1、第一章绪_言布鲁氏菌病是由布鲁氏菌所引起的一种人、畜共患的传染病,人由于不同的方式接触患病的牲畜或被其污染物而感染发病。发病初期呈现急性过程,易于过渡到慢性,临床上主要以骨关节或肌肉疼痛、反复发热、大量出汗以及各种脏器的损害与经常反复发作为其特征其它一些名称:自从发现本病以来名称极多,有波浪热、波状热、马尔他热、直布罗陀热、地中海热、山羊热、斑氏病、传染性流产爬床病等,后来逐步才用首先发现本病病原体的学者 Bruce 的名字而统一起来。为了统一畜间和人间的该病名称,现统称为布鲁氏菌病,简称布病。归类: 布病在流行病学上属于自然疫源性疾病;传染病防治法又把布病列入 35 种法定报告传染病中的乙类
2、传染病;布病同时也被列入 15 种地方病之列;在职业病名单中,布病又属于生物因子的传染性职业病。此病分布于世界各国,没有严格的地区性,不论热带、寒带都有本病发生。早在 1932 年我国就有关于布病病例的报导。目前国内大多数省、市、自治区均有不同程度的存在。内蒙、黑龙江、新疆、吉林、青海西藏等省区较为严重。我省于 1952 年在定边某牧场发现首例患者,随后在米脂、榆林、府谷、清涧、大荔、西安、澄城、蒲城等地发现,七十年代初期,在渭北地区曾发生大流行。随着以畜间免疫为主的检免处综合防制措施的不断深入落实,我省布病于八十年代开始逐年下降,到 1986 年全省率先以县为单位达到部颁控制区标准。1996
3、 年以来我国及我省布病疫情持续回升,病人连年增加,疫情不断扩散, 布病已经成为危害畜牧业发展和人民群众身体健康的严重疾病,控制布病迫在眉睫。第二章病原体一、分类布病的病原体是布鲁氏菌。它共有六个种 19 个生物型,即羊种菌 3 个生物型;牛种菌 9 个生物型;猪种菌 5 个生物型;绵羊附睾种、犬种菌(国际系统细菌家委员会布鲁氏菌分类委员会将牛 3 和牛 6 归为个生物型 3/6)。我省先后分离出羊种1、 2、3 型 ,牛种菌及犬种布氏菌。二、形态:三型布氏菌形态几乎一致,是一组微小的球状、球杆状、短杆状细菌,宽 0.3-0.6um,长 0.6-1.5um,不产芽胞,不能运动,初代分离的光滑型,
4、可形成荚膜, 用普通苯胺染料均可染色。革兰氏染色阴性,用柯氏染色时保有沙黄的红色,用石碳酸复红和美兰复染色时呈鲜红色,其他细菌则为绿色。3、 生长特性:布氏菌为需氧或微需氧性细菌,在 pH68-7.4 的普通培养基上37培养时也可发育,但在肝汤琼脂上发育良好。布氏菌在人工培养基上初代培养生长缓慢约需经过 7-10 天,有时长达15-30 天才能生长。羊型菌生长较快,牛型较慢,因牛型菌初代培养时需要二氧化碳,因此，初代培养时最好在含 5-10%二氧化碳环境中进行。4、 菌落形态布氏菌在普通琼脂平碟上培养呈圆形,中央隆起,边缘整齐均匀或带有微小颗粒样湿润,大小不等为 0.4-4mm 的菌落。培养初
5、期为微小无色半透明状,随培养时间延长而变成混浊。在划线培养的琼脂斜面上,先是细致的小菌落而后逐渐变成粗糙的湿润菌苔。在肉汤培养基中呈均匀混浊状,不形成菌膜。五、生化特性:布氏菌不液化阿胶,不凝固牛乳, 不产生靛基质,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,能分解葡萄糖, 三型菌均能产生硫化氢,但程度不同,对阿尼林颜料抵抗能力三型各有不同。故产生硫化氢的能力和对各种染料的抵抗能力以及二氧化碳的需要可作为对三型菌的鉴别方法。六、布氏菌的变异性:布氏菌在人工培养中长期保存或经常移植,甚至在动物体内由于防御机能的作用,经常发生变异, 其特点是:1、菌落形态:由通常的 S 型( 光滑型)逐渐过渡为 R 型(粗糙型)2、
6、细菌表面的特异抗原减少甚至完全消失,对动物毒力减弱或消失。R 型布氏菌在生理盐水或正常人血清内能发生自家凝集现象,称此为热凝集试验七、布氏菌在外界环境中的生存能力:对物理因子的抵抗力:布氏菌对热的抵抗力较弱,6030 分钟,7010 分钟,100即刻死亡。而对冷的抵抗力则较强,在低温下能生存 20-35 天。在抗热方面,对湿热抵抗力较强,例如在 100湿热时各型菌不超过 4 分钟,而干热中为 5-9 分钟。对化学因素的抵抗力:布氏菌对常用各种消毒剂一一般都很敏感。在实验条件下,以普通浓度的消毒剂,就可以使布氏菌很快死亡。在自然条件下的生存力:布氏菌在水、土、粪、鲜乳中的生存时间相差悬殊。在其他
7、各种物品中的生存时间还是比较恒定的。在各种食品中能生存两个月左右,乳类可长达 18 个月,在非食品中最长 45 个月左右。总之布氏菌无论在食品或非食品中生存的时间还是较长的,而这些东西都能成为传播因子。八、毒力与毒素:布氏菌的侵袭力很强,甚至可通过无明显破损的皮肤侵入机体,羊型菌对人的毒力最强, 猪型菌次之,牛型菌较弱。毒素:内毒素对动物有中等毒性。布氏菌无外毒素。九、致病性三型菌对人均有致病能力。其中羊型、猪型感染性和致病性较强牛型的感染性和致病性则较小。十、抗原性布氏菌有二种不同的菌体表面抗原,称为“M”与“A”,各型布氏菌都含有这二种抗原,并无本质上的区别,只是量的比例不同,羊型布氏菌含
8、 M 抗原最多,含 A 抗原最少,牛型布氏菌含 A 最多 ,含 M 抗原最少,猪型菌介于二者之间,其比例如下:羊型菌:M:A=20:1牛型菌:M:A=1:20猪型菌:M:A=1:2第二节布氏菌实验室诊断技术布病的实验室检查技术主要包括两个方面的内容,即血清学检查和病原学检查,目前在基层主要应用的是血清学检测技术,病原学检测由于实验室生物安全以及技术条件的限制,基层一般不具备检测条件。本节主要就常用的血清学检测方法和一般的病原学检测技术作以介绍,重点掌握虎红平板凝集试验、试管凝集试验。一、血清学检查方法(-)虎红平板凝集反应(RBPT)筛查试验1、原理:该试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于
9、所用的抗原是酸化性带色抗原(pH3.6-3.9),与被检血清作用时能抑制血清中 IgM 类抗体凝集活性, 所以提高了该项反应的特异性。2、设备及器材:虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片 0.lml 吸管或微量加样器3、试验方法:虎红平板抗原在使用前充全摇匀。取 0.03m1(相当于一滴 )被检血清，滴于脱脂玻片上,然后取等量的布鲁氏菌虎红平板试验抗原,充分混匀,在 4 分钟内判定结果,任何程度的凝集均为阳性, 完全不凝集为阴性4、评价(1)此法简便、快速、易掌握,适于基层大面积检疫 ,不宜做最后诊断的依据。(2)此法有一定敏感性。(3)因为在酸性环境下 IgM 活性受抑制 ,该法主要是检
10、查查IgG 类抗体, 所以特异性较好 ,与试管凝集反应、补体结合反应、2-ME 反应和 coombs 反应有较高的吻合率。(4)新采集的血样立即离心的血清容易出现假阳性。故应采用然析出的血清。(二 )标准试管凝集反应(SAT ）又叫莱特氐反应,是诊断布病实验室诊断中最广泛应用的一种方法。本方法具有较高的特异性和可靠性。1、实验原理:布氏菌感染机体后,由于布氏菌抗原刺激 ,机体免疫系统产生针对布氏菌抗原的特异性的抗体。存在于血清中的这种特异性抗体在一定反应条件下,可以与布氏菌抗原产生特异性的结合,形成抗原抗体复合物,产生可见的凝集反应。本试验就是利用这种抗原-抗体的特异性凝集原理,用已知的布氏菌
11、抗原来检测机体是否存在布氏菌的抗体。人感染了布氏菌后,在临床症状尚未出现以前,血内抗体就已经出现,但效价不高 (一般低于 1:100,到发热出现后,凝集效价就很快上升,甚至于最初十几天反应就可以达到最高峰。在疾病的第一年内直可以维持这种效价,后来才显著下降。以后试管凝集反应或者变为阴性或者在低效价的范围内(1:100.续一个较长的时间(45 年或更久) 有时传染的后期可以见到效价增高,这是由于传染过程活动化(复发) 的缘故,因此 ,试管凝集反应在早期或再发的布病诊断上,有它特殊的价值2、设备及试剂试管凝集抗原:由生物制品厂提供。使用时须充分混匀,长霉或出现凝集块的抗原不能应用0.9%生理盐水、
12、1ml 吸管、试管、温箱和试管架等。3、操作方法（1 ）采样:取静脉血 3ml，待血清自然析出后进行稀释。（2 ）稀释血清每份被检血清用 6 只反应管，在试管架排成一列，并在第一管上标明血清编号或患者姓名。于第一管加生理盐水 2.4ml,第 2、3 、 4、5 管各加盐水 0.5ml,第6 管不加。取被检血清 0.1ml,加入第一管,混合均匀后吸取 1m 加入第 6管供作血清对照。再从第一管吸出 0.5m 弃去。再吸出0.5m1 加入第二管 ,。充分混合均匀后, 吸取 0.5ml 加入第三管,以此类推 ,自第五管吸取 0.5ml 后弃去。这样前 5 管均为0.5ml,其血清稀释度则为1:25、
13、1:50、1:100 、1:200、1:400。(2)稀释抗原: 将试管凝集抗原 1:10 稀释(3)加入 1:10 稀释抗原 :给前五管各加 05ml,则前五管最后的血清稀释度分别为 1:50、1:100、1:200、1:400、1:800。(4)对照管的制作: 每次试验须作三种对照阴性血清对照 :血清稀释和加抗原与受检血清相同。阳性血清对照:阳性血清对照须稀释原有稀释度,加抗原方法与受检血清相同抗原对照试验中所用的稀释抗原 05m)(05m生理盐水(5)判定比浊管的制备:每次试验须配制比浊管作为判定的依据。配制的方法是:取本次试验用的抗原 1:10 稀释液适量, 加入等量的生理盐水作倍比稀
14、释至 1:20,然后按下表配制比浊管。全部试验管、对照管及比浊管充分振荡后置 37温箱中 20-22 小时，取出后放室温 2 小时后，以比浊管为标准判定结果。根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反程度(滴度或效价,特4、结果判定:一定要与比浊管对比判定+:液体完全透明,菌体完全被凝集呈伞状沉于管底,震荡时,大别是 50%(+)对判定结果关系+:液体几乎完全透明, 菌体大部分被凝集沉于管底,震荡时沉淀物呈片状、块状或粒状。:液呈中等度混浊, 但管底有明显的凝集沉淀,震荡时有块状变化如上+:液体甚混浊,管底有肉眼可见的少量凝集,振荡时有轻微的或粒状物:液体均匀混浊, 管底无凝集 ,振荡时呈均匀一致的
15、混浊。块状或粒状物。确定每份血清的滴度时,应以出现+以上凝集现象的最高血清稀释度为血清滴度(效价) 。如果最高稀释度为 +,则应多加几个试管,提高稀释度, 再做一次,直到最后一管为阴性, 以出现+的最高血清稀释度为最终结果。诊断标准人的诊断标准:1:100+以上为阳性。1:50+为可疑羊的诊断标准:1:50+为阳性5 为可疑6、影响试管凝集反应的因素:亦原不不混纸灯不()血清内混有红血球或溶血、腐败等现象时,可出现非特异性凝集(2)血清放置过久或在防腐剂中保存时间超过 15 天或血清灭活超过 56时,均可使血清效价显著下降。(3)有些疾病, 如伤寒、斑疹伤寒、活动期结核、土拉伦菌病马鼻疽、百日
16、咳等疾病以及变形杆菌 0X19 可与布氏菌产生交叉凝集反应(4)以变异的布氏菌作诊断液,可出现自家凝集。(5)抗原的浓度也有很大的影响,浓者反应弱 ,淡者反应强。盐水的浓淡也影响结果,如羊布病的试管凝集反应使用 10%的盐水,目的就是为了提高阳性检出率。(6)温度、酸碱度都应适宜,否则也会影响凝集反应(7)前带现象: 抗体效价(浓度) 过高时,由于抗原抗体比例失湖,出现凝集抑制。导致在稀释度高的前几管出现阴性,后边反而出现阻性结果。应该判定为阳性。第七章布病的预防和控防制工作1、必须在各级政府领导下,开展布病防治工作2、从实际出发,制定布病防治规划。布病防治工作认真贯彻预防为主方方针4、加强部
17、门协作,搞好地区联防。5、依靠群众,广泛宣传和发动群众,开展群防群治6、充分发挥专业机构和专业人员的技术指导作用技术措施根据流行过程的三个环节采取相应的措施。目前我省采取的是以畜间免疫为主的“检免处”相结合的综合性防治措施。()控制和消灭传染源: 是目前的主要防治措施。1、家畜检疫:对家畜进行检疫,一方面是为了及时检出患病家畜,査清疫情和程度和分布范围, 掌握其流行规律和特点,并为制定防制对策提供依据。另一方面是为了杜绝传染源的输出和输入,保护清净地区不受感染, 达到有计划地全面防治布病。此外,检疫既是针对传染源的措施之一,又是评价防治效果的重要方法。分为疫区检疫、运输检疫、市场检疫和港口检疫
18、等2、家畜免疫:采用猪型 2 号苗大面积灌服免疫,可以建立免疫屏障,有效防止布病在畜间的流行蔓延3、处杀病畜:对检疫中检出的阳性畜予以处杀, 消灭传染源。般认为,由于经济的原因, 仅在感染动物普遍在 2%或以下的地区,应用检疫和屠宰的措施是适当的。而且要严格掌握宰杀对象。(二 )切断传播途径传播途径是流行过程的一个重要环节,切断传播途径就可使流行过程不可能继续进行。布氏菌可通过各种传播因子,如流产胎儿,乳、肉、皮毛、粪、尿、水、空气、土壤等,侵入人和家畜体内,引起感染和发病。因此认真做好对上述各种传播因素的消毒,加强个人防护,1、防止经皮肤和粘膜感染:接羔助产时注意个人防护, 流产物是预防布病
19、的重要措施之及死胎要深埋处理,环境严格消毒。接触皮毛的人也要做好个人防护,对皮毛用适当的方法进行消毒处理;防止经粘膜感染主要是指经性器官粘膜,在急性期或亚急性期应禁止性活动,防止经粘膜交叉感染2、防止经消化道感染:按预防肠道传染病的要求搞好饮食、饮水卫生。不清洁或被布氏菌污染的食物,饭前洗手,不喝生水。注意奶及奶制品的消毒。加工家畜肉类时,注意生熟分开,切肉刀具及案板及时洗净, 避免污染其他食物和炊具。切忌吃生的或半生的家畜肉。注意保护水源,防止受到污染。3、防止经呼吸道感染:从事布鲁氏菌研究的人员, 在工作时应按规定着装,特别是应戴好口罩, 防止经呼吸道感染发病。做好工作现场的消毒。管好粪便
20、,家畜的圈舍应经常起晒,进行消毒和清扫。4、减少人与牲畜的接触:人畜分开居住, 不要用人用的盆或碗喂养家畜,小孩不要和羊羔玩耍。5、布病的易感高危人群应做好个人防护。(三 )人群预防接种用布氏菌苗给人群预防接种,可使机体的免疫水平及抗病能力有定的提高,是保护易感人群免受感染的方法之一。但是,保护力有限,持续时间较短。1、接种对象:群养羊户、皮毛乳肉加工行业人员以及受布最遥种次病感染危胁的易感人不应多次接种,以防机体致敏。另外接种对象应仅限于有布病疫情发生地区和受感染威胁的易感人群。接种前应进行布氏菌素皮内变态试验或血清学检查,皮变阳性者或血清学检查阳性者不予接种2、接种时间:农牧区人群的预防接
21、种应在家畜产仔旺季前24 个月进行;其他职业人群,宜在生产旺季前 2-3 个月接种;临时进入布病疫区工作或从事受布病感染威胁的工作时,可随接种。接种方法分为皮上划痕和滴鼻接种法,各地根据具体情况任选一种使用的菌苗为 104M 冻干活菌苗,为乳白色疏松体。1)皮上划痕接种法:(1)器材:2m1 注射器、针头、皮肤划痕针 (民用缝衣针两根,将针尖磨钝,用胶布粘住, 两针相距 0.3-0.5cm)、镊子、锯安瓿用小锯、酒精棉球。所有用具应事先消毒。(2)使用前仔细检查安瓿,安瓿不应有裂纹菌苗按所注明的人份量加入灭菌生理盐水溶解。每支安瓿10 人份, 加入生理盐水 05ml,溶解后之菌苗应在 3 小时
22、内用完(3)接种方法: 上臂外侧上部皮上划痕接种。在接种处用酒精消毒,待干后 ,滴上菌苗 (每人份 005ml),再用消毒针划痕。10岁以下儿童菌苗滴在一处划一个井字,10 岁以上初种者菌苗滴两在处划两个井字,间隔 2-3cm,划痕长度 1-1.5cm,应以划破表皮微见血迹为宜。划痕处用针涂压 10 余次,使菌液充分进入痕内。接种后局部应裸露至少 5 分钟。(4)禁忌症:患严重疾病、免疫缺陷症者及使用免疫抑制剂治疗者。妊娠期,前 6 个月授乳期。(5)反应: 接种后局部反应轻微,少数人划痕处会出现轻度浸润 ,般不影响劳动。个别人体温稍有增高。如因使用途径错误,出现类似急性布氏菌病症状者,要按急
23、性布氏菌病进行彻底治疗。(6)注意事项菌苗仅供皮上划痕用,严禁注射安瓿有裂纹,标签不清, 出现非菌苗固有颜色,制品过期失效, 稀释后发现存有异物或不溶解的絮状物时,菌苗不应使用,应予以销毁严禁将菌苗稀释后保存。打开安瓿后未用完的干燥的或稀释后在 4 至 5 小时内未用完的菌苗应煮沸或用消毒液处理销毁,不得倒在地上发生意外事故及时上报菌苗稀释方法同上。用安上 6 号去尖针头的 5m 注射器吸取菌液 ,(2)滴鼻接种法每人每个鼻孔滴入两滴相当于 0.05m1),滴后吸气一次。禁忌症、反应及注意事项同上。近年来由于生物制品企业走向市场化,布氏菌苗需求量小,所以人用布氏菌苗生产供应成本加大,加之布氏菌苗保护力有限,副反应比较大 ,操作程序复杂 ,无论从成本还是从效益上,接种布氏菌苗预防布病的措施已经不适应防制工作。所以停止了布氏菌苗的接种工作。
