1、第一天1、配置 LB 培养基：酵母粉 15g、胰蛋白胨 30g、氯化钠 30g，定容至 3000ml。调节 PH 至7.4（2M NaOH） ，高压蒸汽灭菌 20 分钟，37 保存。分装成 15 瓶（每瓶200ml） 。2、接种（超净台要提前杀菌通风）取 4 瓶上述培养基，每瓶加 200lAMP（1:1000） 、 60l 菌液。37过夜。第二天1、扩大培养（超净台）4 瓶扩至 16 瓶，每瓶培养基加 200lAMP，摇床培养 1 小时左右。2、诱导（超净台）加 40lIPTG，加完后去除封口的除牛皮纸，扎口较松。25摇床培养 4 小时。3、离心获取菌体4，8000rpm 离心 25 分钟。注
2、意配平。4、超声波破碎菌体离心后去上清，向沉淀加入（600mlPB 裂解液、300l 溶菌酶、3mlPMSF） 。将菌液转入 2 个烧杯中，冰浴超声波破菌，400W ，75 次，每次 6 秒，间隔 2秒。离心收集上清液。600mlPB 裂解液：20mM/L PB，10mM/L EDTA，5%甘油，1mM/L DTT，调节 PH 至 7.4。超声波破碎：首先用去离子水清洗探头，再将盛有菌液的小烧杯置于有冰水混合物的大烧杯中，冰水界面略高于菌液面即可。探头浸没于菌液中，不可伸入过长。注意破菌过程中由于冰的融化导致的液面变化。5、抽滤（双层滤纸)洗胶（GST） 。将上述上清液抽滤，滤液与 GST 胶
3、混合，磁力搅拌过夜。第三天1、抽滤蛋白-胶混合液，滤液取样 20l，留电泳。2、洗杂蛋白，用 1PBS+PMSF(1000:1)约 400ml，洗脱若干次，用移液枪吸去上层泡沫（杂蛋白） ，至胶上无泡沫为止。3、洗脱目的蛋白，洗脱液加 50ml，分 3 次进行（15+15+15） ，每次加入后间歇搅拌，自然静置洗脱 15 分钟，抽滤，勿使胶干，合并洗脱液，取样 20l，留电泳。用洗脱液调零，测 OD280。 （OD 值达到 1.5 为佳）4、将洗脱液置于透析袋中（透析袋应提前煮好） ，将透析袋置于 2L 透析液 1中，加入磁珠置于 4冰箱内磁力搅拌器上，4 小时后换为透析液 2。胶的回收：用 3M 氯化钠溶液（用 1PBS 溶液溶解） 、1PBS（无沉淀）洗涤，20%乙醇洗脱，装瓶。洗脱液：50mM/LTRIS-HCL 、10mM/LGSH透析液 1：20mM/L TRIS-HCL、 1mM/L EDTA 、 0.15mM/L DTT透析液 2：:0.5mM/L EDTA、1PBS
