1、实验动物概论,湖南中医药大学孟 琼,主要内容一、前言 二、实验动物在医药研究中的历史、现状和发展趋势三、基本概念四、实验动物标准化五、常用实验动物的生物学特性及饲养 管理六、实验动物福利,Why do we need animal experiments?,美国：投入生命科学研究和卫生保健事业费用占国民生产总值的比例逐年增高，超过了航天和原子能事业的投入。,生命科学研究离不开实验动物。在美国, 60%以上生命科学研究课题需要实验动物。NIH（美国国立卫生研究院）每年科研经 费的50%用于动物实验有关的项目。,美国哈佛大学医学研究院96年统计报导：在1991-1996年全世界人类健康研究中有51
2、项突破性重大研究成果，其中22项是通过实验动物模型遗传研究得到的，占43%。南京军区总医院1987-1997年，十年中获得全国，全军科技进步及医疗成果二等以上的奖项共52项。其中通过动物实验取得的有38项，占73%。2002年广东省申报医药类科技进步奖277项，其中使用实验动物获得的成果177项，占63.9。,在当今，我们要获得精密的仪器，高纯度的试剂、最新信息是轻而易举的。但获得理想的实验动物却不那麽容易，一方面是人们重视程度不够；二是我国实验动物学科起步晚，比较落后，即使有钱也不一定获得理想的实验动物。即使获得了所需的实验动物，若动物实验环境和动物饲养条件达不到标准，也不可能获得理想的实验
3、结果。由于我国实验动物学科发展滞后，严重制约 了医学、药学及生命科学研究的发展。,因此国家科委和有关部门高度重视,颁布了一系列的管理条例和实施细则，来促进我国实验动物事业的发展。1997年国家四部委（国家科委、卫生部、农业部、国家医药管理局）联合发文规定2000年科研和药检的大、小鼠必需达到清洁级以上标准。2001年国家最近颁布的实验动物标准已取消普通级大、小鼠.,实验动物在医药研究中的 历史、现状和发展趋势,（一） 历史 历史上许多重大发现是通过动物实验得到的。,年份 发现人 发现 所用动物 1628 哈维（英国） 血液循环 蛙.蛇.鱼.其它 1829 Jerner 牛痘免疫预防天花 牛、马
4、、猪 1846 玛登（德国） 乙醚麻醉 鸟类，其它 1878 科赫（德国） 结核杆菌，细菌 牛，羊与疾病的关系 1885 巴斯德（法国） 狂犬病免疫 狗 1921 冯梅林（德国） 胰岛素 狗 1932 Domagk (德国) 磺胺药的发现 小鼠 1936 巴甫洛夫（俄国） 条件反射、消化生理 狗,虽然用动物做实验有上千年的历史但作为一门学科仅有50年的时间。,（二）现状随着生命科学的发展进一步深入，三项重大突破即：近交系小（1909）、无菌动物（1915）和免疫缺陷动物（1966）的发现和培育成功，为创建实验动物科学奠定了基础。近交系小鼠对研究遗传规律和各种遗传病的诊断和防治起到了重要作用。免
5、疫缺陷动物裸小鼠为肿瘤免疫学的研究提供了很好的实验材料。用无菌动物可了解各种病原体对机体的影响。,随着克隆动物的出现，各种转基因动物的培育成功和应用，把实验动物学科带到了全新的境地。大大促进了生命科学的研究和发展。,（三）实验动物的发展趋势： 1、高等级动物（清洁级、SPF级）被大量使用。 2、模型动物的大量发展和使用，正在逐渐取代常规实验动物。 （高血压大鼠、肥胖症小鼠和肿瘤的动物模型等）。 3、转基因动物的大量使用（AIDS病毒、乙肝病毒和人白血病I型病毒的小鼠转基因模型）。 4、整个实验动物的供应，趋向于社会化、商品化。实验动物的管理标准化、法制化。 5、实验动物的福利、保护和“3R”运
6、动呈现全球化趋势。 “3R”即：替代（Replacement）、减少（Reduction）和优化（Refinement），其核心是对作为人的替身或“替难者”善待、减少痛苦、降低用量，更重要的是通过“3R”研究进一步开拓人们进行科研的思路，使研究手段更加完善。,What is laboratory animal?,基本概念,实验动物科学（Laboratory animal science LAS）：是研究实验动物及其应用的一门科学，包括实验动物和动物实验。,2018/12/25,16,实验动物实验动物是指经人工培育，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或来源清楚，用于科学研究、教学、生物制品或
7、药品鉴定以及其他科学实验的动物。,Laboratory animal,2018/12/25,17,实验用动物实验用动物泛指所有用于科学实验的动物。它包括实验动物、家畜（禽)和野生动物。家畜(禽) 以满足人类社会生活需要而生产 的动物。野生动物 直接从野外捕获的动物。,Animals for research,Wild animal,Fowls and domestic animal,动物实验 （animal experiment）：为科研、教学、药品检定等目的，对动物进行物理、化学和生物因素处理，观察其反应，获得实验数据，解决科研中的问题。人类疾病的动物模型：是指医学研究中建立的具有人类疾病模
8、拟表现的动物实验对象和相关材料。,保证结果的准确性和结论的可靠性 不违背医学伦理学原则 可进行足够的重复试验,优点,动物实验的特点,主动、精确、效率高 特点,动物实验的特点,局限性,不能用于研究中医情志致病学说和满足研究现代医学发病模式的需要 动物模型的疾病发生机制及对药物的反应性与人体有一定的差异性 实验及处理条件与人的自然发病有所不同，实验结果有一定差异,实验动物标准化,实验动物的微生物寄生虫学控制分类实验动物的遗传学控制分类,实验动物标准化,2018/12/25,22,实验动物的微生物寄生虫学控制分类,实验动物微生物寄生虫学质量控制是实验动物标准化的主要内容之一，按微生物寄生虫 学等级分
9、类，实验动物分为普通级动物、清洁级动物、无特定病原体动物、无菌动物。,Specific Pathogen Free animal,Clean animal,Germ Free animal,Conventional animal,一、无菌动物（一）概念无菌(germ-free，GF)动物指动物身上不可检出一切生命体的动物。进一步说，是指用现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何微生物和寄生虫的动物。,无菌动物来源于剖腹产或无菌卵的孵化，饲育于隔离系统。用大量抗生素可使普通动物暂时无菌，但这种动物不是无菌动物。因为这种无菌状态只是一时性的，某些残留的细菌在适当的条件下又会在体内增殖，即使
10、体内细菌全部死亡，它们给动物造成的影响也是无法消除的。例如，特异性抗体的存在、网状内皮系统的活化、某些组织或器官的病理变化等。因此，无菌动物必须是生来就是无菌的动物。,(二)无菌动物的特点 1形态学改变(1) 消化系统： 无菌动物和普通动物外观和活动之间看不出有特别的差异，有时仅见有体重增加的差别。据报道，无菌动物的盲肠(包括内容物)的总重量有的可达到体重的25。,(2) 血液循环系统：心脏相对变小，白细胞数少，且数量波动范围 小，与无病原体入侵有关。(3)免疫系统：由于无菌动物几乎没有受过抗原刺激，其免疫 功能基本上是处于原始状态。,2. 生理学改变(1)免疫功能：由于网状内皮系统、淋巴组织
11、发育不良，淋巴小结内缺乏生发中心，产生丙种球蛋白的能力很弱，血清中IgM、IgG水平低，免疫功能处于原始状态。(2)生长率：无菌条件下对不同种属影响不同。无菌禽类生长率高于同种的普通禽类；无菌大小鼠与普通鼠差不多；无菌豚鼠和无菌兔生长率比普通者慢，可能因肠内无菌，不能帮助消化纤维素以提供机体所需要的营养所致。,(3)生殖：无菌条件对动物生殖影响不大。大鼠和小鼠因出生后无感染，身体较好。其繁殖力高于普通大小鼠；无菌豚鼠及兔比普通者繁殖力低，可能因盲肠膨大之故。(4)代谢：血中含氮量少，肠管对水的吸收率低，代谢周期比普通动物长。(5)营养：无菌动物体内不能合成维生素B和K，故易产生这两种维生素的缺
12、乏症。,(6)抗辐射能力：抗辐射能力强，X射线照射无菌小鼠的存活时间较长，普通小鼠常因败血症而致死。这是由于受损细胞的寿命在无菌小鼠与普通小鼠之间存在差别的缘故。另据报道，无菌小鼠抗实验性烫伤引起的休克死亡也强于普通动物。(7)寿命：无菌动物寿命普遍长于普通动物。,(三)无菌动物的应用无菌动物在生物医学中具有独特作用，多年来在医学科学研究的很多方面已被广泛应用。1在微生物研究中的应用无菌动物可提供组织培养的无菌组织并提供具有某一种菌的已知菌动物；也可研究病原体的致病作用与机体本身内在的关系。,2在免疫学研究中的应用 无菌动物在免疫学研究中的应用是促进发展无菌动物模型的动机之一。无菌动物血中无特
13、异性抗体，很适合于各种免疫现象的研究。如将无菌豚鼠从无菌系统中移到普通动物饲养区，常在几天内死亡，病因经常是梭状芽孢杆菌的感染。,3.在放射医学研究中的应用 4.在营养、代谢研究中的应用 5.在老年病学研究中的应用 6.在心血管疾病研究中的应用 7.在毒理学研究中的应用,二、悉生动物,(一)概念悉生动物(gnotobiotic animals，GN)也称已知菌动物或已知菌丛动物(animal with known bacterialflora)，是指在无菌动物体内植入已知微生物的动物。必须饲养于隔离系统。根据植入无菌动物体内菌落数目的不同，悉生动物可分为单菌（monoxenie)、双菌(dix
14、enie)、三菌(trixenie)和多菌(polyxenie)动物。,(二)悉生动物的特性悉生动物肠道内存在能合成某种维生素和氨基酸的细菌，尽管经高压灭菌饲料不能供给足量的维生素，也不会像无菌动物那样发生维生素缺乏症。悉生动物生活力较强，抵抗力明显增强，也易于饲养管理，在有些实验中可作为无菌动物的代用动物。,(三)悉生动物在生物医学研究中的应用悉生动物可排除动物体内带有各种不明确的微生物对实验结果的干扰，因而可作为研究微生物与宿主、微生物与微生物之间相互作用的动物模型。,三、无特殊病原体动物或称SPF动物(一)基本概念除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大
15、的病原，这类动物称无特殊病原体(specific pathogen free，SPF)动物。SPF动物来源于无菌动物，必须饲养在屏障系统中，实行严格的微生物学控制。,优点：1 避免了病原体的隐性感染或潜伏感染对实验结果的干扰。2 避免了某些条件致病菌对实验结果的干扰。SPF动物既排除了病原体的干扰又价格低于悉生动物。,(二)应用国际上公认SPF动物适用于所有科研实验，是目前国际标准级别的实验动物。各种疫苗生产所采用的动物应为SPF级动物。SPF动物的应用价值在于它无人畜共患病，无主要的传染病，无对实验研究可能产生干扰的微生物。,四、清洁级动物(一)基本概念除普通动物应排除的病原外，不携带对动物
16、危害大和对科学研究影响大的病原的动物。清洁动物饲养于屏障环境或IVC系统，饲料、垫料、笼器具都要经过消毒灭菌处理，饮用水除用高压灭菌外，也可采用pH值2.5-2.8的酸化水，工作人员需换灭菌工作服、鞋、帽、口罩，方能进入动物室操作。,(二)应用清洁级动物近年来在我国得到广泛应用，它较普通级动物健康，又较SPF动物易达到质量标准，在动物实验中可免受疾病的干扰其敏感性与重复性亦较好。这类动物目前可适用于大多数教学和科研实验，可应用于生物医学研究的各个领域。,五、普通级动物普通级动物指不携带所规定的人兽共患病病原和烈性传染病病原的动物。饲养于开放环境，微生物等级要求最低，但要有良好的饲养设施和饲养管
17、理操作规程及规章制度。如饲料、垫料要消毒；饮水要符合城市卫生标准；外来动物必须严格隔离检疫；房屋要有防野鼠、昆虫设备；经常进行环境及笼器具的消毒，严格处理淘汰及死亡动物。,无菌动物,、无特定病原体动物,和普通级动物优缺点比较,实验动物的遗传学质量控制按遗传学控制标准即基因的纯合成度,实 验动物分为:近交系（inbred strain）C3H （300多种）突变系（mutant strain）裸鼠 杂交群（hybrid colony） F1昆明小鼠 封闭群（close colony）wister大鼠,近交系动物的概念,经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于第20
18、代或以后代数的一对共同祖先。,近交系的近交系数（Inbreeding coefficient）应大于98.6。,特点:1、基因纯合度达到98.6%,个体差异小,似同 卵双生反应一致重复性好，用少量动物即可获得 精确度很高的实验结果，个体相互之间可以接受 皮肤、器官移植。2、隐性基因纯合使许多病态性状得以暴露, 可获得大量先天性畸形及先天性疾病的动物模型. 如高血压、白内障、糖尿病.动物模型. 缺点: 出现近交衰退.,突变系动物,指正常染色体的基因发生了变异，动物 具有一种或多种遗传缺陷。例如：无胸腺裸鼠、严重联合免疫缺陷动物SCID小鼠。为肿瘤、免疫疾病的研究提供了理想的材料。,肌无力/萎缩小
19、鼠模型,两个无关近交系杂交形成的后代.特点：虽然基因杂合，但个体之间基因 杂合的一致,个体差异小。除具有近交系的 优点,还具有生命力强耐受性强,可长期进行 观察，个体相互之间可以接受皮肤、器官移 植。,杂交F1代动物,封闭群动物以非近亲交配方式繁殖生产的一个实验动物种群。在人类遗传研究、药物筛选、毒物实验等方面起着不可代替的作用等。,常用实验动物的生物学特性 及饲养管理,小 鼠,一、行为和习性1.性情温驯，胆小怕惊。小鼠经长期的培育，在用于实验研究时, 性情温顺,易于抓取,不会主动咬人,操作起来 很方便,是理想的实验动物。当饲养室有人时, 小鼠活动受到限制,甚至停止活动,受到惊吓 时,小鼠尾巴
20、会挺直并猛力甩动。,2.喜黑暗,昼伏夜动白天活动较少,夜间十分活跃,其进食,交配,分娩多发生在夜间.有两次活动高峰,一次在傍晚后1-2小时,另一次在黎明前。3.喜群居,非同窝雄鼠好斗群居小鼠生长发育较快,非同窝雄鼠易发生斗殴,群体中处于优势的雄鼠常将处于劣势者的胡须拔光,自己保留胡须,被称为理发师。,4.环境适应性差小鼠对外界环境反应敏感，适应性差，强光或噪声刺激时，有可能导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。经高温后，繁殖力下降，温度超过32，会造成死亡；温度过低，则影响生殖，且易于发病。,5.喜啃咬 因为小鼠门齿终身生长,生长较快,所以特别喜欢啃咬坚硬物品。6.寿命一般2-3年。7.杂食性
21、以粮食作物为主,自身能合成Vc。,二、生长发育小鼠是啮齿类实验动物中最小的动物，生命周期短，易于饲养管理，出生时体重仅约1.5g，哺乳饲养11.5个月即可达1820g，可供实验使用。成熟早,繁殖能力强。,三、繁殖性能小鼠成熟期早，繁殖力强，雌鼠3550日龄，雄鼠4560日龄性成熟。 性周期45天。 妊娠期1921天。 哺乳期2022天。 每胎产仔数815只，年产仔69胎。 小鼠的性活动可持续1年左右。,大 鼠,大鼠体型小，即经济又易饲养繁 殖，手术操作也教为方便，使用大 鼠的研究可能比任何一种其他实验 动物都要多样化。,生长发育，繁殖特性同小鼠血液呈动态变化 不同的时间采血，不同的方法采血等，
22、都能影响血液成分没有胆囊肝脏再生能力强,大、小鼠的性别鉴定,一、大、小鼠1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）,大、小鼠年龄的大致判断,新生鼠赤裸无毛，皮肤肉红，不开眼，双耳与皮肤粘连,3日龄脐带脱落， 皮肤由红转为白色。,46日龄双耳张开耸立。,78日龄四肢发育，开始爬动游走，被毛逐渐浓密，下门齿长出。,9l1日龄有听觉， 被毛长齐。,1214日龄开眼，长出上 门齿，开始采食并学习饮水。,9l1日龄有听觉， 被毛长齐。,3周龄离乳独立生活。,2. 根据体重鉴定日龄 小鼠日龄与体重的对应, 大鼠日龄与体重的对应,大、小鼠的饲养管理,（一）、小鼠的饲养管理 1、饲养环境: 总的要求：保持恒
23、定舒适的温、湿度，保持新鲜、洁净的室内空气；保持安静的环境；保持符合自然节律而柔和的光线。,具体要求：、清洁级以上的屏障系统或IVC系统。 、温度：2026;日温差3;相对湿度50%70%;换气次数:1020次/h;气流速度0.18m/s;氨浓度14mg/m;噪音60dB,2、笼具：采用无毒塑料笼具 3、垫料：选用具有良好的吸湿性、尘埃少、无异味、无毒性、无油脂的材料。垫料必须经高温高压灭菌处理。 4、饮水：如饮用城市生活饮水，必须经高温高压灭菌处理或直饮水。,5、饲料： 、小鼠应饲喂全价营养颗粒饲料。饲料的营养成分应符合营养需求标准，并保持相对稳定。 、随着生长发育和生产繁殖的阶段不同而制定
24、不同的饲料配方，保障各阶段的营养需求。 、饲料在饲喂前要消毒灭菌，一般采用高温高压或60Co照射,6、一般饲养管理方法： 、软件管理：要制定一套完整的规章制度及操作规程，并严格执行。 、饲料的添加原则：小鼠属于杂食性动物，胃容量小，有随时采食的习性，夜间更为活跃，采取“少量勤添”的原则。成年小鼠每天的采食量为56g.怀孕后期：8-10g/d,、给水： 饮用水应保证连续不断，每周换水34次（最好是每天更换新鲜水）。 注意饮水瓶嘴是否有气泡、不出水或漏水的现象。每次换水要连同水瓶和瓶嘴一起换下；并认真清洗水瓶和瓶嘴，然后消毒，严禁未经消毒的水瓶和瓶嘴继续使用,、垫料和笼具的更换： 更换垫料及鼠盒的
25、时间要根据笼内动物的数量环境的湿度而定，一般每周更换垫料和清洗鼠笼1-2次。如遇饮水瓶渗漏应及时更换垫料及鼠盒。 换出的鼠盒要及时清洗，并用消毒液浸泡消毒，晾干后方可使用；垫料及时清理，并作无害化处理。,、一般的体外健康检查：每日要注意观察动物，发现异常或死亡，及时向相关人员报告，然后再做出相应的处理。体外健康检查包括以下内容：,、生活习性的观察 、身体状态的观察 、精神及反应性观察 、皮肤及被毛观察 、饮食及饮食行为观察,、粪尿观察：正常粪便具有一定的形、色、量；尿液具有一定的色泽、气味 、天然孔及分泌物、可视粘膜观察 、妊娠及哺乳 、生长发育观察,、卫生管理： 饲料、笼具、垫料使用前必须消
26、毒处理。 认真搞好室内卫生消毒工作。每天要保持地面清洁，每周至少要用消毒水擦拭地面一次。 每次换笼盒过程中要用消毒水擦拭笼架一次，墙壁用消毒水喷雾消毒一次。 每周要对饲养间外的公共部分用紫外灯照射或消毒水喷雾23次,、记录：认真做好各项记录工作，记录工作一般包括近交谱系图、品系记录、个体记录、繁殖记录、环境记录（温度、湿度、天气情况、设施运行状况等）及工作日记。保证记录资料的系统和完整。,、其他注意事项： 1、小鼠胆小，易于受惊，对外界环境的改变反应敏感。在饲育间的一切工作均应轻柔，抓取动物不得粗暴，抓小鼠尾部，然后轻轻提起放到预定的位置。整个过程要做到准、轻、快，将工作中或其他情况下逃离的动
27、物淘汰，不得再放回笼内，掉在地上的饲料一律丢弃。,2、严禁闲杂人员进入饲养间，饲料间一般谢绝参观。 3、雄鼠喜斗殴 小鼠群体中性成熟的雄鼠放在一起易发生互斗。 群居优势在雄性很明显，表现为群体中处于优势者保留胡须,被称为“理发师”,而处于劣势者胡须被拔光。在雄性小鼠合笼时应注意,4、要注意饲养密度 小鼠生长发育的快慢与品系、营养状况、健康状况、环境条件、母鼠哺乳只数和哺乳能力以及生产胎次均有密切关系。,5、在饲养间严禁吐痰、大声喧哗、吸烟、进食和饮水。 6、对外来的动物要进行隔离，只有隔离观察期满且认定为合格后，才能进入饲养间饲养。 7、不同品种、品系的小鼠不得混合饲养。 8、所有动物尸体要进
28、行无害化处理。,大鼠的饲养管理原则上与小鼠相同，不再赘述，现就大鼠饲养管理的不同之处和需要特别强调的地方简述如下：,（二）、大鼠的饲养管理,1、大鼠的饲养环境,大鼠对环境因素的刺激非常敏感。其中温度、湿度的波动或突然变化可成为重要的应激因子，促进条件致病菌所致传染病的爆发。空气干燥，湿度低于时，大鼠易得环尾病。所以特别注意温湿度 肮脏的垫料、笼内过度拥挤或通风不良、环境内产生过量的氨气或硫化氢会引起呼吸道感染，肺大面积炎症，特别是支原体的发生,大鼠的听觉灵敏，对噪声耐受性低，强烈噪音引起吃仔或抽搐现象。饲养间要保持安静。 光照对大鼠的生殖生理或繁殖行为影响较大。外界强光，甚至推荐标准范围的光线
29、水平也能引起白化大鼠视网膜变性和白内障。所以在顶层大鼠笼架应装上光线挡板，以防天花板照明装置对大鼠的影响。,实验期间也不能使用杀虫剂喷洒动物和饲养环境以防止动物体内发生改变，给实验结果带来不利影响。 总之，大鼠饲养室应做到安静、通风、空气洁净度高。,2、大鼠的饲料,大鼠喂全价颗粒饲料。饲料应保证其营养需要，并符合各等级动物饲料的卫生质量要求。大鼠对蛋白质的要求高，特别是动物性蛋白和维生素，投给量要比小鼠多。大鼠对营养缺乏非常敏感，营养缺乏时常会导致缺乏症，并加剧传染病的发生。,3、大鼠的一般饲养管理,大鼠的一般饲养管理应注意几点： 、饲喂大鼠要定时定量，每日喂给新鲜水，一般每周换垫料2-3次。
30、 、大鼠扩大繁殖生产，一般采用一雄多雌间隔同居法，当雌鼠腹部明显增大确认怀孕后，进行单养准备分娩，并投入新的雌鼠。,疾病预防：流行性出血热,流行性出血热（EHF）是病毒引起的自然疫源性疾病。1982年世界卫生组织（WHO）定名为肾综合征出血热（HFRS）。 鼠为本病主要传染源。 本病的主要病理变化是全身小血管和毛细血管广泛性损害。 临床上以发热、休克、充血出血和急性肾功能衰竭为主要表现。 中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病。,概述,临床表现（人类）,潜伏期4-46日，一般为1-2周，典型病症中有发热期、低血容量休克期、少尿期、多尿期、恢复期5期经过，非典型或轻型病列可出现越期现象。 目
31、前，我国北方部分地区家鼠型出血热还很严重，而一些老百姓及基层医务人员因对出血热的知识了解不多，常常将出血热误认为感冒或胃肠道疾病。,宿主动物和传染源,主要是小型啮齿动物、包括姬鼠属（主要为黑线姬鼠）、大鼠属（主要为褐家鼠、大白鼠）、鼠（棕背、红背）、田鼠属（主要为东方田鼠）、仓鼠属（主要为黑线仓鼠）和小鼠属（小家鼠，小白鼠）。,传播途径,主要传播为动物源性，病毒能通过宿主动物的血及唾液、尿、便排出，鼠向人的直接传播是人类感染的重要途径。,感染方式,接触感染： 由带毒动物咬伤或感染性的鼠排泄物直接接触皮肤伤口使病毒感染人。 呼吸道传播 ：以鼠排泄物尘埃形成的气溶胶吸入而受染。 垂直传播,消化道感
32、染： 经受染鼠排泄物直接污染食物吃后受到感染。最近有报告在实验动物进行经口喂以带EHFV的食物感染成功的例据。 螨媒传播 ：我国已查见革螨人工感染后一定时间内可在体内查到病毒，并可经卵传代，从恙螨也可分离到EHFV，因此螨类在本病毒对宿主动物传播中可能起一定作用。,易感人群,一般认为人群普遍易感，隐性感染率较低，在野鼠型多为34%以下；但家鼠型疫区隐性感染率较高，有报告为15%以上。 一般青壮年发病率高，二次感染发病罕见。 病后在发热期即可检出血清特异性抗体，1-2周可达很高水平，抗体持续时间长。,个人防护,灭鼠、防鼠 灭螨、防螨 必须注意个人卫生，做好防护工作。包括：不直接用手接触鼠类及其排
33、泄物，劳动时注意保护皮肤，防止破伤，如有破伤应消毒包扎。工作时，要穿好工作服，佩戴手套、口罩、帽子，皮肤露出部位可涂防蚊剂，以防止螨类叮咬 。,加强消毒工作 注意食品、饮食卫生及其管理 注射疫苗：保护率达88%-94% ，保护期（35）年。 目前国内外正在研究并取得较大进展的疫苗可分为二类，一种是鼠脑纯化疫苗，另一种是细胞培养疫苗；另外还有减毒活疫苗和基因重组疫苗也在研究中。,预防措施 1、坚持平时的卫生消毒制度，对实验动物的房舍、用具等定期进行消毒，杜绝各种微生物的侵入。 2、坚持在有生产许可证的单位购买动物，引进外来动物要进行严格的隔离检疫，只有确认健康后才能与原设施内动物合群或投入使用，
34、不得从疫区引进动物。,3、外环境定期进行杀鼠没蝇的工作，防止野生动物和昆虫进入动物饲养室。 4、工作人员定期进行健康检查，患有传染性疾病的人员不得从事实验动物工作。 5、开展经常性的卫生检疫，及时发现疫情，及时采取相应的防治措施。,IVC饲养系统的操作与管理,IVC ：individual ventilated cages， 独立换气笼盒 每个饲养盒作为一个独立的单元，完全密封，有独立的进出风管道，饲养操作在超净工作台中进行。IVC饲养笼具能确保动物饲养环境达到SPF级、防止交叉感染。IVC饲养系统包括三个主要部分：IVC、饲养架和主机，必须匹配超净工作台。 IVC饲养系统具有占地面积小、能源
35、消耗低、对饲育操作和试验人员的健康保护好，能够有效的提高动物的存活率，操作简便等优点。,（一）、概述,（二）IVC饲养操作,1、人员的进出： 在准备间换上消毒好的衣服、鞋子，戴好帽子、口罩、手套后，才能进入。 2、笼具的进出 笼盒用清水洗涤后，放入渡槽浸泡消毒30分钟以上，沥干水，待用前置于洁净操作台，紫外线照射30分钟，备用。带过滤帽的笼盖洗涤后，置于传递窗，紫外线照射30分钟，取出，置于洁净操作台，备用。 换出的笼具从缓冲间运出去，送洗涤间分类洗涤。,3、垫料、饲料、饮水的进出 垫料、饲料、饮水都必须经过消毒处理后，才能进入饲养间，且在超净工作台打开外包装，备用。 4、外购动物的进入 在实
36、验室门口，用配制好的消毒液在外购动物的外包装上喷雾。通过传递窗内传人。置入超净工作台。解开外包装，取出内包装。按动物更换笼盒的操作规程将动物从内包装内取出，更换到笼盒内，加水，加料。 挂好笼卡，上架。并做好记录。,5、添水、添料、更换笼盒 从IVC笼架上取下鼠盒，置于超净工作台，用配制好的消毒液在笼盒外表喷雾，双手在准备好的消毒液里浸泡一下，打开笼盖。 将动物从鼠盒提出放入已消毒好的鼠盒，盖好笼盖，换上灌好水的饮水瓶，添加饲料，盖好外盖。 放回相应的笼位。完毕清洁台面。,6、注意事项： 、要打开笼盖，暴露动物的一切操作必须在超净工作台完成。 、要经常检查通风管道是否畅通，主机是否正常运行。 、
37、从笼架上取下笼盒后，时间不能过长，如果时间长，要打开生命窗。 、在停电时，要记得将所有笼盒的生命窗打开。,豚 鼠,一、行为和习性1、性情温驯，胆小怕惊2、生性好动，不善跳跃3、喜群居，喜干燥清洁环境4、日夜采食，草食性，对变质食料敏感，有食粪癖,二、生理学特性,1、晚成性动物 指胚胎发育完全，出生时眼耳张开，有牙齿，有被毛，并能站立行走寻找食物的动物。 2、性早熟 2月龄排卵、5月龄左右性成熟 3、全年多发情，妊娠期68d，年产3-5胎 4、自身不能合成vitc（缺乏左旋葡萄糖内酯氧化酶） 5、抗缺氧能力强(比小鼠强4倍，比大鼠强2倍） 6、对抗生素敏感 7、过敏反应灵敏，接受致敏物质的反应程
38、度，豚鼠免犬小鼠,笼具 有传统的水泥或土制池养方式（周边高40cm）、抽屉式的箱子、铁丝网底和实底的笼盒等，各有优缺点。,不锈钢冲洗豚鼠笼,独立送风隔离笼具（IVC）豚鼠,豚鼠自身体内不能合成维生素C，必须从饲料中获取，每日需维生素C为：4-5mg/100g体重，在生长、妊娠、泌乳期间和受到应激时，实际需要量为每日15-25mg/100g体重。维生素的缺乏常导致动物跗肘关节肿胀，行动困难，体质衰弱，并易感染细菌性肺炎、急性肠炎和霉菌性皮炎等。,维生素C的投喂: 1)可通过内含维生素C的颗粒料， 2)也可溶于饮水中（1g/L，新鲜配制，由于考虑氯和金属离子对维生素C的影响，用蒸馏水和去离子水配制
39、），对于屏障系统的豚鼠可用0.22m过滤系统抽 滤维生素C溶液灭菌。 3)或投喂含维生素的新鲜多汁的绿色蔬菜、水果（柑橘 属水果）等办法（每只种鼠日喂200 250 g）.由于维生素C易氧化不稳定，饲料不能久放，贮存的地方应干燥凉爽。豚鼠对变质饲料特别敏感，常因此减食或废食。霉变或含杀虫剂的草、蔬菜和饲料常可引起中毒，甚至致死，腐烂的蔬菜和水果一律禁止饲喂。,青紫兰兔,新西兰兔,大耳白兔,家 兔,一、行为和习性1、昼伏夜动，喜独居穴居。2、性情温驯，胆小怕惊。3、喜磨牙啃木啃土扒穴。4、食粪癖，但好清洁。5、耐寒不耐热，耐干不耐温。6、草食性，喜青粗饲料。,二、解剖与生理学特性,1、胸腔由纵膈
40、分成互不相通的左右两部 2、食管由三层肌肉构成（其他动物两层），盲肠特大，盲肠起始部膨大成圆小囊，胰腺分散，质、色均似脂肪，胰导管开口于十二指肠后1/3处 3、心外有心包膜,4、减压神经独立分支，交感神经与迷走神经合并为迷走交感干。 5、左肺2叶，右肺4叶，腹式呼吸为主 6、甲状旁腺分散，位置不固定，甲状腺相对固定。 7、生长发育快，繁殖力强，妊娠期31d，刺激性排卵，假妊娠. 8、饲料粗纤维要求量高，对外源胆固醇吸收率高（75-90%） 9、体温调节稳定，主要以呼吸散热，体温变化灵敏，发热反应典型，恒定染色体2n=44,笼具一般为钢丝笼。产仔做窝用产箱。食槽为固定于兔笼上、可以转动或自由取下
41、的簸箕式食槽，也可用陶瓷食盆。饮水器有乳头式饮水器、陶制瓷碗、倒置玻璃瓶等。,不锈钢繁殖兔笼,不锈钢冲洗式实验兔笼,不锈钢干养式实验兔笼,独立送风兔隔离笼具（IVC）,豚鼠、兔的饲养管理,目前，豚鼠、兔一般为普通级，环境要求应符合相应等级国家标准：普通环境： 饲育、生产室温度恒定为：16-28； 动物实验室：16-26 ，日温差小于4 屏障环境： 饲育、生产室：20-26 ，日温差小于4 ； 动物实验室： 20-26 ，日温差小于3；相对湿度为40%-70%，室内保持安静、清洁、干燥、通风。,（一）一般饲养管理,2、饲料和饮水 采用全价颗粒饲料，须达到国家规定的营养需要和卫生质量标准，并满足不
42、同阶段的营养需求，饲料配方稳定，还要特别注意粗纤维的含量。对于普通级兔可加喂洗净、消毒、晾干的新鲜蔬菜或青草。喂食要每天定时定量，上午、下午各1次，下午可稍多喂，喂量以每天刚好吃完为宜。加喂饲料用料铲加料，不用手接触，掉在地上的不要。,3、卫生、消毒 严格执行卫生消毒防疫制度。引进动物前，房舍清扫，熏蒸消毒，对笼具、饲具清洗、消毒。进入饲养间必须更换衣服、鞋帽、口罩，双手经消毒液浸泡，戴上无菌手套。饲养过程中，每两周消毒1次笼具和料盒。水具每天清洗，每周消毒1次。每次操作完后用蘸有消毒液的抹布擦拭台面、笼架（较易粘上兔毛，细菌易繁殖）、门把手，地板的污物、垫料、饲料残渣清扫干净，并用消毒液拖地
43、。保持室内干净、干燥。室内出风口初效过滤膜每周清洗一次，用消毒液浸泡，拧干重新装上。 托盘、水洗板容易结尿石，每周用尿石洗净剂浸泡，再用刷子刷洗。,4、观察、记录 饲养员一上班就要首先检查水、电、换气、空调等设施的运转情况，登记好温度、湿度，对于屏障系统还要注意观察压差，然后观察：饮水、饲料情况，动物的健康状况（特别注意粪便是否正常）。如有异常，应迅速处理，并报告负责人，认真做好各种记录。,发现动物尸体时，将尸体放入塑料袋中，封口，用消毒液喷雾，再用专用容器运至室外，送检查室检测。,犬,一、行为和习性1、喜与人为伴。2、好运动，雄性好打斗，有合群欺弱的特点。3、喜啃咬骨头，以利磨牙。4、肉食性
44、动物，但已驯化为杂食性。5、运动敏捷，适应环境能力强。,二、生理学特性,1、内脏器官功能酷似人类，呕吐反应敏感。 2、春秋单发情动物，年产12胎。 3、嗅觉、听觉十分灵敏，味觉不够灵敏，视觉不灵敏，色觉极差，为红绿色盲。 4、分4种神经类型，即多血质、粘液质、胆汁质、忧郁质、各型性格不同。 5、分5种血型：A、B、C、D、E，只有A型血有抗原性，可引起输血反应。,三、常用品种,小猎兔犬，又名毕格尔（Beagle）犬，是猎犬中体型较小的一种，成年体重710kg，性情温驯，性成熟早，繁殖力强，为世界公认的实验用品种，广泛应用于生物医学各研究领域，特别是药理学研究。我国养殖的犬品种繁多，如华北犬、西
45、北犬、中国猎犬、西藏牧羊犬、狼犬等，华北犬和西北犬适合作烧伤、放射损伤研究；狼犬适用于胸外科、器官移植研究。,非人类灵长类动物,灵长类动物是人类的近属动物，其进化程度高，在组织结构、生理和代谢机能等方面与人类具有高度的近似性，是极为珍贵的实验动物，下面以恒河猴为代表介绍灵长类动物的生物学特性。恒河猴在动物分类学上属于哺乳纲、灵长目、猴科、猕猴属的动物。,（一）、恒河猴的生物学特性,1、体型中等且匀称，背毛棕黄色，胸腹部、腿部为浅灰色。 2、四肢粗短，具五指，拇指与其他四指相对，指（趾）端的爪部变为指甲。 3、乳房1对，位于胸部。 4、杂食动物，以素食为主。 5、群居性强，每群猴均有1只最强壮的
46、雄猴为“猴王”。 6、具发达的大脑，有大量的脑回和脑沟。 7、体内缺乏vitc合成酶，不能在体内合成vitc。 8、雌猴有月经现象，月经周期平均为28d，在交配季节有“性皮肤”现象。,猪和小型猪,巴马小型猪和西藏小型猪,一、生物学特性和解剖生理特点 1猪和人的皮肤组织结构很相似，上皮修复再生性相似，皮下脂肪层和烧伤后内分泌与代谢的改变也相似。 2猪的血液学、血液化学各种常数也和人近似。,实验动物的生物学特点及应用选择,常用实验动物的主要特点、规格及应用范围,实验动物的生物学特点及应用选择,常用实验动物的主要特点、规格及应用范围,常用实验动物的主要特点、规格及应用范围,动物实验的争端,1、动物权
47、利运动的兴起 2、动物福利法的诞生 3、实验动物的原则,质疑：,用动物做实验是否道德？牺牲部分动物的利益和生命而造福人类是否合理？,首先，生命科学是一门实验科学，想在相关领域内完全排除动物实验是不可能的，实验动物的生理或病理过程较其它模型更接近于人类，而探索和解决人类相关生命过程的奥秘及难题是各国学者最为关注的，相关的研究结果可以为人类谋取更大的福利。,另一方面，动物权利论、动物福利法要求从爱护动物的立场出发，对试验动物的饲养和实验处理必须符合伦理道德，并尽可能减轻动物在试验过程中的痛苦，在试验结束后应及时施以安乐死。其实，上述要求也正是动物实验的科学性、重复性所要求的。现在，国外发表的论文往
48、往都必须注明动物实验设计得到了动物实验委员会的许可；而国内也开始了这方面的尝试。,只要是为了生存，非洲狮捕食可爱的非洲瞪羚如同我们享受牛排一样正常。如果仅仅是为了娱乐，则涉及伦理问题了。,动物福利法的诞生,英国： 1876年禁止虐待动物法 1986年科学实验动物法动物福利学会 美国： 1966年动物福利法 1970、1976、1985修订我国：2006年 国家科技部关于善待实验动物的指导性意见,1 实验动物福利的概念及内涵,动物福利的概念 实验动物福利是指实验动物在肉体与心理上处于健康、康乐以及舒适的状态，包括实验动物养殖及动物实验过程中的福利。 动物福利的宗旨 要求科学家在使用动物进行科研、
49、教学、测试前，应先充分考虑到各种替代手段，以尽可能减少动物所受到的疼痛和痛苦。,人类在进行实验动物生产活动和动物实验时不可避免地要求实验动物忍受一定程度的恐惧和疼痛等，但实验动物同人类一样是血肉之躯，同样有感知、恐惧和情感的需要。动物跟我们不一样的是，他们无法用复杂的人类语言与我们沟通。实验动物是经人工培育的，相对人来说，实验动物是一个“弱势群体”。因此，人类进行实验动物科学研究时应顾及到实验动物福利问题。,国际上普遍认可的实验动物福利为“五大自由”： 1.享受不受饥渴的自由 2.享受生活舒适的自由 3.享受不受痛苦伤害和疾病威胁的自由 4.享受生活无恐惧和悲伤感的自由 5.享受表达天性的自由。,实验动物福利并不意味着就绝对地保护实验动物不受到任何伤害，而是在兼顾科学问题探索和在可能的基础上最大限度的满足实验动物维持生命、维持健康和提高舒适程度的需要两方面，我们在进行与实验动物相关的活动时，要本着为科学服务的目的尽可能地减少给实验动物带来的伤害。,
