1、 实验四 酶的竞争性抑制作用一、目的要求：通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解二、实验原理：与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。COOH COOH CH2 琥珀脱氢酶 CH + 甲烯蓝 + 甲烯白CH2 CH COOH COOH三、实验材料 1、 试剂
2、：（1） 0.2 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 23.618g，用蒸馏水配成约 600ml ,用 5mol/L NaOH 调 pH 至 7.4，再加水至 1000ml（2）0.02mol/L 琥珀酸：用 0.2 mol/L 琥珀酸稀释 10 倍（3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸 22.92g ，用蒸馏水配成约 600ml ，5mol/L NaOH 调pH 至 7.4，再加水至 1 000ml（4）0.02mol/L 丙二酸：用 0.2 mol/L 丙二酸稀释 10 倍（5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取 0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至
3、200ml(6) 0.02%甲烯蓝 （7）液体石蜡2、器材（1）小试管及试管架 （2）吸量管（10ml *1）及滴管（ 8 支） （3）研钵四、实验方法1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠 、猪等）心肌 1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 10ml ，磨匀，备用2、取小试管 5 支并编号，按下表操作：试剂 管号 1 号 2 号 3 号 4 号 5 号心肌匀浆 15 15 15 15 0.2M 琥珀酸 5 5 5 0.02M 琥珀酸 5 50.2M 丙二酸 5 50.02M 丙二酸 5 蒸馏水 5 20甲烯蓝 2 2 2 2 2 液体石蜡 5 5 5 5 5甲烯蓝褪色情况加入液体石蜡后时间记录甲烯蓝褪色时间记录所用时间：加入液体石蜡后，室温放置。观察各管甲烯蓝褪色情况。五、结果处理记录各管甲烯蓝褪色情况，并解释结果。六、注意事项1. 心肌要用新鲜的2.注意各种试剂加入的顺序，混匀各管已加入的试剂后马上加入液体石蜡3.及时、仔细观察颜色变化4观察结果过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使甲烯白重新被氧化变蓝七、思考题在此实验基础上，如何设计实验来观察“增加底物浓度，酶的竞争性抑制作用可以降低或消除”的现象？
