1、免疫规划所实验室监测情况 及生物安全,河南省疾控中心免疫规划所实验室 徐瑾,实验室监测内容提要,AFP 麻疹 流感 流脑 肝炎 综合监测 标本采集与运送,河南省脊灰实验室,成立于1966年 1992年加入国家脊灰实验室网络 通过每年国家脊灰实验室组织的职能考核(盲样) 1997、1999、2000、2002、2004、2007和2009年通过世界卫生组织现场认证 目前成员3人,AFP实验室监测,历年标本检测情况,河南省2010年AFP监测情况,报告AFP病例612例，非AFP病例9例 15岁以下儿童报告发病率2.47/10万 采集AFP标本600例 接触者病例8例 外省病例4例,2010年合格
2、标本采集情况,共采集600例AFP标本，单份便9例，采双份便591例，其中合格标本501例，不合格标本90例,2010年实验室监测指标,7天内上细胞分离培养率（%） 96.5 粪便标本28天内实验结果报告率（%） 94.4 粪便标本中PV 分离阳性率（%） 2.7 粪便标本中NPEV分离阳性率（%） 21 PV分离物14天内送国家脊灰实验室率（%） 100 PV分离定型结果与国家脊灰实验室符合率（%） 100,河南省脊灰实验室历年数据比较,2010年PV阳性分离物月份分布图,2010年PV型别分布图,非脊灰病毒,近年来非脊灰样病变增多 2010年共分离到51例71株 地区上无聚集性分布,脊灰抗
3、体水平监测结果,脊灰抗体水平结果分析,当连续多年无病例发生时, 人群中抗体的获得主要是依靠疫苗的免疫接种, 且抗体阳性率及几何平均滴度（GMT ）取决于相应疫苗的免疫接种率及接种质量。我省健康人群I,II,III 型脊灰中和抗体阳性率均保持在较高水平,这是不断提高脊灰疫苗常规接种率和连续多年开展强化免疫的成效。尤其是5 6岁以下各年龄组的脊灰中和抗体阳性率与GMT 处于较高水平, 这与免疫程序有关( 1 岁内开 展3 次脊灰疫苗基础免疫, 18 月龄、4 足岁开展2 次加强免疫),免疫成功率监测结果,免疫成功率结果分析,安阳县33对血清样品，免疫前抗体GMT（I、II、III）分别为17.04
4、、22.87、14.40；免疫后抗体GMT（I、II、III）分别为302.84、358.26、74.14。 原阳县30对血清样品，免疫前抗体GMT（I、II、III）分别为9.62、14.25、6.06；免疫后抗体GMT（I、II、III）分别为82.52、125.08、18.38。,OPV监测结果,OPV效价监测分析,根据国内配比3价脊髓灰质炎糖丸疫苗出厂合格总剂量为5.7 logTCID50 /粒 ，以上监测单位的OPV效价均达标。,讨论,PV分离率较08年以前有大幅度降低，并且在所有16例AFP病例脊灰病毒分离物中，31.25%(5例)是两种以上型别疫苗株病毒的混合物，且集中在冬季强化
5、免疫活动以后，很可能是在AFP病例发病后给病人口服OPV再采集粪便标本，这样会导致人为提高了PV分离率，加大了实验室的工作量,并给临床确诊带来一定的困难。为提高采集粪便标本的质量必须进一步加强基层工作人员的培训工作，增强AFP 病例报告意识和主动监测能力，增强及时发现AFP病例并采集、送检合格粪便标本的意识，杜绝在麻痹后采便前给病人服用脊灰疫苗的做法，提高合格粪便标本的采集率及送检率，确保实验室监测的准确性和可靠性。,Isolation Rate of poliovirus and NPEV from AFP cases during 2000 2011.4 2000-2011年4月AFP病例
6、中PV和NPEV的分离率,21,2010年分离株和疫苗株相比VP1编码区核苷酸变异数,22,Type I,Type II,Type III,AFP病例监测目的,及时发现输入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒传播，保持无脊灰状态。 及时发现脊灰疫苗衍生病毒（以下简称VDPV）及其循环，采取措施控制病毒进一步传播。 评价免疫工作质量，发现薄弱环节。 监测脊灰病毒变异情况，为调整疫苗免疫策略提供依据。,监测系统及时性评价指标,2010年国家级监测系统所有指标均达到卫生部和WHO的要求 AFP病例监测报告（包括“零”病例报告）及时率80%；AFP病例报告后48小时内调查及时率80%；AFP病例14天内双份
7、合格大便标本采集率80%；AFP病例大便标本7天内送达省级脊灰实验室及时率80%；省级脊灰实验室28天内完成AFP病例大便病毒分离及时率80%；阳性分离物在14天内送国家脊灰实验室的及时率80%；国家脊灰实验室7天内完成省级送达的阳性分离物型内鉴别的及时率80%；需进行核酸序列分析的阳性分离物应在完成病毒型内鉴别后14天完成序列检测；AFP病例麻痹60天内完成病毒型内鉴别及时率80%；AFP病例麻痹75天内随访及时率80%；,1959-1961，发明了口服脊灰活疫苗。,Albert B. Sabin, M.D. 发明了口服减毒活疫苗。,脊灰病毒分类,“型”指脊灰毒株的血清型，通过血清抗体中和试
8、验方法定型 目前，根据与同型Sabin株VP1区核苷酸序列差异，将脊灰病毒划分为三类： Sabin-like(SL)：与Sabin株VP1区核苷酸序列相比，变异率1% 脊灰疫苗高变异株病毒：病毒与原始疫苗株相比，衣壳蛋白1区（VP1区）核苷酸序列变异介于0.5%1%之间（有58个碱基发生变异）。 VDPVs：与原始疫苗株病毒相比，VP1区核苷酸序列变异介于1%15%。 脊灰野病毒：与原始疫苗株病毒相比，VP1区全基因序列变异超过15%，或者是既往国内外流行过或与既往国内外流行过的脊灰病毒高度相似的病毒。 -脊髓灰质炎野病毒输入性疫情和疫苗衍生病毒相关事件应急预案（试行）,脊灰病毒引起的病例分类
9、,VAPP VDPVs病例：从AFP病例粪便、咽部或脑脊液、脊髓组织标本分离到VDPVs，经省级专家诊断小组鉴定，临床不能排除脊灰诊断的病例。 cVDPVs：由相关的脊灰疫苗衍生病毒引起的2例或以上脊灰疫苗衍生病毒病例的事件。 脊灰野病毒病例：粪便、咽部或脑脊液、脊髓组织标本脊灰野病毒检测阳性，临床诊断符合脊灰的病例。脊灰野病毒由境外传入者，为输入性脊灰野病毒病例。,循环的VDPVs(cVDPVs) 指在人与人之间传播着的VDPVs； 免疫缺陷VDPVs(iVDPVs) 患者长期向外环境中排出VDPVs，分离于患有免疫缺陷的慢性排毒者； 未归类VDPVs（aVDPVs） 指分离自非免疫缺陷患者
10、或与爆发无关的单个VDPV，或从环境中分离到的VDPV，这些VDPV暂时无法归类到第1、2类VDPV中。,已经证实有3种VDPVs,所谓VDPV，是指那些有明确证据表明，循环的时间显著超过OPV在服苗者体内正常繁殖的时间的脊灰病毒。I型OPV-最长14天II型OPV-最长72天III型OPV-最长72天 VDPV只能依赖于VP1区核苷酸序列测定来确定（所以划分标准有些武断）； 对于所有来源于OPV的脊灰病毒，都必须进行VDPV的筛查，并做进一步的生物学特征鉴定。,29,尼日利亚和刚果发生II型cVDPVs,循环病毒的数量(百分比),与Sabin2相比，VP1区核苷酸 变异的个数,30,II型疫
11、苗株病毒数次被发现与cVDPV相关，但是不满足现行的cVDPV的标准； 一些国家或地区（AFP病例或接触者）中分离到的脊灰疫苗变异株VP1区核苷酸变异在0.5%-1%之间，但在时间或空间上呈现聚集性，VP1区核苷酸序列显示这些病毒是单一来源进化的，有明显的相关性，即病毒学证据提示这些病毒发生了循环。,31,WHO建议更改II型VDPV的定义,与Sabin2株相比，VP1区核苷酸序列变异个数大于等于6，应该被报告为VDPV； 对cVDPV或iVDPV的评估和控制措施不变； 实验室检测方法不变； I型和III型VDPV 的定义不变。,一变三不变,32,The Sequencing Result o
12、f 2010 by NPL,1996-2010年中国II型脊灰病毒的序列分析,病毒分离株的数量,与Sabin2相比，VP1区核苷酸 变异的个数,34,WHO在对众多国家和地区对II型脊灰疫苗病毒VP1区核苷酸变异在0.5%-1%的毒株循环进行了深入研究和总结，发现II型更容易发生循环，建议更改II型VDPV定义标准，为早期发现和阻断II型病毒的循环争取宝贵的时间。 对脊灰消灭计划的影响：对实验室检测和报告没有影响；对报告病例（未引起循环）的后续追踪调查影响没有明显提升。,35,2007年脊髓灰质炎病毒VP1区核苷酸序列分析,接触者标本的采集,（1）AFP病例接触者 （2）VDPV病例、输入性脊
13、灰野病毒病例接触者 （3）高危AFP病例和聚集性临床符合病例,接触者标本的采集- AFP病例接触者,以下情况应采集AFP病例的5名接触者（原则上5 岁以下）大便标本。 1）每年AFP病例大便标本数少于150份的省； 2）未采集到合格大便标本的AFP病例； 3）根据临床或流行病学资料高度怀疑为脊灰的AFP病例； 4）死亡的AFP病例。,原始标本运送,（1）标本采集后要在7天内送达省级脊灰实验室，标本应冷藏运送，在送达省脊灰实验室时带冰且包装完整。标本的运送要符合国家对标本运送的有关要求。 （2）采集的标本应有完整的登记资料，一并送达省脊灰实验室。标本标签登记要清楚，标本送检表项目要填写完整 。,
14、AFP粪便标本采集注意事项-1,采集标本需使用统一配发的一次性无菌采样管。不要使用玻璃容器、药瓶、塑料袋、纸盒等其它容器，这些容器容易泄漏造成生物安全事故。请各地市及时检查采样管数量，不足时及时补充。 采样管需标识清楚。采样管上需标识病人姓名，采样时间，第一份或第二份。 采集标本量需足够且适量。大便标本需采集5-8克，采样管半管即够，不要装满，防止冷冻后体积膨胀溢出。,AFP粪便标本采集注意事项-2,带冰运送和保存。脊灰病毒耐冷怕热，为提高病毒检出率，采集标本后需及时带冰送至省疾控中心脊灰实验室，如不能及时运送，需保存在-20条件下。运送时必须用冷藏包或保温筒/杯运送，建议使用非水性保冷袋，防
15、止冰块融化后污染标本，请根据各地市路程远近及所需时间带足够量冰袋（块），如使用冰块，请将冰块用自封袋（双层）密闭包装，标本也需单独密封包装（推荐使用自封袋）。,AFP粪便标本采集注意事项-3,发病后不要服苗。确需服苗的采集标本后再服苗。 采双份粪便标本。双份便采集间隔时间为24-48小时内，即超过24小时，不超过48小时。 接触者标本需及时采集并送至河南省疾病预防控制中心。如可能请同时采集，不能同时采集的请及时通知病例所在地疾控中心。,麻疹实验室监测,我们需要实验室网络来做麻疹监测工作吗？Do we need lab to do the surveillance work?,Measles c
16、ase definition 麻疹病例的临床诊断 Case with fever of 38OC, maculopapular rash, with either cough, coryza or conjunctivitis or any case which a physician thinks is measles 发热38OC，出现斑丘疹和至少伴有以下一种症状：咳嗽，鼻炎或结膜炎或医务人员疑为麻疹,Echoviruses Echo病毒,Measles麻疹,Parvovirus B19微小病毒B19,Dengue登革热,HHV-6,Rubella风疹,Others 其它,实验室在麻疹诊断
17、和鉴别诊断中的作用消除阶段越显重要 The important role of laboratory in measles diagnosis and differentiate diagnosis,在麻疹控制和消除中扮演重要的角色 可疑麻疹病例血清学诊断 麻疹疫苗相关病例的诊断 血清流行病学研究 麻疹疫苗质量和免疫效果的评定 通过分子流行病学研究，鉴定病毒的传播来源，传播路线，是本土，还是输入 实验室网络在麻疹强化控制和消除中提供有效的科学支持,实验室网络职能,中国麻疹实验室网络的建立2001年，在中国卫生部、中国CDC、IVDC、WHO和US-CDC的支持下，建立了中国麻疹实验室网络。中国
18、的麻疹实验室网络覆盖了31个省份（直辖市）、 331个地市。2003年国家麻疹实验室被任命为西太区地区参比实验室。,河南省麻疹实验室及网络的建立,1999年我省开始WHO/CDC协作项目；2000年全省装备市级麻疹实验室,配备实验器材及设备. 2001年全省18市级麻疹实验室监测网络通过省级实验室考核认证，承担起各市麻疹防治的常规运转监测任务。 2002-2007年省级负责对市级麻疹实验室网络进行每年一次的职能考核，公布盲样血清考核及血清复检再证实结果 并颁发合格证书。,31个省级实验室,国家麻疹实验室 WHO西太区参比实验室,331个地市级实验室,我国三级麻疹监测实验室网络框架,执行WHO西
19、太去麻疹风疹参比实验室职能和国家麻疹实验室职能,实验室网络在麻疹强化控制和消除中扮演重要的角色,部分县级疾控机构也开展了血清学检测工作,我国各级麻疹网络实验室各司其职，为消除麻疹提供实验室技术平台和科学保障,50% 麻疹散发疑似病例为实验室证实的,2010年疑似麻疹 散发病例的血清学证实,数据来源： 麻疹监测信息报告管理系统,全国麻疹监测方案要求： 麻疹散发疑似病例血标本采集率应80%（79.62%）,2010年疑似麻疹 爆发病例的血清学证实,全国麻疹监测方案要求： 麻疹爆发疫情血清学确诊率应90%采集病原学标本的爆发疫情应80%,数据来源： 麻疹监测信息报告管理系统,麻疹监测方案的制定 标准
20、操作规程 生物安全规范 各级实验室职能 血清和病毒库 信息数据库 技术储备,系统运作,执行WHO西太去麻疹风疹参比实验室职能和国家麻疹实验室职能,全国20062012年消除麻疹行动计划 要求,当以省为单位麻疹发病率较高时，有条件可以开展麻疹疑似病例监测，重点进行麻疹暴发疫情的监测。当发生麻疹暴发疫情时，应按相关要求采集患者出疹早期鼻咽拭子、尿液或血液等标本，及时送省级麻疹实验室进行病毒分离。,麻疹实验室网络的运转,-麻疹可疑病例的血清学诊断 -麻疹的血清流行病学 -省级麻疹病毒学监测情况 -省级对地市级实验室网络质量控制和考核认证 -国家实验室对省级实验室的血清再证实情况,麻疹控制的不同阶段
21、对实验室血清学诊断和病毒监测的要求,背景麻疹流行地区的麻疹基因型分布,C2,B3,D2,Rota, P. A. 2003. Update on the global distribution of genotypes of wild type measles viruses. J Infect Dis 187 Suppl 1:S270-6.,河南省麻疹网络实验室认证或认可情况,2000年、2002年、2004年、2007国家CDC/WHO专家对河南省级实验室及郑州、濮阳、安阳、洛阳等市级麻疹实验室现场进行评审,均顺利通过。 2000年-2006年我省送往国家级麻疹血清标本证实工作,六年中有五年
22、符合率100%. 2001年-2006年接受国家级麻疹盲样考核连续六年成绩均为100分,并发给了证书. 2000-2008 年每年省级对18市级麻疹实验室进行职能考核认证和血清抽检再证实工作,并发放成绩单或合格证书.,麻疹、风疹散发病例IgM检测结果统计,麻疹、风疹散发病例IgM检测结果统计,麻疹、风疹暴发疫情血清学确诊分析,2010年分地区发病数及血清采集情况,麻疹血清学监测标本采集后7日内报告率（%）,0,7,14,21,28,35,42,-7,-14,-21,0,2,4,6,8,10,Rash,Onse 出疹t,Days after rash onset出疹天数,Infection 感染
23、,Relative levels of antibody 相对抗体水平,消除阶段：麻疹病例和接触者的隔离,必要日期: 最后接种日期 出疹日期 出生日期,标本的采集:IgM：单份血清，出疹0-28天 分离: 尿液， N/S，出疹0-5天,麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄,有最近免疫史的IgM阳性可疑病例,麻疹消除阶段-疫苗相关病例会显现出来,疫苗相关病例：容易误诊为麻疹病例，病毒基因序列是金标准,可疑麻疹病例血清学检测策略-强化控制阶段,出疹天内单份血清,可疑麻疹病例 suspected measles cases 麻疹IgM measles阳性positive 阴性negative 证实
24、麻疹confirmed M风疹IgM rubella阳性P 阴性N 证实风疹confirmed R 排除discard,风疹IgM spected Case 可疑病例的血清阳性 阴性证实为风疹麻疹IgM阳性 阴性证实为麻疹 丢弃,可疑麻疹病例血清学检测策略-在接近或达到麻疹消除阶段：先检测风疹，或同时检测麻疹和风疹,麻疹病毒学监测 1993-2010年麻疹病毒分离株,1993-2010年麻疹病毒学监测结果,自2009年起，连续发现6起麻疹输入事件：1D4，2D9,3D11; 其中D11是我国于2009年首次在全球发现并命名的新基因型，该新基因型的鉴定已经得到了WHO和US CDC的认可； 该新
25、基因型麻疹病毒于2009年12月引起了我国云南孟连县的麻疹爆发，流行病学上证实是从缅甸输入的，由于缅甸所在的东南亚区尚未开展麻疹病毒的监测工作，D11新基因型麻疹病毒的首次发现对于WHO东南亚区及其相邻的我国所属的西太区的麻疹病毒的监测工作具有非常重要的意义。,A-VL,A-VL,麻疹病毒学监测的意义 通过鉴定病毒的分子特征对流行病学方法进行补充,特别是无流行病学 资料时. 确认/鉴别病毒的来源（野毒的基因型来源，本土或输入； 疫苗病例） 确定病毒的传播途径 提供评估控制策略效果的方法 辅助分析不寻常的或严重的病例，例如SSPE,MIE,CRS。 评估病毒的传播模式、为阻断病毒传播提供科学依据
26、 提供评估控制策略效果的有效指标。 帮助建立诊断方法 帮助抗病毒制剂的研制（中和抗体） 建立麻疹毒株库及基因数据库 发展疫苗（筛选毒株，和中和位点）,充分的技术储备和人力资源参与 对中国疫苗全基因组的序列测定和全球所有麻疹疫苗序列的对比分析，迅速平息了有关“中国疫苗被外国插入不明基因片段的“的谎言。 参加卫生部组织的现场技术指导和督导，提供技术支撑。 及时对XX省 “疑为麻疹疫苗异常反应死亡” 病例的病因学进行了快速鉴定，证实为EV71引起，为疫苗顺利完成接种计划提供了科学保障。 成功应对和阻断了”国外输入D11病毒基因型“带来的挑战 提出需要关注麻疹疫苗相关病例的诊断和鉴别诊断,应对消除麻疹
27、，免疫一亿儿童带来的挑战,围绕麻疹消除的指标-在保证监测质量,1.发病率 95% 4. 爆发 80%爆发12月没有本土麻疹病毒株引起的麻疹病例*麻疹疑似病例发病3日内病原学标本（咽拭子）采集率达到60%,实验室质量控制,每年组织省辖市麻疹实验室网络职能考核血清盲样考核（下发麻疹、风疹质控血清）血清抽样复核-共有18家网络实验室参加考核,2009综合监测健康人群麻疹IgG抗体水平,2009综合监测健康人群麻疹IgG抗体水平,2009综合监测麻疹疫苗免疫成功率检测,分年龄健康人群风疹IgG抗体水平,麻疹监测存在问题,可疑麻疹病例报告率和实验室检测率待提高（大于等于2/10万）。 数据库填报不完整，
28、存在缺项漏项。 麻疹疑似病例血标本和咽拭标本采集率、血标本送检及时率、实验室报告及时率有待进一步提高。 麻疹暴发病例均需采集血清标本和咽拭标本,每个散发病例都要采集标本鉴定病毒来源 每次爆发每个可能的传播链都要采集标本，以鉴别是否是同一株病毒在持续传播 各省要提高散发和爆发疫情病原学标本采集率，病毒分离率和基因型别的及时鉴定率 各项指标严格按照麻疹监测方案执行一个要消除的传染病：达到高质量的监测投入经费严重不足！,病毒学监测存在问题,采样及送检要求1,血/血清标本：医疗机构在发现麻疹病例或疑似病例时，应负责采集血标本。基本要求是：采血量为23毫升，无溶血，无污染；标本送检表填写完整；血标本或分
29、离血清（0.5毫升）应放置4冷藏，并立即通知或24小时内送达辖区县级疾病预防控制机构。县级疾病预防控制机构收到标本后，48小时内将血清（冷藏条件下）和标本送检表送至市级麻疹血清学实验室。 鼻咽拭子：在患者出疹早期采集。 采集后4冷藏条件下，48小时送省CDC；如不能及时送检，放- 70保存，一周内尽快安排送检。,采样及送检要求2,鼻咽拭子、尿液或血液等标本：在患者出疹早期采集。 采集后4冷藏条件下，48小时送省CDC；如不能及时送检，放- 70保存，并尽快安排送检。,流感实验室监测,美国CDC通过基因比对分析，宣布病毒来源于猪 MMWR, 21 April 新型重配甲型H1N1流感病毒：含有人
30、流感、猪流感和禽流感病毒基因 Nature, 26 June, Science Express 2009 不是来自中国，不是来源于实验室,甲型H1N1流感病毒,63家网络实验室197家哨点医院,203家网络实验室356家哨点医院,411家网络实验室 556家哨点医院,扩大流感监测网络,2009年5月前,2009年7月,2009年12月后,流感监测方案相关文件,全国流感/人禽流感监测实施方案（20052010年度） 甲型H1N1流感监测方案(第一版) 卫生部关于扩大全国流感监测网络的通知 卫生部办公厅关于印发甲型H1N1流感监测方案（第二版）的通知 卫生部办公厅关于印发全国流感监测方案（2010
31、年版）的通知2010年9月3日 中国疾病预防控制中心关于印发全国流感检测技术指南的通知2011年8月9日,一、2010版监测方案-明确目标,二、2010年版监测方案-监测目的,监测流感活动水平和流行动态； 及时发现流感病毒变异并作出预警； 为全球及我国流感疫苗毒株的预测和推荐提供依据。,三、2010年版方案-监测内容改变,病例定义 监测时间 样本量 标本运送及保存 时限,各级实验室主要工作任务,河南省流感网络实验室监测概况,网络实验室构成 网络实验室流感病毒监测情况 网络实验室流感病毒核酸监测能力考核情况 培训和督导 工作不足 工作要求,河南省流感网络实验室构成,2009年5月以前只有河南省疾
32、控中心流感实验室一家全国流感网络实验室，之后扩大到19家，各地市疾控中心检验室开始开展流感病毒的实验室检测工作。 目前开展病毒分离工作的仅有省中心实验室，各地市均在积极筹备建设病毒分离实验室，濮阳、商丘等地已具有病毒分离能力。,2009-2011河南省流感实验室工作量统计-核酸检测,2010-2011年河南省ILI标本检测情况,2005-2011年省中心流感实验室流感病毒分离情况,2005-2011年省中心流感实验室流感病毒分离情况,河南省流感监测网络ILI标本送检及时性,河南省流感网络实验室检测技术培训班,时间：2010年12月1317日 地点：省中心流感实验室 目的：建立地市级流感病毒分离
33、能力 对象：各地市流感实验室技术骨干 内容：流感病毒的细胞分离技术、鸡胚分离培养技术、流感病毒的血清鉴定技术,培训一,河南省流感网络实验室检测技术手把手培训班,培训二,时间：2010年3月131日 地点：省中心流感实验室 目的：提高地市级流感实验室核酸检测能力 对象：各地市流感实验室技术骨干 内容：流感病毒核酸检测的RT-PCR技术、Real-time PCR技术,流感网络实验室现场督导,2010年12月对新乡、三门峡、信阳、驻马店进行了网络实验室的现场督导 2011年1-8月，对洛阳、濮阳、南阳、鹤壁流感实验室进行了现场督导，指导并交流病毒分离实验室建设经验，争取尽快开展病毒分离工作。,网络
34、实验室流感病毒核酸检测能力考核,2010年9-10月，国家流感中心对全国流感网络实验室进行流感病毒核酸检测能力考核，我省19个网络实验室10个报告结果有误； 2011年1月省CDC转发中国疾控中心考核结果通报，并提出具体整改要求； 2011年4月到5月，由省中心流感实验室制备考核标本，对全省18家流感网络实验室进行盲样考核，16家网络实验室的结果完全正确，平顶山和周口结果有误； 2011年6月通报省内考核结果，督促各地市做好经验总结； 2011年8-9月国家流感中心对全国流感网络实验室进行流感病毒核酸检测能力考核，目前该项工作正在进行中。,存在问题,网络实验室流感核酸检测阳性标本，送省CDC实
35、验室的送检率低。 阳性标本向省CDC送检不及时。 咽拭标本保存不当，影响病毒分离阳性率。 不能鉴别流感病毒亚型，只做A、B型的区分,样本采集、运送及保存要求1,流感病毒核酸检测阳性标本 保存及送检要求2,各地市流感网络实验室收检的咽拭标本在核酸检测实验完毕后，放-70保存。 核酸检测阳性标本送省中心流感实验室进行病毒分离，要求从采样日期到送检日期不得大于14天。 省中心流感实验室分离到的阳性标本需及时送检国家流感中心进行复核，从采集日期到送检日期不得超过一个月。,流脑实验室监测,病原学监测； 耐药监测 免疫水平监测； 健康人群带菌监测；,一、病原学监测-医疗机构内标本采集,医疗机构发现疑似流脑
36、病例时，无论是否使用抗生素治疗，都要尽快采集病人脑脊液、血液、瘀点（斑）组织液标本，标本要尽可能在使用抗生素治疗前采集。 脑脊液：采集1毫升脑脊液，进行涂片检测、培养分离、抗原检测和核酸检测。 血液：抽取病人全血4毫升，其中一部分用于分离血清，-20保存准备检测抗体，其余全血进行病原培养分离、核酸检测。 瘀点（斑）组织液标本：选病人皮肤上的新鲜瘀点（斑），消毒后用针头挑破，挤出组织液，涂片镜检。,病原学监测疾控部门检测1,县级疾病预防控制机构接到医疗机构报告后，当天应到医疗机构收集标本，并尽快将标本送市级疾病预防控制机构进行检测，对于病原和抗原检测阴性的病例要采集恢复期血清以进行血清抗体测定，
37、检测抗体的血清标本应冷藏运送。 部分具备检测能力的县级疾病预防控制机构，可从事相应的病原学和血清学检测工作。已经检测过的标本，报告市级疾病预防控制机构后，直接送省级疾病预防控制机构。 脑膜炎双球菌比较脆弱，采集标本后，在运送样品或培养物时，应保持样品处于2036之间。,病原学监测疾控部门检测2,市级疾病预防控制机构收到病例标本后，进行流脑病原检测；收集到急性期和恢复期血清后，进行血清抗体测定。收到标本7天内完成标本检测，并将检测结果、分离的菌株于48小时内送省级疾病预防控制机构；培养阴性的标本每月汇总送省级疾病预防控制机构。,病原学监测疾控部门检测3,省级疾病预防控制机构收到标本后，应于7天内
38、完成菌株复核鉴定、菌株的耐药性检测，还应对培养阴性标本进行特异性核酸PCR检测。检测完成后，及时将结果反馈市级疾病预防控制机构，并填写菌株登记表，于28天内将菌株送至中国疾病预防控制中心。,病原学监测结果反馈,各级疾病预防控制机构要及时将检测结果填入个案调查表，并录入数据库，通过网络直报。同时及时逐级反馈检测结果，县级疾病预防控制机构收到上级疾病预防控制机构检测结果后，应及时将结果反馈送检的医疗机构。,二、耐药性监测,省级疾病预防控制中心收到病例菌株或密切接触者菌株后7天内应完成耐药性检测，同时将病例菌株提供给省级卫生行政部门指定的三级医院用于耐药性检测，医院收到菌株后7天内应完成耐药性检测。
39、,三、人群流脑抗体水平和带菌率监测1,各省卫生行政部门应根据过去3年流脑平均发病水平、人口、地理分布特点，以及当地疾病预防控制机构工作能力等综合因素，每年在流脑高发县设立至少2个监测点，低发县设至少1个监测点，动态收集相关资料。各省确定监测点后，于6月底前上报中国疾病预防控制中心备案。,人群流脑抗体水平和带菌率监测2,每个监测点分7个年龄组（1岁、12岁、34岁、56岁、714岁、1519岁、20岁），每个年龄组采集至少30人的血清检测抗体水平。 每年9月采血1次，每次采血2毫升，编号登记，进行流脑抗体水平的检测，同时注明采样对象接种流脑疫苗时间。,人群流脑抗体水平和带菌率监测3,在开展人群抗
40、体水平调查采集血液时，同时采集咽拭子标本，进行流脑菌株分离培养，了解健康人群Nm的带菌率、带菌群型。培养所获得的Nm菌株分纯鉴定合格后，将其纯培养物的菌苔刮到35支灭菌的脱脂牛奶菌种管中，置-20冰箱保存。,人群流脑抗体水平和带菌率监测4,抗体水平与带菌率检测完成后，尽快（最迟于10月底前）将结果电子版上报中国疾病预防控制中心（详见附表2），分离的菌株于检测完成后28天内送中国疾病预防控制中心传染病预防控制所进一步鉴定分析。,表1 河南省2010 年健康人群流脑A 群、C 群抗体阳性率,表2 河南省2010 年健康人群流脑抗体年龄组分布,肝炎实验室监测,HBsAb和HBsAg,2010年病毒性
41、肝炎实验室分别在安阳、漯河、周口、南阳、濮阳、郑州、新乡等6个地区采集了血清标本，采集4个年龄组，分别为2-3岁，5-6岁，13-15岁和18岁以上年龄组,乙肝免疫成功率,Anti-HAV lgG,甲肝的综合监测表明，2-3岁和5-6岁的抗体水平较高，分别为90.22%和90.53%，这与近年甲肝疫苗的接种有直接的关系，13-15岁的抗体水平为69.79%，18岁以上的为94.01%，直接反应了甲肝抗体水平随年龄的增长而增加的趋势。,甲肝免疫成功率,共三个地区：分别为原阳、卧龙和太康，每个地区30份样本。,标本采集及运送的生物安全要求,法律法规,2004年11月12日 国务院总理温家宝签署第4
42、24号国务院令，公布病原微生物实验室生物安全管理条例 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定人间传染的病原微生物名录,采集病原微生物样本应具备的条件,第一，应具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备； 第二，具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员； 第三，具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施； 第四，具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。,一、安全性,执行标本采集的所有步骤都必须戴手套、穿实验服，需要的话，戴防护口罩和防护眼镜； 不能将带针头的注射器直接送检，其内容物应移至无菌管内； 所有的原始标本容器应该是防漏的，在运输中应置于防漏的、可封
43、口的塑料袋中，塑料袋应该有一个独立的、可进行文字书写的部分；,二、 标本的采集与送检应注意的原则,无菌操作 避免污染； 容器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签 应选择感染部位或病变明显的部位采集标本 避免周围组织、器官或分泌物中的杂菌污染,在最佳时间采集适宜标本 怀疑流行性脑膜炎的病人，应选取脑脊液、血液或皮肤上的出血淤斑进行检测；如果进行病毒培养或其抗原检测，应取急性期标本，采集越早，病毒的阳性检出率越高。 尽量在抗生素使用前采集 对于怀疑细菌感染的标本，特别是对抗生素敏感的病原体，如脑膜炎奈瑟菌。病毒分离培养的标本应加入抗生素，以避免在病毒培养过程中的细菌污染。,鼻咽拭子保存管：10 m
44、l或15ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存） 痰液保存管：50 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存） 尸检组织冻存管：50ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈) 记号笔：油性，防水,标本采集器械要求,双份血清 检查特异性抗体IgG时，应采集急性期和恢复期双份血清，只有当恢复期血清抗体效价比急性期的效价明显升高达4倍或以上时，方有诊断价值。标本应保存在-20。 收集足够量的标本 标本放置在设计用于提高病原体生存、无漏和无潜在安全性问题的容器内,在每份标本上标明患者的姓名、标本来源、采集部位、采集日期、采集者姓名 及时送检 大多数细菌标本应冷藏送检，但
45、是某些细菌，如脑膜炎奈瑟菌对低温和干燥极其敏感，应注意保温，尽量床旁接种，并预温相应的培养基。病毒在室温中易于灭活，应立即接种；如需运送，以4为宜；若需保存较长时间，加入适当的保护剂如甘油或二甲基亚砜后，放入-70保存。,三、疫苗针对疾病病例的采集样本,白喉：咽拭子 破伤风：创伤部位 百日咳：飞沫、咽拭子 流行性脑脊髓膜炎：脑脊液、血液、瘀斑组织液 脊髓灰质炎等肠道病毒：粪便、脑脊液、疱疹液 麻疹、风疹、腮腺炎：咽拭子、尿液、血液 流感/禽流感：鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽取物、漱口液、鼻洗液 肝炎：血液、粪便,四、标本采集的防护措施,标本采集时，采集人最好穿戴隔离衣、防护眼罩和乳胶手套（2层）；
46、标本采集完毕，首先消毒并脱掉外层手套，然后戴内层手套依次脱掉帽子、眼罩、口罩、衣裤和鞋套，最后脱掉手套，再用消毒巾擦拭面部和双手。,标本采集后应尽早送到实验室，不要等其它标本。 放标本的血清管应有螺旋盖的塑料冻存管塞、不漏，并有标签，放进塑料袋中密封。将塑料袋放入冷藏包中或冰壶。 在04环境下运送。 送标本时附带标本送检表。 血清标本可在4存放一周，长期保存置-20或更低温度保存。,五、标本的保存与运送-血标本,鼻咽拭子/鼻咽分泌物的运送及保存,标本采集后如果48小时内可以完成检测的，可4条件下放置，之后-70 保存。 采样后48小时内不能完成检测的，-70 保存，并且一周内送检。 严防标本污
47、染或容器渗漏。,标本运输要求,标本采集后加无菌外包装，置于专用密闭盒（金属或硬塑料材质）内，用吸水纸等填充物固定好，置于保温箱内；由专业人员专人运送；短途运送（市内）加冰保冷即可；长途运送需加干冰保冷。,A类感染性物质的包装与标签,B类感染性物质的包装与标签,初级容器：指第一层不透水、防泄漏的样品储存容器。这种容器外面要包裹足够的吸收材料，一旦有泄漏可以将所有液体完全吸收掉。 次级容器：指第二层结实的、防水及防泄漏的容器，它的作用是包装及保护初级容器。几个包裹好的初级容器可以放入同一个次级容器中，但在多个初级容器中必须再衬以足够的吸收性材料。相关文件，例如样品数据表格、信件、样品鉴定资料、发送者和接收者信息应该放入一个防水的袋中，并贴在次级容器外面。,三层包装系统,最外层的运输包装：指包裹在次级容器外面，在运输过程中使其免受外界影响如破损、浸水等的一层包装。如果没有合适的包装，EPI疫苗运输包可以作为一个选择，但是仅限于在国内的陆路和铁路运输，而且一旦疫苗运输包用于标本运输以后严禁再用于疫苗运输。所有用于冷却标本的材料和器材都有可能被病原体污染，因此每次用后都必须销毁或消毒处理。EPI疫苗运输包不符合IATA（国际航空运输协会）的相关规定，因此不能用于国内和国际的航空运输。,三层包装系统,THANK YOU!,
