1、医学信息2006年11月第19卷第11期Medical InformationNov2006V0119No11综述大鼠左心室肥厚模型研究概况赵剑华，胡春阳，陈林庆(综述)(甘肃中医学院，甘肃兰州730000)摘要：对近几年有关左心室肥厚的动物模型研究资料整理、总结，主要有压力负荷型、容量负荷型、肾性高血压型等大鼠心肌肥厚模型，同时也归纳了离体心肌细胞肥厚模型研究方法，以期为左心室肥厚的病因病机研究、临床诊疗方法及开发有效的防治药物提供理论参考。关键词：大鼠；左心室肥厚；模型心肌肥厚是心脏对慢性压力或容量超负荷产生的靶器官反应，见于高血压心脏病、肺动脉高压及慢性充血性心力衰竭等。心肌肥厚的基本变
2、化不仅是心肌细胞的肥大与增生，也有非心肌细胞如成纤维细胞、胶原细胞、血管细胞及蛋白质、酶等的生成、增殖与增生，伴有心室形态与结构的改变和心肌机械功能的减退等。心肌肥厚中最常见的是高血压病引起的左室肥厚(LVH)，为高血压的主要靶器官损害之一。中医学中虽无心肌肥厚的名词，但有“阳化气，阴成形”，“阳生阴长”等论述。现代研究表明，LVH是一种极其重要的、独立的心血管危险因素，可使心肌缺血、心律失常、心力衰竭和淬死的几率增加610倍。31。所以有关左室肥厚的动物模型研究有助于了解本病的病因，病机，对探讨其诊治办法，开发有效的防治药物有重要意义。现就近几年有关左心室肥厚的动物模型研究进行简单总结，以供
3、大家参考。1实验动物的选择进行心肌肥厚研究的动物以sD大鼠、白发性高血压大鼠、WKY(Wistar-kyoto)大鼠最为常用，仓鼠及转基因小鼠也可制作动物模型。2动物模型21压力负荷性心肌肥厚模型”。1体重2009左右的大鼠，雄雌兼用，戊巴比妥钠(30mgkg体重)腹腔注射麻醉，背位固定于手术台，手术野剪毛，皮肤消毒，腹正中切口，打开腹腔。在左肾动脉分叉处上方分离腹主动脉，将腹主动脉与7号或9号注射器针头(磨去针尖)共同结扎(3一。号丝线)，然后抽出注射器针头，使该部位动脉形成狭窄(狭窄程度6570)，然后逐层缝合腹部切口、关腹。假手术组除不用丝线结扎腹主动脉外，其余操作步骤相同。术后每天用青
4、霉素5万u只肌内注射一周。一般术后34天大鼠心肌开始肥厚，23周达稳定高峰。该模型通过缩窄部分腹主动脉，造成心脏后负荷增加而收稿日期：20060704导致心肌肥厚，此外，由于肾血流量相对减少，血管紧张素等体液因素也参与心肌肥厚形成。该模型形成心肌肥厚时间较短，操作方便，重复性好，应用较多。但是术后早期动物死亡率较高(约2030)，可能与急性心功能不全有关。22 肾型高血压大鼠心肌肥厚模型拍一1体重2009左右的大鼠，雄雌兼用，戊巴比妥钠(30mgkg体重)腹腔注射麻醉后在背部或腹部切u，分离左肾动脉，在近主动脉端用u形银夹(内径为0203ram)缩窄，可作一肾一夹型或两肾一夹型(不触及对侧肾)
5、。假手术组除不夹肾动脉外，其余过程相同。术后第46周血压平稳上升到180mmHg左右，血压升高8周后可形成高血压LVH，如研究逆转LVH的药理，可在血压平稳上升后89周给药。该模型属高肾素型，左肾动脉狭窄可造成肾脏缺血，导致肾内生成肾素，从而增加血中Ang 11含量，致使血压升高，适于研究高。肾素型心肌肥厚情况。肾动脉狭窄程度非常重要，夹的太松血压不升高，央得太紧容易造成肾脏坏死。使血流量减少原水平50一70左右比较适宜。23 SHR心肌肥厚模型16SHR出生后血压随鼠龄的增长而不断升高，4周龄时心肌重量即开始增加，34个月血压即已稳定升高，心肌肥厚亦加重。SHR心肌肥厚以LVH为主，但亦可能
6、伴发肺动脉高压及右心室肥厚。SHR心肌肥厚心脏超微结构改变，j三要为心肌细胞线粒体肿胀，形态大小不一，肌原纤维排列紊乱，细胞膜增大，染色体增多等。如果研究药物的预防作用，则需在SHR出生4周开始给药，如果研究药物逆转肥厚的效果，则需在SHR出生后1014周龄给药，可以持续给药912周。本模型与临床高血压的病理生理过程最接近，是研究人类高血压心肌肥厚的重要动物模型。但是SHR需要长期饲养，约40周。饲养条件要求较高，饲料配比有特殊要求。24容量负荷性心肌肥厚模型坤川体重2009左右sD大鼠，雌雄兼用，实验室饲养2周后，用25氯胺酮20mgkg腹腔注射麻醉，背位固定，手术野剪2055一学纛|豳r万
7、方数据日=：=j临床医学j 医学信息2006年11月第】9卷第11期Medical InformationNov2006 Vol 19 No11毛，消毒皮肤，腹部正中线切口，切除左。肾，不触及右肾，术后l周给大鼠皮下注射去氧皮质酮5ragkg体重(溶于吐温一80，羟甲基纤维素钠和1氯化钠中)，每周7次，共9周。常规饲料饲养，并给1氯化钠溶液自由饮用，每周测一次空腹体重及清醒状态下尾动脉血压。术后5周，大鼠血压达160mmHg以上为高血压。术后8周，大鼠左心室已肥厚。如为预防LVH，则于LVH已稳定后的第9周给药，给药持续9周。大鼠给予去氧皮质酮加盐水，形成容量过负荷高血压心肌肥厚模型，属内分泌
8、型(低肾素型)高血压肥厚型，以心脏容积增大为特征，属离心性肥厚状态。该模型建立所需时间较长，费用较大；为使大鼠血压升高，实验过程中给予1氯化钠。25大鼠动静脉造瘘致容量超负荷模型19”大鼠麻醉后开腹，分离腹主动脉和下腔静脉用血管夹阻断血流。用9号针头斜向上穿刺静脉壁，继续进针刺静一动脉联合壁。退出针头，90线缝合静脉壁的创口。松开血管夹，下腔静脉变红则证实造瘘成功。动静脉造瘘后，动脉血流入下腔静脉，回心血量增加，增加心脏容量负荷，最终导致心肌肥厚的发生。26异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚模型。11”异丙肾上腺素002ragkg，皮下注射每日2次，连续6周可引起左心室肥厚，这一作用与其激活肾上腺素
9、受体，增加心肌细胞合成代谢以及Ca2+超负荷有关。27甲状腺激素诱导大鼠左心室肥厚模型4”1大量甲状腺素能提高人体基础代谢率，增强交感神经活动，增加心脏的负荷。机体高甲状腺素状态，可促进心肌细胞mRNA和蛋白质的合成，从而使心肌肥厚。给大鼠每天ipL一甲状腺素1mgkg，连续7天。 j3离体组织器官研究31离体心脏灌流在建立各种因素造成大鼠LVH模型基础上，急性处死大鼠，剖胸取出心脏，灌流装置为Langendofff装置，逆行恒压灌注，灌注压为85cmH20，灌注液为KrebaHensele缓冲液。记录左心功能参数，包括左心室收缩压力(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左心室内舒张
10、期压力最大变化速率(一dodtpmax)、左心室内压最大变化速率(dpdVpmax)。测定结束后，可观察心肌肥厚情况，并观察心肌胶原网络重构或分离心肌细胞，测定心肌细胞ca“浓度等M，”j。32离体心肌细胞肥厚模型无菌条件下取出生后24天sD大鼠心脏，将心室肌放人HankS液中冲洗3次后，剪成小块(约1,nm2)，用06的胰酶在磁力搅拌器的搅拌下分散细胞，控制温度在37，每10分钟收集一次细胞，离心二次后将全部细胞置于含有10胎牛血清和90DEME培养基的lOOml培养瓶中，送入二氧化碳培养箱(5CO：和95空气)中培养6090分钟，根据差率贴壁法区别心肌细胞和非心肌细胞，并加入Bromode
11、oxyurine以防残留非心肌细胞的生长。将生长于培养板上静止了48小时的心肌细胞的培养液倒掉，加入不同浓度的刺激剂如ET，An91I，LNAME(NO合酶抑制剂)，NE，L一甲状腺素，内皮生长因子及胰岛素等，模拟各种致肥厚因子在体体液因素的状态以形成心肌细胞肥厚，同时加入3Hthymidine和3HLeucine，用液闪仪测量，以分析DNA和蛋白的合成，同时可运用成像系统和计算机处理，测定心肌细胞体积的大小，以判断心肌细胞肥厚的程度。该技术要注意防止污染和非心肌细胞的混杂，每孔心肌细胞数约为5104个。该模型可排除机体其它因素的干扰，可观察药物对心肌细胞的直接作用。但分析药物作用的机制时，应
12、考虑到离体心肌细胞肥厚与在体心肌细胞肥厚有一定差异。4观察指标的选择范围1在建立LVH动物模型的基础上，可根据实验目的要求及仪器设备条件，选择适合的观测指标1：41 心脏血流动力学的指标主动脉血压(AP)、LVSP，dodt，LVEDP，并根据公式推算出舒张期内压下降时间常数(t值)，左心功能参数；采用QXGIVB型左右心功能同步检测分析仪测定左心排血指数(LCI)。42心指数及左心室肥厚指数心脏重量(HW)、心指数(心脏重量体重，HWBW)，左心室重量(LVw)、左心室肥厚指数(左心室重量体重，LVWBW)、芹心窜肇相对厚度(LVWT)。43电生理学指标观察心电图(ECG)图形，肥厚心脏左心
13、室乳头肌动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)。也可利用膜片钳技术观察膜电容、动作电位(AP)、APD、瞬In#l-向电流(I。)、起博电流(I，)和离子通道电流改变。44形态学指标心肌胶原体积分数(CVF)，血管周围胶原面积(PVCA)；心肌血管周围胶原面积和管腔比例；光镜观察：心肌细胞形态，心肌胶原纤维形态、排列，成纤维细胞计数及左室心肌间质形态学变化。透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变：45心肌生化指标心肌细胞mRNA和蛋白质含量，心肌质膜Na+，K+一ATP和Ca“，Mg“一ATP酶活力，心肌膜内外Ca“，Na+，K+，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胶原含量，及心肌
14、单细胞内游离Ca2+测定。46影响心肌细胞肥厚的相关因子测定及有关基因表达2056 万方数据医学信息2006年11月第19卷第11期Medical InformationNov 2006V0119Nom=：二=：3J临床医学l蛋白质含量，Ca”浓度、心肌胶原浓度(羟脯氨酸含量)、PKC及MAPK活性、cAMP含量、ANF、5一HT，血浆ET，NOS，NO，SOD，MDA，RTPCR法测定心肌I型、型胶原mRNA的表达。原位杂交测定左心室原癌基因cfosmRNA表达，及TGFp基因表达。免疫组化测定心室肌clos蛋白的表达。RT-PCR法测定心肌ras原癌基因及P。mRNA表达。47培养心肌细胞
15、观察指标心肌细胞、成纤维细胞计数及心肌细胞直径面积测定，搏动率、凋亡率，细胞总蛋白含量，乳酸脱氢酶(LDH)，NO，一氧化氮合酶(NOS)，抗氧化酶(SOD，GSHPx，GSH)和MDA测定。采用3H一亮氨酸渗入法测定心肌细胞蛋白质合成速率。放射免疫法测定心肌及血浆肾素(PRA)、Ang I和Ang含量，RT-PCR法测定AT。受体mRNA，定量逆转录聚合酶链反应(PRTPCR)测定AT，AmRNA、AT。BmRNA含量，免疫组化测定AT受体蛋白。参考文献：1陈修，陈维洲，曾贵云主编心血管药理学M第二版北京：人民卫生出版社，19973863882梁黔生，郑智左室肥厚的研究近况J心血管病学进展2
16、001，22(3)：1433苏成炼，沈绍功主编现代中医心病学M北京：科学技术出版社，19972854陈朋民，陈兰英，范慕贞，等仓鼠心肌肥厚模型的建立及左心室chymase、ACE基因表达的检测J高血压杂志2000，8(1)：525曾加雄，刘惟莞，石明健，等水杉总黄酮对压力超负荷大鼠左室肥厚的作用J中lqfI药杂忠，2000，25(t0)：6226徐叔云，卞如濂，陈修主编药胖擎：实验方法学M第i版北京：人民生H版社，2002，t026一10307OhkusaT，HisamatsuY，YanoM，ctalAheredcardiac mechanism andsarcoplasmi creticul
17、um functionin pressure overload induccedcardiachy penrophy in ratsJJMolcell Cardiol，1997，29(1)：458柳锋，郑智丹参防治自发性商血压大鼠左窜肥厚效应与对儿茶酚胺氧自由基代谢的影响J中闷急救医学，2003，23(11)：765一1699刘惟莞，曾加雄，石明健，等水杉总黄酮对肾性高血压大鼠左心室肥厚的作用J中草药，2000，31(11)：83783910李平，李劲梁，尹峰，等大鼠心肌重塑过程中Axin蛋白质的表达变化J，生理学报，2003，55(3)：33133511秦泰春，顾振纶，刘世增槲皮素对异丙肾：
18、腺素所致大鼠心肌肥厚的影响J中药理学通报，1999，15(4)：32912周青，何蔚，周俐，等二七总皂背对异丙。肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用J，中药药理与临床2005，2】(4)273113杨晓茹，王怀鹏，刘惟莞，等大鼠容量超负荷模型复制办法的改进J中国药理学通报，1999，15(5)：43014程岚，李新华，李泱，等阿米洛利对甲状腺素诱发大鼠肥厚心肌的作用J药学学报，2000，35：71015梁黔生，程岚，郑智，等甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚时瞬时外向钾电流，内向整流钾电流和钙电流的变化J中华心律失常杂志，2001，16(5)：444816千长谦，谢秀兰，徐依铭，等压力负荷增高心肌肥厚大鼠心
19、肌胶原网络重构及其与心功能变化的关系J心功能杂志，1998，10(4)：245编辑樊延南护理管理工作探析张金华(综述)(青岛大学医学院附属医院，山东青岛266003)随着社会的进步，人们对健康的需求与日俱增，同时对护理工作的要求也越来越高，因此，加强护理管理在整个护理工作中就显得尤为重要，为了反映我国护理管理方面的状况，从护理管理现状、护理质量管理、整体护理管理、护理人员管理、护理信息网络化管理等五个方面进行了分析研究。1护理管理现状11护理队伍的整体水平与医院的发展不相适应，主要受教育层次和知识结构的限制，具体表现在实际工作中综合分收稿13期：20060704析能力和解决实际工作问题的能力不强。12护理人员不足，难以保证基础护理与基础服务到位，目前我国各医院仍沿用1978年卫生部颁发的综合医院组织编制原则实行草案按照1：04床护比标准配备护士，编制几十年没有变，而美国、H本、德国等部分医院的床护比例为1：0531：12，我国各医院护理人员编制明显低于西方发达国家。因此势必造成护理人员数量与质量的差距”。由于护理人员编制不足使得些基础护理、心理护理、康复指导等工作流于形式。13 目前从事临床护理管理的人员多为中专或大专学历，本科或硕士学位者仅占少数，其中大部分管理者是从基层护2057 万方数据
