1、Qiagen 基因组提取试剂盒中文操作说明QIAamp DNA Blood Mini Kit 简介：QIAGEN 公司出品的 QIAamp DNA Blood Mini Kit 适用于使用微型离心机或真空处理从全血、血浆、血清、血沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。该试剂盒可处理带有 EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本，样品量可达 200l。整套基因组的操作时间约为 2040 分钟，一般可从 200l 健康全血中获得 412 g DNA，洗脱体积可在 50200l 范围。抽提原理：样品中的 DNA 可以特异性结合到 QIAamp 的硅胶膜上，通
2、过两次洗涤可以将 PCR 抑制剂，如：二价阳离子和蛋白完全去除，最后结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液进行洗脱收集。开始前的注意事项：1. 所以的离心步骤需要在室温（15-25）进行2. 如果样品中含有的基因组当量少于 10000，请添加载体DNA（carrier DNA）3. 200l 全血样品可以得到约 3-12gDNA开始前的准备工作：1. 将样品平衡到室温（15-25）2. 将水浴或是金属浴加热到 56，以备第 4 步使用3. 将 Buffer AE 或蒸馏水平衡到室温，用于第 11 步的洗脱4. 确保 Buffer AW1、AW2 以及 QIAGEN 蛋白酶已经按照说明配
3、置完毕5. 如果在 Buffer AL 中出现沉淀物，请在 56孵育使其溶解操作步骤：1. 吸取 20l QIAGEN 蛋白酶（或者蛋白酶 K）至 1.5ml 离心管的底部。2. 加入 200l 待提取基因组的样品至离心管中。可以加入不超过 200l 的全血、血浆、血清、血沉棕黄层，或者溶于 200l PBS 中不超过 5*106 的淋巴细胞。如果样品体积不足 200l，请使用 PBS 补足。前两步的顺序也可以调换，即将蛋白酶加入样品中，但此时需要注意充分混匀。3. 加入 200l Buffer AL 至样品中，涡旋振荡 15s 混匀。完全混匀以得到均一化的溶液对于保证样品的充分裂解非常重要如
4、果样品体积大于 200l，请等量增加蛋白酶和 Buffer AL的量。大体积样品推荐使用 Midi 或 Maxi 试剂盒。操作时注意，请不要将 QIAGEN 蛋白酶（或蛋白酶 K）直接加入Buffer AL 中。4. 56孵育 10min。DNA 得率在该条件下已经达到最大值，延长孵育时间不会进一步提高得率。5. 快速离心，去除残留在 1.5ml 离心管盖子中的液滴。6. 加入 200l （样品等体积）的乙醇（96-100%） ，涡旋振荡 15s 混匀。振荡完毕后，快速离心，去除残留在 1.5ml 离心管盖子中的液滴。7. 将步骤 6 得到的混合物转移至 QIAamp Mini 离心管柱( 在
5、一个 2ml 的收集管中)注意不要弄湿边缘的环。扣上盖子（在离心过程中关闭每个离心管的盖子以防止离心过程中产生气溶胶） ，6000g（8000rpm，选择低速离心的目的是减少噪音，使用更高的转速不会影响 DNA 最终的得率和纯度，在样品为血沉或者淋巴细胞时，推荐使用最高转速以防止堵塞）离心 1min。将 QIAamp Min 离心柱放入一个新的干净2ml 接收管中（已提供） ，将滤液连同使用过的收集管丢弃。8. 小心打开 QIAamp Mini 离心柱，加入 500l Buffer AW1（注意不要将边缘环弄湿） 。盖紧盖子，6000g（8000rpm）离心 1min。将 QIAamp Min
6、i 离心柱转移至一个新的 2ml 收集管中（已提供） ，将滤液连同使用过的收集管丢弃。即使最初加入的样品量大于 200l，此步也不需要增加 Buffer AW1 的用量。9. 弃滤液，小心打开 QIAamp Mini 离心柱，加入 500l Buffer AW2（注意不要将边缘环弄湿） 。盖紧盖子，最大转速（20000g；14000rpm）离心 3min。10. 推荐步骤：将 QIAamp Mini 离心柱转移到一个新的 2ml收集管（试剂盒里未提供，可以使用我们平时使用的 1.5ml离心管，将盖子剪掉，作为收集管） 。最大转速离心 1min。该步骤可以帮助降低 Buffer AW2 残留的可
7、能性。11. 将 QIAamp Mini 离心柱转移到一个新的 1.5ml 收集管（未提供） 。小心打开离心柱，加入 200l Buffer AE 或双蒸水（洗脱体积大于 200l 时不适用于 1.5ml 收集管，因为此时离心柱下缘会于洗脱液接触，从而导致在离心过程中可能产生气溶胶；洗脱体积少于 200l 会显著增加洗脱液中 DNA 的浓度，但会降低总的 DNA 得率；对于少于 1g的 DNA 来说，推荐使用 50l 的洗脱液；使用 100l 洗脱液洗涤 2 次与使用 100l 洗脱液洗涤一次的效果差不多） 。室温（15-25）孵育 1min（一般来说，孵育时间延长至5min 可以提高得率） ，然后 6000g（8000rpm）离心 1min。如果继续加入 200l Buffer AE 进行二次洗脱，可以将得率提高约 15%。
