1、土壤有效磷的测定,0.5mol/L NaHCO3 浸提钼锑抗分光光度法（Olsen法）崔玉玲 黑龙江省农垦科学院测试中心 0454-8359872 13644545158,目录,一、概述 二、 Olsen方法原理 三、主要仪器设备 四、试剂 五、操作步骤 六、结果计算 七、质量控制,一、概述,土壤有效磷是土壤肥力的重要指标之一，表明土壤的供磷水平，可以作为判断施用磷肥的指标，为推荐施肥提供依据。,一、概述,土壤有效磷含量只是一个相对的指标，同一土壤用不同方法测得的有效磷量可以相差很多，即使用同一浸提剂，由于浸提条件如土液比、温度、时间、振荡方法不同其结果有很大差异，在相同条件下测得的结果才有相
2、互比较的意义。,1、浸提方法,浸提剂的选择主要根据各种土壤的性质而定。土壤有效磷测定采用的提取剂种类很多，目前应用的主要测定方法有三种：Olsen法、 Bray法和Mehlich3法。,1、浸提方法,在目前使用较广的几种浸提剂中，一般认为以 0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl (Bray法)浸提剂比较适合于风化程度较高的酸性土壤；,1、浸提方法,石灰性土壤通常用 0.5 mol/L NaHCO3 (pH值为8.5)( Olsen法)浸提比较理想；对于中性和酸性水稻土NaHCO3法也有应用。,1、浸提方法,Mehlich3法是近年来研究较多并逐步推广应用的一种测试方法，其
3、优点主要是一次浸提可测定土壤中大部分有效养分，便于大批量分析；缺点是应用时间不长，尚未建立土壤的丰缺指标体系，需要进行试验确定。,2、指标体系,即使简单地以“高”、“中”、“低”来分档,不同提取方法的结果分起档来其数值相差很远;而且同一提取方法的结果对不同土壤,不同作物还应该有不同的分档标准。,2、指标体系,单位：mg/kg,2、指标体系,因此，在报告有效磷结果时必须同时说明所用的测定方法。,3、Olsen法的影响因素,浸提时间： Olsen法连续提取测定土壤有效磷的结果表明，0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出的土壤有效磷量随振荡时间而增加。 将各次连续测定值与各参比标准进行相关性分析
4、，结果表明Olsen法对土壤有效磷进行一次提取已经能够反应土壤的有效磷水平，无需进行多次提取。,3、Olsen法的影响因素,温度：Olsen法不同温度浸提土壤有效磷的试验结果表明：提取温度对Olsen法测定土壤有效磷的结果影响极大，在1030范围内，有效磷测定值随温度升高而增加，温度每升高1所增加的磷的平均值为0.44mgkg，且随着土壤含磷量不同，其影响程度也不同。,二、 Olsen方法原理,石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，提取液中的 HCO3- 可和土壤溶液中的 Ca2+ 生成 CaCO3 沉淀，从而抑制了 Ca2+
5、的活度而使某些活性较大的 CaP (磷酸钙盐) 被提取出来。,二、方法原理,酸性土壤中的磷主要是以FeP （磷酸铁盐）、Al-P （磷酸铝盐）的形态存在，碳酸盐的碱溶液在酸性土壤中因 pH 提高而使 Fe-P 、Al-P 水解而部分被提取，也降低了铝和铁离子的活性，在浸提液中由于 Ca 、 Fe 、 Al 浓度较低，不会产生磷的次生沉淀。,二、方法原理,此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换。 因此NaHCO3不仅适用于石灰性土壤，也适应于中性和酸性水稻土壤中速效磷的提取。,三、主要仪器设备,1、可控温的往复振荡机： 本法浸提温度对测定结果影响
6、很大。因此必须严格控制浸提时的温度条件，本方法要求是251 ，用恒温振荡机进行提取。,三、主要仪器设备,2、分光光度计 波长为880nm或700nm 波长不能达到880nm时可用700nm，浸出液有颜色时可用活性炭脱色。,物质颜色和吸收光颜色的关系 吸 收 光 物质颜色 颜 色 波 长(nm) 黄 绿 紫 400 450 黄 蓝 450 480 橙 绿 蓝 480 490 红 蓝 绿 490 500 紫 红 绿 500 560 紫 黄 绿 560 580 蓝 黄 580 600 绿 蓝 绿 600 650 蓝 绿 红 650 750,三、主要仪器设备,3、酸度计 可准确调节pH到8.5,四、试
7、剂,1、 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 称取42.0g NaHCO3 于800mL水中，稀释定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液调节浸提液的pH至8.5（用pH计测定） 。贮存于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞紧。此溶液曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，使用前应检查pH是否改变并校准。,四、试剂,2、无磷活性炭 活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有无磷存在。如含磷较多，须先用HCl（1+1）浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤，用蒸馏水冲冼多次至无 Cl-为止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止，烘干备用。 如
8、含磷较少，则直接用NaHCO3 处理即可。,四、试剂,3、钼锑抗贮备液 称取酒石酸锑钾0.3g，溶于100毫升水中，制成0.3的溶液。 () 称取10.0g 钼酸铵溶于约60 300mL 水中，冷却。 () 另取181mL 浓硫酸缓缓注入约800mL水中，搅匀冷却 。 (),四、试剂,将稀硫酸溶液()注入钼酸铵溶液()中，边加边搅动；再将100mL 0.3的酒石酸锑钾溶液() 加入到钼酸铵液中，最后用水稀释至2L，贮于棕色瓶中，此贮备液钼酸铵浓度为0.5%，硫酸浓度为3.26mol/L (1/2H2SO4)。,四、试剂,4、钼锑抗显色剂称取0.50g 抗坏血酸(左旋)溶于100mL钼锑抗贮备液
9、中。 (有效期24小时，如贮于2-8冰箱中，则有效期7天。),四、试剂,5、磷标准贮备溶液（100 mg/L） 称取0.4394g KH2PO4 (105烘2小时) 溶于约200mL 水中，加入5mL 浓H2SO4，转移入1L 容量瓶中，用水定容，可较长时间保存。,四、试剂,6、磷标准工作溶液（5 mg/L ）取磷标准贮备溶液用0.5 mol/L NaHCO3准确稀释20倍即为磷标准工作液，此液不宜久存。,五、操作步骤,1、称取通过1mm (18号筛)筛子的风干土样2.50g（精确0.01g）于干燥的200或250mL塑料瓶中，加入0.5 mol/L NaHCO3溶液50mL，塞紧瓶塞，在振荡
10、器上振荡30min(速率为每分钟180次， 251 )，,然后立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于干燥的三角瓶中，最初78ml滤液弃去，同时做空白试验。,常用标准筛对照数据表,五、操作步骤,2、如发现滤液的颜色较深，应向土壤悬浊液中加入约0.3-0.5g 无磷活性炭粉，摇匀后立即过滤，也可在振荡前加入活性炭。 活性炭和滤纸是否含磷可进行空白试验来验证。,五、操作步骤,3、吸取滤液10.00mL于三角瓶中（含磷量高时少吸，同时应补加0.5 mol/L NaHCO3溶液至10.00mL）（注1），然后加入钼锑抗显色剂5.00mL，慢慢摇动，使CO2逸出，再准确加入10.00mL水，充分摇匀，逐尽CO2，
11、在室温高于15 处放置30min后，进行比色。,五、操作步骤,4、以空白溶液为参比液，使用1cm比色皿，在分光光度计上，用880nm或700nm波长进行比色，测读吸光度。,五、操作步骤,注1: 如果吸取滤液10mL于50mL容量瓶中，加水和钼锑抗试剂后，会产生大量的CO2气体，由于容量瓶瓶口小， CO2气体不易逸出，在摇匀过程中，常造成试液外溢，导致测定误差。为了克服这个缺点，可以准确加入提取液、水和钼锑抗试剂于三角瓶中，混匀，显色。,五、操作步骤,5、标准曲线绘制： (1) 分别准确吸取5mg/L磷标准使用溶液0、2.50、5.00、10.00、15.00、20.00、25.00mL于50m
12、L容量瓶中，用0.5 mol/L NaHCO3溶液定容。此标准系列中磷的浓度依次为0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mg/L 。,五、操作步骤,(2) 吸取标准系列溶液各10.00mL于三角瓶中，同样品处理显色（五、3），测读吸光度。 (3) 以上述标准系列的磷浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标绘制曲线。,六、结果计算,1、样品的吸取体积为10mL时：有效P (mg/kg)=C20C从标准曲线求得查得浓 度， mg/L；20浸提时的液土比50mL/2.50 g。,六、结果计算,2、样品的吸取体积小于10mL时：有效P (mg/kg)=C2010/VC从标准曲线求得查得浓度，mg/L；20浸提时的液土比， 50mL/2.50 g ；V吸取体积，mL。,七、质量控制,质量控制的基本要素： 1、人员的技术能力； 2、合适的仪器设备； 3、好的实验室和好的测量操 作；,七、质量控制,4、合适的测量方法、标准的操作规程； 5、合格的试剂及原材料； 6、正确的采样及样品处理； 7、合乎要求的原始记录和数据处理；,谢谢大家！,
