1、 第 10 届全国离子色谱学术报告会论文集（山东威海 2004） （ 制作） 1 单柱非抑制离子色谱电导检测法研究沙丁胺醇的人体药代动力学 申素辉1，段京莉2，陈朝晖3，欧阳津1 （ 1. 北京师范大学化学系，北京 100875） ； (2. 北京大学第三医院药剂科，北京 100083) (3. 瑞士万通公司，北京办事处 北京） 摘要：本文建立了单柱非抑制离子色谱电导检测法测定血浆中的沙丁胺醇浓度，并在此基础 上 研究了沙丁胺醇控释片的人体药代动力学与生物利用度。血样经过前处理以后，以 2.0 mmoL/L 硝酸 + 6 % 乙腈 （ v/v） 溶液为 流动相， 阿替洛尔为内标。 在最佳色谱
2、条件下， 沙丁胺醇在 3 1000 ng/mL 浓度范围内线性良好， 最低检测限为 1ng/mL。 方法重现性好， 回收率为 92.2 95.3 。 单次给药后，进口沙丁胺醇控释片的 Cmax 为 10.34 ng/mL， Tmax 为 5.06 h, AUC0-t 为 ng.h/mL。 关键词：沙丁胺醇；离子色谱；电导检测 沙丁胺醇是一种 2 肾上 腺素受体激动剂， 有较强的支气管扩张作用， 该药不易被破坏，尤其适于口 服，在临床 被广泛用于 治疗支气管 哮喘症。气 质联用法 （ GC-MS）和 液质 联用法（ LC-MS）是目前较 为常用的方 法1-5。 但是测定过程 繁琐，同时 ，由于仪
3、器 及试剂条件限制，使它们在许多实验室难以开展。离子色谱法是 70 年代中期发展起来的一项新的液相色谱技 术，它具有 灵敏度高 ,选 择性好 ,样品 用量少和易 实现自动化 等优点 ,已在 能源、环境、 地质、 食品等领域得到了广泛的应用， 近年来离子色谱在生物物质及医药分析中的应用有了长足的进展6， 7。 本文建立了单柱非抑 制离子色谱电导检测法来测定血浆中的沙丁胺醇浓度。 并将该方法应用于人体药代动力学研究。 本方法样品前处理简单， 避免了复杂昂贵的固相萃取过程， 分析速度快， 灵敏度高， 线性范围广， 检测结果优于高效液相色谱荧 光检测法。 1. 实验部分 1.1. 仪器与试剂 离子色谱
4、仪包括分离中心， IC 泵， 732 电导检测 器。 Millipore 纯水系统。 沙丁胺醇，硝酸、乙腈，苯，实验中所用其他试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水。 受试者用药：进口硫酸沙丁胺醇控释片（商品名：全特宁） ， 8mg/片 . 标准储备液配制： 分别取沙丁胺醇， 阿替洛尔的标准品溶流动相， 浓度分别为 500 g/mL，将标准储备液密封，置于 4oC 冰箱保存。 1.2. 色谱条件 色谱柱： Metrodsep cation 1-2 (4.0 125 mm)； 流动相： 2.0 mmoL/L 硝酸 + 6 % 乙腈（ v/v）溶液；流速： 1.2 mL/min;进样量： 20L。
5、 1.3. 血样处理 取 400L 血 浆加到 2 mL 聚苯乙烯试管内。每个试管内加入 100L 80 g/mL 的阿替洛尔作为内标，加入 300L 苯进行萃取，此过程重复三次。收集所有洗脱液在 40oC 氮 气流下吹干，残渣用 2.0 mmoL/L 硝酸 + 6 % 乙腈（ v/v）溶液反萃取三次，进样 20L。 2. 结果与讨论 2.1 流动相的选择 本文直 接采用阿替 洛尔作为内 标 ,分别 采用 硫酸、盐酸 、硝酸、磷 酸、柠檬酸 做为流 动相，考察了对两种药品峰高和保留时间的影响 ,采用硝酸作为流动相 . 第 10 届全国离子色谱学术报告会论文集（山东威海 2004） （ 制作）
6、 2 单独采用硝酸作为流动相， 被测药物的峰形展宽严重， 试验中发现加入乙腈可以改善峰形（图 1） ，因此本文中采用硝酸与乙腈的混合溶液作为流动相。 A 未加乙腈 B 加入乙腈 图 1 乙腈浓度对于沙丁胺醇和阿替洛尔分离效果的影响 1. 沙丁胺醇； 2. 阿替洛尔 . 固定乙腈浓度为 6，考察了硝酸浓度在 1.0 mmoL/L 2.4 mmoL/L 内 变化对两药品峰高和分离度的影响（图 2） ，结果表明当硝酸浓度在 2.0 mmoL/L 时分离效果最好。 综上所述，本文选用流动相为 2.0 mmoL/L 硝酸 +6 % 乙腈（ v/v）溶液。 2.2. 流速的影响 10mV 1 2 3 4
7、5 6 7 minch2 11210m v 12 3 4 5 6 7 mc经试验选择流速为 1.0 mL/min。 2.3. 方法学研究结果 线性及检出限： 在本文选择的最佳色谱条件下， 沙丁胺醇在 3 1000 ng/mL 浓度范 围内线性良好（ r 0.996） ，最低检测限为 1ng/mL。 回收率： 取空白血浆分别加入已知浓度的沙丁胺醇标准溶液， 测得不同浓度沙丁胺醇的平均回收率在 92.2 95.3。 日内，日间精密度：取血浆药物标准液，于同一日内测定 5 次，连续测定 5d。日 内测定血浆药物浓度的 RSD 不高于 5.1 ，日间测定的 RSD 不高于 5.0 。 2.4. 样品测
8、定 从图 2 可以看出可以看 出沙丁胺醇 和内标物色 谱峰分离良 好，血浆内 源性杂峰没 有 干扰。 18 名受试者口服进 口硫酸沙丁 胺醇释控片 以后，按本 文建立的方 法测定的血 药浓度时间曲线见图 3。 图 2 血浆样品色谱图。 A. 空白血浆沙丁胺醇 (10.0 ng/ml) 及内标（ 50.0 ng/ml） B. 人口服沙丁胺醇 4h 后血 浆 1.沙丁胺醇； 2.内标 . 10m V1 2 3 4 5 6 7 8 9 mich12B10 mV1 2 3 4 5 6 7 8 9minch121A第 10 届全国离子色谱学术报告会论文集（山东威海 2004） （ 制作） 3 0.00
9、2.004.006.008.0010.0012.0014.000 1020304050607080Time (hr)Salbutamolinplasma(ng/ml) 图 3 受试者服药后血浆药物浓度的变化 3. 结论 本文建立的测定血浆中沙丁胺醇浓度的单柱非抑制离子色谱电导检测法， 样品前处理简单，考文献 k, R. C. Hansson, J. Anal. Toxicol. 1999, 23:113 65 . R. G. Baeyens, Talanta, 2000, 50, 1197. 萃取回收率高， 精密度重现性好， 灵敏准确， 能满足血药浓度测定及药代动力学研究 的要求，且具有设备简
10、单，操作方便快速等优点。 参1. S. B. Blac2. F. J. Couper, O. H. Drummer, J. Chromatogr. B 1996, 685:23. M. Deveaux, P. Kintz, J. P. Goulle, J. Bessard, G. Ppin, D. Gosset, Forensic. Sci. Int. 2000, 107: 389 4. F. Ramos, C. Santos, A. Silva, M. Irene Noronha Da Silverira, J. Chromatogr. B 1998, 716: 366 5. K. Schmeer, T. Sauter, J. Schmid, J. Chromatogr. A 1997, 777: 67 6. 陈青川 ,牟世芬 . 药物分析杂志， 1997,1: 54 7. C. L.Guan, J. Ouyang *, Q. L. Li, B. H. Liu, W
