1、【实验研究】菜豆食物中毒的实验室诊断方法探讨丁连学1,徐修臻2 ,于珍2,肖永太2(1.山东省胶南市卫生局卫生监督所,山东胶南 266400; 2.山东省胶南市疾病预防控制中心,山东胶南 266400)中图分类号:R155.54 文献标识码:C 文章编号:1672-9153(2006)06-0692-02摘要:目的探讨菜豆食物中毒的实验室诊断方法。方法通过1起22例病人典型的菜豆食物中毒案例调查和实验室检测,在实验室诊断处理方面将3种方法结合起来,并进行分析比较,皂甙快速定性检测使用豆浆生熟度快速检测试剂盒,先作快速定性检测;同时对皂甙定性检测还使用了化学试验法:泡沫试验、三氯醋酸反应法;检测
2、红细胞凝集素使用的鸡血球红细胞凝集素试验法,进一步检测样品中含红细胞凝集素的情况。结果采集的11份样品的皂甙定性全部是阳性;鸡红细胞凝集素试验凝集效价:呕吐物的为132,剩余菜豆为164,病人血清为116。结论对于菜豆食物中毒的实验室诊断,首先选生熟豆浆快速检测试剂盒作皂甙快速检测,作为菜豆食物中毒快速筛查;再选用鸡血球凝集试验,最后使用皂甙化学试验法进一步证实,为确诊菜豆食物中毒提供可靠依据。关键词:菜豆;食物中毒;皂甙;红细胞凝集素Study on Method of Food Poisoning Brought by Phaseolus Vulgaris/DINGLian-xue,XU
3、Xiu-zhen,YU Zhen,et al.(JiaonanInstitution of Hygiene Supervision,Jiaonan,266400,Shandong,China)Abstract:ObjectiveTo explore the laboratory diagnosis method of food poisoning brought by Phaseolus vulgaris. MethodsForone food poisoning involving 22 cases,brought by Phaseolus vulgaris,we made the diag
4、nosis by 3 methods,which were saponin qualitative quick test, saponin qualitative chemical test including foam method, trichloroacetic acidmethod,and observing the coagulation of red cells by chicken red cells coagulation test. Results11 cases were saponinpositive.The titer of chicken red cells coag
5、ulation test was that:132 for the vomit,164 for remained phaseolus vul-garis,16 for cases serum. ConclusionFor thelaboratory diagnosis method of food poisoning brought by Phaseolus vul-garis, we should madesaponin qualitativequick test through bean juicequick test kit,first,then made thechicken red
6、cellscoagulation test,last did the confirmation test throhgh saponin chemical method.Key words:Phaseolus vulgaris;Food poisoning;Saponin;Red cells coagulation菜豆在烹调加工时加热不透,食后往往引起食物中毒。菜豆中毒在一年四季均可发生,但多发生在秋季,致病物质可能与红细胞凝集素和皂甙有关1 。目前对菜豆中毒诊断的实验室检验尚无统一的国家标准。2005年6月17日胶南市某学校发生食物中毒,中毒22人,经病例个案调查22人吃的炒菜豆有豆性味,该
7、校伙房厨师也证实炒菜豆时火太急,没有反复炒熟炒透,结合现场流行病学及病人的临床表现怀疑菜豆为可疑食物,为了确定这起食物中毒是否由菜豆所致,我们采集病人呕吐物、血清样品和病人当餐剩余的炒豆角样品作了皂甙快速定性检测,并做红细胞凝集试验进一步证实。1 材料与方法1.1 材料 在胶南市人民医院采集首例病人及其他病人的呕吐物共5份,静脉血4份,病人当餐剩余的炒豆角样品2份。呕吐物及剩余炒豆角样品搅碎后用纱布过滤,滤液备用,做红细胞凝集试验时滤液pH调至7.0(防止过滤液中的胃酸引起溶血反应),血样离心后分离血清备用;豆浆生熟度快速检测试剂盒(定性检测样品是否含有皂甙毒素),北京中德大地食品安全技术开发
8、公司研制,江西中德大地生物工程有限公司生产,货号:L017020,在有效期内使用。1.2 皂甙定性检测方法1.2.1 皂甙快速定性试剂盒法 使用“豆浆生熟度快速检测试剂盒”快速定性检测样品中含有是否含有皂甙,依据江西中德大地生物工程有限公司生产的“豆浆生熟度快速检测试剂盒说明书”测定步骤要求,分别取呕吐物、剩余炒菜豆样品过滤液、血清样品1 ml,放于检测管中,加入豆浆生熟度快速检测试剂盒试剂A液3滴,盖上盖后摇匀,使试剂充分溶解,置40 恒温箱保温20 min;再加入试剂B液5滴,摇匀,如出现淡黄色至砖红色可判断为皂甙阳性,其颜色越深说明检测样品中含皂甙量越高。取阴性对照生理盐水1 ml,重复
9、如上操作。1.2.2 化学试验法 依据文献2进行。692 预防医学论坛 2006年11月第12卷第6期 Prev Med TribVol.12,No.6,Nov.2006 1.2.2.1 检材处理(铅盐法) 将呕吐物、剩余炒菜豆的过滤液、血清样品,加入过量10%中性醋酸铅溶液,酸性皂甙首先析出,过滤,于滤液中加入10%碱性醋酸铅溶液,这时中性皂甙沉淀析出,收集沉淀,分别用乙醇淋洗,加稀硫酸溶解铅,水液蒸干,残渣用乙醇溶解,加入一定量乙醚,供检验用。1.2.2.2 泡沫试验法 取样品残渣少许,加入水溶解,用玻璃棒搅拌,产生皂性泡沫。加5%盐酸调溶液至酸性(pH7),泡沫永不消退为皂甙阳性,否则为
10、阴性。1.2.2.3 三氯醋酸反应法 将样品过滤液分别溶于氯仿,加三氯醋酸试剂,出现红色反应即为皂甙阳性,否则为阴性,对照为生理盐水。1.3 红细胞凝集试验 依据文献3进行。1.3.1 配制红细胞保存液(阿氏液) 取葡萄糖2.05g、枸橼酸钠0.8 g、枸橼酸0.055 g、氯化钠0.42 g,加蒸馏水至100ml,高压(0.075 MPa)灭菌15min后至4冰箱内备用。1.3.2 鸡红血球的制备 抽取健康鸡翅下静脉血5ml,加到20 ml阿氏液中,用0.85%生理盐水将鸡血球反复冲洗3遍,用0.85%生理盐水配成1%的鸡血球悬液备用。1.3.3 检测方法 取50孔有机玻璃板2块,用棉球擦拭
11、干净,标记好稀释倍数(12、141256)。在第1孔加入样品处理液或血清0.5 ml,从第2孔起加入0.85%生理盐水各0.5ml至第9孔,第9孔为阴性对照;往第2孔加入原样品处理液0.5 ml,轻轻吹吸3次吸出0.5 ml转入第3孔,进行递增稀释至第8孔,最后弃去0.5 ml;从第1孔开始加入鸡血球0.5 ml至第9孔,轻轻震荡后,将反应板置37恒温箱放置4 h,根据凝集程度用“ ”、“ ”、“ ”、“+”、“-”记录结果,观察结果以“ ”为该样品的凝集效价。2 结果皂甙快速检测11份样品均为阳性(呕吐物1、5号为砖红色,皂甙阳性,2、3、4号为淡黄色,皂甙为阳性;剩余的炒菜豆2份样品1、2
12、号为砖红色,皂甙为阳性;血清14号均为淡黄色,皂甙阳性);11份样品的鸡红细胞凝集素效价:呕吐物的凝集效价132,剩余炒菜豆的凝集效价为164,血清的凝集效价为116;泡沫试验5份呕吐物均为阳性,2份剩余炒菜豆为阳性,4份血清全部为阳性;11份样品全部作化学鉴别试验(三氯醋酸反应)全部为皂甙阳性。试验结果见表1。表1 病人样品几种方法检测结果样品名称样品编号皂甙快速检测鸡红细胞凝集素效价(G=112)泡沫试验鉴别试验(三氯酸反应)呕吐物 1号 阳性 132 阳性 阳性2号 阳性 14 阳性 阳性3号 阳性 18 阳性 阳性4号 阳性 116 阳性 阳性5号 阳性 132 阳性 阳性菜豆 1号
13、阳性 164 阳性 阳性2号 阳性 164 阳性 阳性血清 1号 阳性 116 阳性 阳性2号 阳性 18 阳性 阳性3号 阳性 18 阳性 阳性4号 阳性 18 阳性 阳性生理盐水 (对照) 阴性 0 阴性 阴性3 讨论本次食物中毒的原因很明确,主要是当晚就餐时食用了未炒熟的菜豆,其菜豆中的皂甙和血凝素未得到彻底加热分解而引起中毒。因此,今后卫生监督和健康教育要加强这方面知识的宣传和培训,特别是集体食堂是最容易发生菜豆食物中毒地方,因此食用菜豆时一定要彻底加热后再食用,避免发生类似食物中毒事件。目前对菜豆中毒的实验室诊断多采用红细胞凝集试验法。本次试验结果说明,使用豆浆生熟度快速检测试剂盒,
14、可以快速定性检测皂甙,操作简单,判断结果时间短,结果易于观察,对菜豆食物中毒能快速作出初步诊断,是定性检查皂甙的快速有效的检测方法。化学检测法定性检测皂甙,操作步骤繁琐,耗时较长,但有助于进一步明确诊断。检测红细胞凝集素是经常采用的方法,本次使用的微量鸡血球红细胞凝集素试验法,主要是进一步检测样品中含红细胞凝集素的情况,为证实菜豆中毒提供可靠依据。通过这次菜豆中毒的实验室诊断处理,提示今后调查处理类似中毒事件可以作皂甙快速定性检测,同时进一步作红细胞凝集试验做进一步证实,节省诊断时间,增加对病人的抢救机会,省时省力而且成本较低,易于推广。参考文献:1 刘贵刚.食源性疾病预防与控制 M.济南:济南出版社,2005.208.2 河北省预防医学会理化检验专业委员会.化学性食物中毒 M.河北:河北人民出版社,2004.236.3 高丹,赵常智,安静,等.一起由豆角引起的食物中毒 J.中国卫生检验杂志,2000,10(5):589.(收稿日期:2006-05-09 本文编辑:刘兰珍)693 预防医学论坛 2006年11月第12卷第6期 Prev Med Trib Vol.12,No.6,Nov.2006
