1、几种茶多酚测定方法的比较摘要 用几种不同的测定方法，对不同种茶叶原料提取物中多酚的测定结果进行了比较，提出了几种测定方法之间的差异和规律。关键词 茶多酚、酒石酸铁法、FolinDenis、HPLC 法茶多酚是茶叶中的主要有效成分，茶中多酚含量的多少，可以反映出茶叶品质的优劣。测定茶多酚的方法很多，但我们所常用的方法有酒石酸铁法和菲林试剂法，特别是前者，以其快速简便，容易掌握重现性好而经常使用。但是在实验过程中，笔者发现，茶的品种不同，用不同的方法测定出来的多酚结果也不同，并且从大量的分析数据中找出了其中的规律。1 实验材料与方法1.1 仪器与材料高效液相色谱（美国 Beckman 公司）754
2、 紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）金农公司生产的速溶绿茶、儿茶素1.2 实验方法1.2.1 酒石酸铁法 见 GB 8313871.2.2 FolinDenis 法1.2.2.1 原理：Folin 试剂能氧化茶多酚和其它还原性物质并显色。21.2.2.2 试剂：15%碳酸钠 菲林试剂1.2.2.3 实验步骤：（1） 绘制标准曲线：吸取标准单宁酸溶液 010ml 一组，分别置于 100ml 容量瓶中。各加水 75ml，Folin 试剂 5ml，15碳酸钠溶液 10ml，加水定容至刻度，混匀。在 30条件下，恒温反应30min，于波长 760nm 处测定吸光度，计算出线性回归方程。（2） 样品的
3、测定：精确称取 40.00120.00mg（视样品的含量多少而定） ，加水溶解后定容至 100ml。取 1ml 试液置于 100ml 容量瓶中，以下步骤同标准曲线绘制。测定吸光度。利用回归方程计算含量。（3） 实验注意事项：实验过程中温度和时间对其结果有较大影响，必须恒温、定时。1.2.3 儿茶素的 HPLC 分析样品制备：a: 精确称取 30mg 儿茶素样品于 50ml 容量瓶中，用水稀释，超声 5min，冷却定容；b: 0.45um 超滤膜处理后待分析；1.2.4 仪器：美国 Beckman 公司生产的 HPLC，126 泵，168 检测器1.2.5 色谱条件：色谱柱 ODS4.6 200
4、mm，5um 波长：278cm流速：1.3ml/min 柱温：30 进样量：10ul流动相：A 水；B N，N二甲基甲酰胺 :甲醇 :醋酸40:2:13梯度洗脱：流动相 时 间（min）0.0 5.0 10 24A() 81.0 79.5 73.5 81.0B() 19.0 20.5 26.5 19.02实验结果与讨论21 按不同的大小叶种配比所生产的速溶绿茶及茶多酚测定结果见表一。表一：不同品种各种拼配比例的茶多酚含量品种拼配比例 多酚含量（）桃源小叶种:云南大叶种 酒石酸铁法 菲林试剂法100 : 0 58.98 49.1090 : 10 58.80 49.9075 : 25 58.03
5、52.3450 : 50 57.21 55.880 : 100 55.09 58.72益阳秀眉小叶种:云南大叶种 酒石酸铁法 菲林试剂法100 : 0 56.41 43.2580 : 20 55.29 45.0860 : 40 54.35 47.8340 : 60 53.16 49.3120 : 80 52.30 51.7840 : 100 51.14 53.35从表一的实验数据不难看出，随着大叶种原料比例的增加，菲林试剂法测定的多酚数据逐渐增加，而酒石酸法测定得的多酚数据则逐渐减少。反之亦然。那么为什么会出现这种规律呢？我们可从以下大小叶种原料生产的绿茶及儿茶素的 HPLC 图谱中儿茶素组成
6、的差异来说明问题。见图 1-4 及表二。22 绿茶、儿茶素的 HPLC 图谱小叶种绿茶图谱 图 1 大叶种绿茶图谱 图 25小叶种儿茶素图谱 图 3 大叶种儿茶素图谱 图 46表二：不同产品儿茶素组分的含量品 种 组分（）EGC DLC EC EGCG GCG ECG小叶绿茶 5.0239 1.1545 3.6002 11.3448 0.5101 5.1203大叶绿茶 4.0791 4.9437 7.3012 7.3609 0.0608 8.5609小叶儿茶素 8.7189 1.4567 4.2405 43.4092 1.9472 10.2369大叶儿茶素 5.1811 7.7993 13.7
7、446 23.1019 0.4284 25.3957比较图 1、图 2、 图 3、图 4 及表二的分析数据可以看出，在小叶种绿茶和儿茶素中，EGCG、EGC 这些能反映小叶种特征的儿茶素组分的含量高于大叶种，特别是 EGCG 的含量。而在大叶种中DLC，EC、ECG 这些能反映大叶种特征的儿茶素组分的含量则高于小叶种，而酒石酸铁法和菲林试剂法由于与各儿茶素组分的显色机7理不同，从而与不同的儿茶素组分反应的显色能力强弱也各不相同。酒石酸铁法的试剂对 EGCG、EGC 的显色较敏感，而菲林试剂则对DLC、EC、ECG 的显色较敏感。由此可见要比较一个茶叶品种或茶叶制品的品质如何，不能单评某一种实验
8、取得的结果，而必须进行全面的分析。为了更全面、更合理的了解一个茶叶品种和制品的品质，笔者认为任何茶叶原料或茶制品都应该用两种方法进行分析，我们可以从以下分析数据来加以说明。见表三。表三：不同产品的多酚含量茶制品的多酚含量（）样 品 编 号 茶 叶 原 料酒石酸铁法 菲林试剂法1 峨山大叶 55.09 58.722 广西大叶 51.14 52.353 益阳小叶 58.98 49.104 桃江小叶 53.36 50.08从表三中的数据可见，1、2 号样虽然都是大叶原料所生产的产品，但是它的内含物仍然有差异，1 号样的多酚含量不仅高于 2 号样，而且 1 号样的大叶种特征更加明显。3、4 号样虽同为
9、小叶种，但它们的多酚含量差异明显，3 号样不仅多酚高于 4 号样，而且小叶种的特征也更明显。这些产品的内含物之所以有差异，笔者认为，在同样的提取工艺条件下，原料是最主要、最直接的影响因素。因8此，只有对产品全面的分析，才能使我们在生产上能根据客户或市场对产品的要求，有的放矢的投放原料，或在生产过程中调整原料的配比，合理的搭配，生产出不仅成本低，而且多酚含量达标、儿茶素组分配比合理的产品，以满足市场的需要。23 回收率实验在样品中加入一定量的单宁酸标样，按测定茶多酚的酒石酸铁法和菲林试剂法进行测定，重复 5 次，计算平均回收率，结果如表四。表四：回收率酒石酸铁法样品 被测组分实验证明，用本文的方法进行测定，回收率满意9参考文献：茶叶品质理化分析 上海科学技术出版社茶叶生物化学 农业出版社茶叶化学工程学 西南师范大学出版社
