE 染色法，于光学显微镜下镜检。 2.2 取穴和手法：取穴关元；针具为 0.5寸毫针；手法操作依据 5版针灸学教材；原则为低频率、小角度；时间 3 min。 2.2.1 提插：重插轻提，频率 5
5、060 次/min。 2.2.2 捻转：角度 3060，频率 5060 次/min。 2.2.3 烧山火：针至皮下为天部，稍下为人部，深部是地部，各部均采取三进一退，微捻转，反复操作。统计学处理采用 t检验。 3 结果与分析 3 种热感手法对阳虚大鼠温补作用的实验结果及分析如下： 3.1 动物一般状态的观察：造模第 12 d后，模型大鼠组虚损状态明显，可出现活动迟缓，神态萎靡，蜷缩，弓背，体毛枯疏，尾部突出，眼睁不开，体重减轻。类似临床上的肾阳虚状态。提插组、捻转组、烧山火组也有类似的表现，但较模型组轻。 3.2 3 种热感手法对“阳虚”大鼠肾上腺超微结构影响：各实验组在 100倍的光镜下数肾
6、上腺皮质束状带细胞核数，方法是在相同的0.02 mm2面积条件下，于皮质束状带区域内任选视野并数出其细胞核数，其结果如表 1所示： 表 1 各实验组光镜下肾上腺皮质束状带细胞数量(s) 组别 肾上 腺数 肾上腺皮质束状带细胞核数 /100.(0.02 mm2)-1 t验 P 值 空白对照组(D) 10 30.93.54 2.879 0.01* 模型组 (M) 10 26.92.60 烧山火组 (C) 10 29.82.57 2.509 0.05* 捻转组 (B) 10 29.52.81 2.148 0.05* 提插组 (A) 10 29.63.06 2.126 0.05* 空白对照组(D)与模
7、型组(M)比较 P0.01；*烧山火组(C)，提插组(A)，捻转组(B)和模型组(M)比较，各分别为 P0.05 由表 1可以看出，模型组(M)肾上腺皮质束状带细胞因脂肪滴明显活跃增多而被泡所占据，在同一定面积内细胞核数明显比空白对照组(D)少，P0.01，差别极显著。烧山火组(C)、提插组(A)、捻转组(B)与模型组(M)相比较差异显著，各分别为 P0.05。上述表明模型组(M)肾上腺皮质束状带细胞的细胞核数目明显减少，空白对照组(D)细胞核数正常，烧山火组(C)和提插、捻转组(A，B)也得到一定的改善，细胞核数目也呈现一定的恢复，从 t值可以看出以烧山火的作用较好。此实验证明了，这 3种热
8、补手法比较以复式手法烧山火较好。 4 讨论 针灸疗法是祖国医学中的一个重要组成部分，而补泻手法又是针刺疗法的一个重要内容，为历代针灸医家重视。 内经开创了针刺手法的先河，奠定了补泻手法的基础。针刺补泻手法发展到今天的程度，一方面表明内经 难经所奠定的针刺补泻方法的原则已不断地得到补充、深化，这对活跃针灸学术气氛，发展针灸理论无疑是大有裨益的。但从另一方面来看，由于后世所发展的针刺手法种类繁多，变化各异，以致现代针灸学界对某些方面的认识未尽一致，莫衷一是。就以针补法而言，究竟哪种最好，哪种较好尚难肯定，从而给临床带来不便。因此，我们可借助于现代科学手段，以阳虚大鼠为研究对象，以期从实验的角度，来
9、对多种热补手法进行比较研究，并以此为出发点来对针刺手法的发展起到抛砖引玉的作用，从而达到促进临床及教学的目的。 阳虚是指人体各种机能活动下降。一方面表现为行动迟缓，反应迟钝，对各种外邪的抵抗力下降；另一方面“阳化气，阴成形” ，阳虚则不能化气生阴，体内气、血、精、津液相应不足。 “阳虚生外寒” ，因此还有恶寒，蜷缩，舌淡苔白，脉弦无力的临床表现。在利用不同药物，选用不同动物复制“阳虚”模型时，不但有上述的“阳虚”表现，而且体内组织器官也有不同程度的改变。我们参考中药药理研究方法学 4 中药药理实验方法学 5 实 验动物和动物模型 6用氢化可的松造成的“阳虚”模型，并达到理想的模型效 果。 醋酸
10、氢化可的松是肾上腺皮质激素之一，可以进入肝外组织，促进肝内组织的蛋白质分解。 还有抑制 mRNA的合成，使蛋白质的合成减少，促进脂肪的分解。因此，出现形体消瘦，体重 减轻的症状，这和阳虚不能化气生阴是一致的。同时，肝糖元合成增加，使机体外周组织对 糖利用率降低。另一方面，醋酸氢化可的松还能抑制淋巴细胞 DNA的合成和有丝分裂，阻碍 淋巴细胞的生成，加速致敏淋巴细胞的破坏。这样就抑制了免疫的作用，出现肝脾的重量减 少，垂体、肾上腺、生殖腺组织发生退行性病变，机体表现出一种衰竭现象。而助阳中药可 以调整以上某些生化变化，而热补手法具有温阳益气通络的作用4 。为了深入了 解多种热补手法对虚证的影响，我们选用了该模型。
