1、微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。2、掌握无菌操作基本环节。二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。三、实验材料1、恒温培养 。2、接种环、 、 、 。3、培养基（上 实验 的）。4、 菌、 菌、 菌、 菌。、方法步骤（一）接种的操作1、 接
2、种（接 菌）（1）操作 ， 75% ，待 后 。（2）将菌种 和 握在 和其它 currency1，使 和“菌种的一 上，并fifl 。（3） 将菌种和 的 一，以接种时出。（4） 接种环（”握一样），以 上 将环 灭菌，然后将“ 其 也过灭菌。（5） 的无、和 掌将菌种 和待接 的 或 时出，然后 过灭菌（ 过 ）。（6）将 过的接种环菌种 ，接种环在 或 长菌 的培养基上接 一，其 分 却，然后 菌 ， 从菌种 出接种环。（7） 将 “菌种的接种环另一 待接 。从 上作Z”来 。“时也接种 在培养基的中 一 来作 接种，以 菌种的生长 。（7） 将 “菌种的接种环另一 待接 。从 上作Z”
3、来 。“时也接种 在培养基的中 一 来作 接种，以 菌种的生长 。（8）接种后出接种环 ，上。（9）将接种环 灭菌。接种环， 将 。2、 接种（1） 培养基接 培养基， 法 细菌的生长 性和生化反应的测定，操作方法与 相，但使 上 ，以免培养 流出接菌 后，使接种环和 磨 几以利洗环上菌 。接种后好将 在 掌中 敲打，使菌 分分散。（2） 培养基接种 培养基，菌种是 时，接除 接种环外尚 无菌 或滴 。接种时只需在 旁出,将 通过 , 无菌 菌 注培养 ,摇匀即。3、fl板接种将菌在fl板上 和涂布。（1） 接种 见分离 法。（2）涂布接种 无菌 菌 注fl板后， 灭菌的 在fl板表 作均匀涂
4、布。4、穿刺接种把菌种接种到固 深层培养基中， 法 嫌气性细菌接种或为鉴定细菌时 生理性 。（1）操作方法与上述相，但所 的接种 应挺直。（2）将接种 自培养基中心刺，直刺到接近 ，但 穿透，然后尚原穿刺途径慢慢出。（二）分离的操作方法1、稀释分离法通过不断稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后 一定量注fl板与温度适合溶化了的琼脂培养基混合，这样分散的细菌被固定在原而成单菌落。（1）将 菌或 菌 无菌fi 作菌悬 。（2） 若干 无菌 ，每 盛9ml无菌fi。（3） 1ml 备好的菌悬 ，第一 含“9ml无菌fi的 ，这样就稀释了10倍，也就是10-2。（4）从第一 （10-2） 1ml注第
5、二 含“无菌fi的 ，这样就稀释了100倍，也就是10-2。（5） 样方法操作，直至稀释至10-5-10-6。（6）分别 确 10-5-10-6各稀释度菌 0.2ml加编好号的空无菌fl皿中，一稀释度重复做三个fl皿。（7）将已溶化并 却至45的琼脂培养基倒上述各fl皿 ， 使培养基与菌悬 分混匀，凝固后倒37或38度恒温 中培养24-48时， fl板上菌落生长和分布情况。2、fl板 分离法fl板 分离法是接种环在fl板培养基表 通过分区 而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固 培养基表 多 作 到 ”稀释而达到分离目的。（1）倒fl板 溶化牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒fl板，fif
6、l静待凝。（2）在 光 上 接种环，待 ， 一接种环 菌、 菌混合菌 。（3） 握琼脂fl板稍抬起皿盖，时靠近 周围， 持接种环皿 ，在fl板上一个区域作currency1， 时例接种环与fl板表 成30-40角度 接 ，以腕力在表 作 快的滑动， 使fl板表 破或嵌进增基 。（4） 接种杯，以杀灭接种环上尚残的菌 ，待 却后， 将接种环皿 ，在第一区域 过 的地方稍接 一后， 动90，在第二区域继续 。（5） 后 接种杯， 却后 样方法在其他区域 。（6）全 后，在fl皿 种蜡注明菌种、日 、 别、 。将 个培养皿倒恒温 培养。（7）37 过24-48时培养后 出 。注 菌落的开 、 、 、 、表 、透明度 性状。一 无菌操作环节（1）接种 应保持 ， 洗 ，定 或 。每 使 ，均应 外灭菌。定 接种 作无菌程度的 。（2）进接种 ，应 做好个生工作，在 要工作、工作currency1、“。工作currency1、工作、“只在接种 使 。不穿到其它地方，并要定 、fi。（3）接种的 、三角并fl 应做好 ，注明培养基、菌种的、日 。移接种 的所“物品，均在 70% 干。（4）接种 ， 70% 或 fi，操作过程不离开 不接种工”使 后均需 灭菌。（5）培养 应 fi。
