1、,一、被子植物花粉粒的形成,1、雄蕊的结构,雄蕊：,2、花药的结构,花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞,3、被子植物的花粉发育,花粉粒的形成,经历时期：,四分体时期、单核期、双核期,两个精子和一个营养核的基因型相同,二、产生花粉植株的两条途径,不同植物的诱导成功率很不相同。,选择植物的种类,三、影响花药培养的因素,1、材料的选择,花药培养时间,就同一种植物来说，亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。花期早时期的花药比后期的更容易产生花粉植物。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，能提高花粉的诱导
2、成功率。,一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期。,选择合适的花粉发育时期,并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。,为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾（完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒）。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。,单核期以前的花药，质地幼嫩，极易破碎； 单核期之后的花药，花瓣已有些松动，给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。,其它时期选择的缺点：,2、培养基：,花药培养所采用的培养基因植
3、物的不同而有所变化：小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基。,3、其他因素亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响。,四、实验操作,（一）材料的选取,某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。,最常用的方法有醋酸洋红法,1、方法,醋酸洋红法染色机理,醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。,将体积分数45的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50，过滤即可。,醋酸洋红的配置,2、醋酸洋红法,将花药放在载玻片上，加
4、一滴1的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。,染色操作,3、焙花青铬钒法,将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀,卡诺氏固定液的配制方法,花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。,将5g铬明矾K2SO4Cr2(SO4)24H2O加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。,焙花青铬钒溶液的配制方法,染色操作,（二）材料的消毒,1、酒精处理,花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 无菌水清洗 无菌吸水纸吸干花蕾表
5、面的水分,2、消毒液处理, 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中24分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 无菌水冲洗35次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。,在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药,要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。,1、剥取花药,勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织,2、接种,（三）接种和培养,培养条件：温度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,3、培养,培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织，则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。,注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。,在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）,4、鉴定和筛选,5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：,
