1、第八章 分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学测 试 题一、名词解释1分子杂交2Southern blotting3Northern blotting4Western blotting 5dot blotting6DNA 芯片技术7PCR8功能性克隆9转基因技术二、填空题1Southern blotting 用于研究 、Northern blotting 用于研究 ，Western blotting 用于研究 。2PCR 的基本反应步骤包括 、 和 三步。3. 在 PCR 反应体系中，除了 DNA 模板外，还需加入 、 、 和 。4Sange 法测序的基本步骤包括 、 、 和 。5目前
2、克隆致病相关基因的主要策略有 、 、 。6血友病第因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是 ，而 DMD 致病基因的克隆所采用的克隆策略是 。三、选择题A 型题1. 经电泳分离后将 RNA 转移到硝酸纤维素(NC)膜上的技术是：ASouthern blotting BNorthern blottingCWestern blotting Ddot blottingEin situ hybridization2. 不经电泳分离直接将样品点在 NC 膜上的技术是ASouthern blotting BNorthern blottingCWestern blotting DDot blotting E
3、in situ hybridization3. 经电泳分离后将蛋白质转移到 NC 膜上的技术是ASouthern blotting B.Northern blottingCWestern blotting Ddot blottingEin situ hybridization4. 经电泳后将 DNA 转移至 NC 膜上的技术是ASouthern blotting BNorthern blottingCWestern blotting DEastern blottingEin situ hybridization5. PCR 的特点不包括A时间短，只需数小时 B扩增产物量大C. 只需微量模板 D
4、用途非常广泛E. 底物必须标记6用于 PCR 的 DNA 聚合酶必须A耐热 B耐高压 C. 耐酸 D耐碱 E. 耐低温7PCR 反应过程中，模板 DNA 变性所需温度一般是A95 C B 85 C C75 C D65 C E 55 C8PCR 反应过程中，退火温度一般是A72 C B 85 C C75 C D65 C E 55 C9. PCR 反应过程中，引物延伸所需温度一般是A95 C B. 82 C C72 C D62 C E 55 C10PCR 反应体系不包括A. 模板 DNA BTaqDNA 聚合酶C. 上、下游特异性引物 A、B DddNTP E含 Mg2+的缓冲液11PCR 的循环
5、次数一般为A510 次 B1015 次 C1520 次 D2025 次 E2530 次12PCR 反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺少A模板 B引物 C. DNA 聚合酶 DddNTP E缓冲液13Sanger 法测序不需要AKlenow 小片段 B引物 C. dNTP D标记 dNTP EddNTP14Sanger 法测序的基本步骤不包括A标记模板 B模板一引物杂交 C电泳D引物的延长与合成阻断 E放射自显影直读图15Sanger 法测序的四个反应体系中应分别加入不同的A模板 B引物 C 标记 dNTP DDNA 聚合酶 E. ddNTP16人类基因组计划的主要研究内容不包括A遗传
6、图分析 B物理图分析 C转录图分析D. 序列图分析 E蛋白质功能分析171996 年，英国科学家克隆的 Dolly 羊所采用的技术是A转基因技术 B核转移技术 C基因剔除技术D肽核酸技术 E. 反义核酸技术18MaxamGilbert 法与 Sanger 法测序的共同点是均需A. 引物 BKlenow 大片段 C. ddNTPD. 化学裂解试剂 E电泳后放射自显影读图19Sanger 法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列为A待测 DNA5到 3的碱基序列B待测 DNA3到 5的碱基序列C待测 DNA 互补链 3到 5的碱基序列D待测 DNA 互补链 5到 3的碱基序列E引物 5到 3的碱
7、基序列20PCR 实验的特异性主要取决于：ADNA 聚合酶的种类 B. 反应体系中模板 DNA 的量C引物序列的结沟和长度 D四种 dNTP 的浓度E. 循环周期的次数21基因剔除(knock out)的方法主要被用来研究A基因的结构 B基因的功能 C. 基因的表达 D基因的调控 E基因的突变22. 反义核酸作用主要是A封闭 DNA B封闭 RNA C降解 DNAD降解 DNA E封闭核糖体的功能23有关 Sanger 法测序的叙述，不正确的是A只需标记一种 dNTPB. 一般应去除 DNA 聚合酶 I 的 5到 3外切酶活性C与 dNTP 相比阻断剂应尽可能的多D反应时间不必太长E. 应采用
8、超薄高压电泳B 型题(15)ANorthern blotting Bdot blotting CWestern blottingD. Southern blotting E. in situ hybridizanon1.用限制性内切酶酶切后进行电泳分离，再将 DNA 转移到 NC 膜上杂交的技术是2电泳分离后将 RNA 转移至 NC 膜上杂交的技术是3电泳分离后将蛋白质转移至 NC 膜上，与标记蛋白杂交的技术是4不经电泳直接将样品点在 NC 膜上杂交的技术是5. 在组织切片上直接与探针杂交的技术是(68)A95C B 85 C C 72C D65C E55 C 6PCR 变性温度一般是7PCR
9、 退火温度一般是8PCR 引物延伸温度一般是(912)ATaq DNA 聚合酶 B. 反转录酶 CK1cnow 大片段 D末端核苷酸转移酶 EKlenow 小片段9同聚物加尾连接需要10PCR 需要11Sanger 法测序需要12由 mRNA 合成 cDNA 需要X 型题1.PCR 反应体系中含有A特异性引物 BKlenow 大片段 C.dNTP DddNTP E 35S-dATP2. PCR 技术的反应步骤包括：A退火 B. 复性 C. 变性 D引物延伸 E引物终止3DNA 链末端合成终止法反应体系中含有A引物 BdNTP CddNTPD 35S-dATP ETaqDNA 聚合酶4DNA 链
10、末端合成终止法反应体系中不含有A模板 BTaqDNA 聚合酶 CddNTPD化学裂解试剂 E 35S-dATP5PCR 技术可以用于A病原微生物的微量检测 B突变基因的筛选C. 法医学鉴定 DDNA 序列分析E克隆目的基因6克隆致病相关基因的策略包括A定位克隆 B非定位候选克隆 C功能克隆D定位候选克隆 E随机克隆四、问答题1何谓 PCR?简述其基本原理、反应体系和主要步骤。2简述 Sanger 法测序的基本原理及大体过程。3. 如果你有翻译活性很高的人酪氨酸酶的 mRNA，请设计两个实验以鉴定某个克隆的基因片段是否为酪氨酸酶的基因?参 考 答 案一、名词解释1在 DNA 复性时，如把不同 D
11、NA 分子或 DNA 与 RNA 分子放在同一溶液中，只要这些核酸单链分子之间存在一定程度的碱基配对关系，就可在不同分子间形成杂化双链，这种现象称核酸分子杂交。2将限制性内切酶酶切电泳后的 DNA 转移至 NC 膜上，再与核酸探针杂交的技术。3将电泳后的 RNA 转移至 NC 膜上，再与核酸探针杂交的技术。4将聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质转移至 NC 膜上，再与另一标记蛋白质分子(如抗体)杂交的技术。5不经电泳分离直接将样品点在 NC 膜上用于杂交的技术。6指采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的 DNA 探针固化于支持物表面上，产生二维 DNA 探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测
12、杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断。由于常用硅芯片作为支持物，且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术，故称基因芯片技术。7是一种快速简便的体外 DNA 扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的 DNA 放大上百万倍。8指从对一种致病基因的功能的了解出发克隆该致病基因的策略。血友病的第因子基因是以此策略克隆成功的。9指将目的基因整合人受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导人动物子宫，使之发育成个体，该个体能把目的基因继续传给子代，该技术称转基因技术。目的基因的受体动物就是转基因动物。二、填空题16DNA RNA 蛋白质 17引物 TaqDNA 聚合酶 dNTP 含 Mg2的缓冲
13、液 1S变性 退火 延伸 1Q模板一引物杂交 引物延长与合成阻断 电泳 放射自显影直读图 20遗传图分 析 物理图分析 转录图分析 序列图分析 资料的储存和利用 21功能基因组学 蛋白质组学 22功能性克隆 定位克隆 候选基因克隆 23功能性克隆 定位克隆三、选择题A 型题1101120213031404150560B 型题110112021303140X 型题110112021303140四、问答题1是一种快速简便的体外 DNA 扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的 DNA 放大百万倍。其基本工作原理是：以拟扩增的 DNA 分子为模板，以一对分别与模板 5，末端和 3末端相互补的寡核苷酸片
14、段为引物，在 DNA 聚合酶的作用下，按半保留复制的机制沿模板链延伸直至完成新的 DNA 合成，重复这一过程，使目的 DNA 片段得到大量扩增。其反应体系包括：模板 DNA、特异性引物、耐热 DNA 聚合酶、dNTP 以及含 Mg2+的缓冲液。PCR 反应步骤为(1)变性：95，15s ；(2)退火：Tm-5C，一般为 55，30s ；(3)延伸：72C L 5rain。此三步为一个循环，一般进行 2530 次循环。最后一次循环的延伸反应时间应适当延长(5 min)，以获得较大量的 DNA 产物。2双脱氧末端终止法测序由 Sanger 创立，是常用方法之一。其基本原理是利用 DNA聚合酶的聚合
15、反应，在试管内复制待测 DNA 的随机长度的互补链。反应设 A、T、C、G 体系，其中分别加入适当比例的相应 ddNTP，由于 ddNTP 缺少 3，一 OH，不能形成磷酸二酯键，而使合成反应终止，致使 4 管中所合成的产物为随机长度的终止于相应 ddNTP 的 DNA 片段。从总体看，4 管中所有产物是一系列长度只差 1 个核苷酸的聚合链，经超薄高压电泳可将其一一分辨。 大体过程为： (1)单链模板的制备；可据 M13 噬菌体的特性，将目的基因用基因工程的方法插入 M13 复制型双链 DNA 中，培养扩增后，提取单链 M13 噬菌体作模板 (2)模板一引物杂交：引物与待测 DNA 的 3端上
16、游杂交。并沿 5，一 3，方向延长，所合成新链即待测 DNA 的互补链。(3)引物的延长与合成阻断：杂交液分 4 管，各管分别加入Klenow 大片段、4 种 dNTP(其中一种被标记)、一种 ddNTP 和缓冲液，保温使引物延长并随机阻断。(4)电泳：四泳道超薄聚丙烯酰胺一尿素凝胶高压电泳。(5)放射自显影和读图：将凝胶板干燥后，与 X 线片夹在一起，使 X 线片在电泳带相应位置曝光、显影、定影后直读图像。自终端至始点读出新合成链的 5一 3序列，其互补链即为待测 DNA 的碱基序列。3(1)以酪氨酸酶 RNA 为模板合成的 P 标记的 cDNA 为探针，对克隆片段进行Southern 杂交
17、。(2)克隆片段与酪氨酸酶 mRNA 杂交，mRNA 翻译活性丧失，该克隆片段为酪氨酸酶的基因。基因组学与医学测 试 题一、名词解释1人类基因组计划2. 结构基因组学3功能基因组学4比较基因组学5基因病二、填空题1Southern blotting 用于研究一一， 、Northern blotting 用于研究一一，Western blotting 用于研究一一。2PCR 的基本反应步骤包括一、和三步。3. 在 PCR 反应体系中，除了 DNA 模板外，还需加入、和。4Sange 法测序的基本步骤包括、和。5人类基因组计划的主要研究内容包括 、 、 、 、 。6目前克隆致病相关基因的主要策略有
18、、。7血友病第因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是，而 DMD 致病基因的克隆所采用的克隆策略是。三、选择题A 型题1人类基因组计划的主要研究内容不包括A遗传图分析 B物理图分析 C转录图分析D. 序列图分析 E蛋白质功能分析21996 年，英国科学家克隆的 Dolly 羊所采用的技术是A转基因技术 B核转移技术 C基因剔除技术D肽核酸技术 E. 反义核酸技术3PCR 实验的特异性主要取决于：ADNA 聚合酶的种类 B. 反应体系中模板 DNA 的量C引物序列的结沟和长度 D四种 dNTP 的浓度E. 循环周期的次数X 型题1有关人类基因组计划(HGP)的描述，错误的是A最初由美国人提出B主要任务是完成人的 23 对染色体碱基测序C. 因真正编码蛋白质的序列只占 1-5，所以 HGP 计划的实际意义不大D我国未参与该计划E该计划至今未有进展2HGP 的主要研究内容有A绘制遗传图 B绘制物理图 C完成转录图D. 完成序列图 E.资料的储存和利用四、问答题1HGP 和 PHGP 有和重大意义?2HGP 的主要研究内容是什么？3. 如何进行疾病相关基因的克隆与鉴定?参 考 答 案一、名词解释1 二、填空题1遗传图分析 物理图分析 转录图分析 序列图分析 资料的储存和利用 2功能基因组学 蛋白质组学 3.功能性克隆 定位克隆 候选基因克隆 三、选择题四、问答题1 23
