1、单击 此 处编辑 母版 标题样 式单击 此 处编辑 母版副 标题样 式* 1 小麦萌发前后淀粉酶活性的比较一、实验目的及要求：1，学习分光光度法测定酶活力的原理与方法；2，了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、实验的基本原理淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，在某些植物如小麦、大麦的休眠种子中只含有 淀粉酶， -淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦芽糖是还原性糖，能使 3， 5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基 5-硝基水杨酸，后者在 500 nm处有
2、最大吸光度，而进行定量测定。三、主要仪器设备及实验耗材：小麦种子、可见分光光度计、离心机、恒温水浴，研钵等。标准麦芽糖、 0.2%淀粉、 3， 5-二硝基水杨酸溶液、 1%氯化钠溶液、 0.02 mol/L 磷酸缓冲液、石英沙。四、实验内容或步骤：1麦芽糖标准曲线制作 取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按表 35 1 加入试剂： 表 1 制作麦芽糖标准曲线配方表试剂 管号1 2 3 4 5 6 7麦芽糖标准液（ ml） 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水（ ml） 2.01.81.61.20.80.4 03,5-二硝基水杨酸 2 2 2 2 2 2 2摇匀摇匀，置于沸水
3、浴中煮沸 5 min 。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至 20 m L 。以 1 号管作为空白调零点，在 500 nm 波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、萌发小麦种子浸泡小麦种子 24h ，入 25C恒温箱或在室温下发芽。3、提取小麦萌发前后的酶液（ 1）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗 10株，入研钵加石英砂 0.2 g， 1 % NaCl 3 ml，研磨成匀浆， 0-4 C下放置 20 min。 离心， 2000 r/min 10 min .测定上清酶液的总体积。（ 2）种子酶的提取：取干燥种子 10粒作对照，操作方法同上。 4、二硝基水杨酸法测定酶活力量
4、取待测酶液 1 ml， pH6.9的 0.02mol/L磷酸缓冲液稀释 10倍，作为酶活力测定物。取 6根试管按下表加各物质： 表 2 试剂 试管编号1/2（种子酶稀释液） 3/4（幼苗酶稀释液） 5/6（空白管） V（ 0.2 淀粉溶液） /ml 1 1 1V(蒸馏水 )/ml - - 0.5V(稀释酶液 )/ml 0.5 0.5 -混匀各管， 40 C恒温水浴，水解 3 min， 加入 1% 3， 5-二硝基水杨酸溶液 2 ml。入沸水浴，准确加热 5 min，迅速冷却至室温，加水稀释至 20 ml，混匀。 测定各管的 A500nm值、计算酶活力单位总酶活力单位 = (C酶 C 0) n V酶式中： C酶 为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度（mg/ml）；C0为表 2中空白管的麦芽糖浓度；n为酶溶液稀释的倍数；V酶 为提取酶液的总体积（ ml）。设在 40 C、 pH 6.9的条件下， 3 min内水解淀粉释放 1 mg麦芽糖所需要的酶量为 1个活力单位（ U）。五、思考题1、为什么提取酶液的过程应该在 0-4 下进行？测定淀粉酶活性时为什么要在 40 条件下水解淀粉？2、小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？
